哺乳类早期胚胎发育阻滞的形成与突破

本文对有关哺乳类(包括人)着床前早期胚胎发育阻滞的形成与突破的研究近况作了概述。早期胚胎发育阻滞一般都发生在最初四个细胞周期中的某个长G_2相阶段,该时期恰好是贮存在胚胎细胞中源自母系的mRNA失活或降解、胚胎细胞自身基因组应该被激活的临界期,胚胎在这时对环境压力非常敏感。过氧化氢类物质在胚胎细胞内高含量累积也是导致发育阻滞的因素之一。早期胚胎的正常发育必须依赖于源自生殖道上皮细胞的信号,这类外源信号被初步认为蛋白质性质。提供某些生长因子,或清除微环境中有害物质等都将有助于 胚胎的正常发育。早期胚胎间的协同作用在体外胚胎正常发育中的正效应已引起人们的重视。     

斑马鱼cdk7和cyclin H基因的原核表达及多克隆抗体的制备与鉴定

构建了两个表达斑马鱼cdk7(基因片段)和cyclinH(基因全长)的重组质粒,分别转化大肠杆菌BL21进行原核表达,所得的CDK7和cyclinH两个融合蛋白均以包涵体形式存在。经SDS-PAGE分离,切下含有目的蛋白条带的凝胶冻成干粉,分别免疫新西兰大耳兔,制备并纯化了分别抗CDK7和抗cyclinH的两个多克隆抗体。经酶联免疫吸附测定、蛋白质印迹分析检测,确定获得了两种具有较高效价的特异性多克隆抗体。免疫荧光组织化学结果显示,CDK7和cyclinH这两个蛋白质均普遍存在于斑马鱼胚胎动物极的各个细胞中。     

兔输卵管上皮细胞解除大鼠早期胚胎发育阻滞的研究

本研究利用兔输卵管上皮细胞,与异种动物大鼠的受精卵共培养,结果大量出现突破２细胞发育阻滞的现象。体外受精卵和体内受精卵的２细胞发育阻滞突破率分６２％和７３％;利用ＲＯＥＣ条件培养液培养大鼠的体外受精卵,２细胞发育阻滞的突破率达６８％,且能顺利发育至桑椹胚和囊胚。将ＲＯＥＣ直接培养在含＾３５Ｓ－甲硫氨酸的ＣＺＢ培养液中,经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳及放射自显影,发现在该条件培液中出现了分子量分别为１     

兔输卵管上皮细胞解除大鼠早期胚胎发育阻滞的研究

本研究利用兔输卵管上皮细胞(ROEc), 与异种动物大鼠的受精卵共培养,结果大量出现突破2细胞发育阻滞的现象。体外受精卵和体内受精卵的2细胞发育阻滞突破率分别为62%和73%;利用ROEC 条件培养液培养大鼠的体外受精卵,2细胞发育阻滞的突破率达68%,且能顺利发育至桑椹胚和囊胚。将ROEC直接培养在含~(35)S-甲硫氨酸的CZB 培养液中,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及放射自显影,发现在该条件培液中出现了分子量分别为135Kd,68Kd,55Kd,51Kd 和44Kd 由ROEC 分泌的多肽,其中68 Kd 区带最显著,而135 Kd区带非常弱。用(125)~I-酰化剂标记示踪发现,与ROEC 共培养24 h 的大鼠胚胎透明带上含有68Kd 蛋白,并发现55 Kd 蛋白与透明带结合的痕迹。这些蛋白很可能就是胚胎发育调控由母型向合子型过渡并突破早期发育阻滞的关键因子,在功能上似无种属特异性。     

组蛋白在胚胎早期发育转录调控中的作用

组蛋白是一组等电点大于１０．０的碱性蛋白质,在进化上十分保守。真核生物的染色体上主要含有５种组蛋白,即核心组蛋白Ｈ２ａ、Ｈ２ｂ、Ｈ３、Ｈ４及连接组蛋白Ｈ１。核心组蛋白八聚体、蛋白Ｈ１和２００ｂｐ的ＤＮＡ共同组成了染色体的基本单位——核小体。组蛋白不仅...     

p38在小鼠着床前胚胎中的表达

探讨p38 MAPK在小鼠着床前胚胎期的表达图式,并对其作用作初步分析.用免疫印迹法分析胚胎全裂解物中的p38蛋白.为考察p38在着床前发育中的作用,在胚胎培养液中添加p38专一性抑制剂SB203580.此外对同位素标记的胚胎作双向电泳分析,示踪ZGA(zygotic gene acti-vation,合子型基因激活)标志物TRC的表达情况.在卵母细胞中能检测到低水平的p38蛋白,而在合子中的检测度更低,表明p38是贮存于卵母细胞内的母型转录物,自减数分裂期随其它母型转录物一起逐步降解.到2细胞中期p38蛋白的表达量开始恢复,在4细胞时达到顶峰,在8细胞时又跌落.p38蛋白在2到4细胞期的表达量上升提示该蛋白在小鼠着床前胚胎发育中可能发挥一定作用.经与p38抑制剂SB203580共培养后的2细胞中期胚胎中仍能清晰检测到TRC,因而以TRC为标志的ZGA对SB203580不敏感.SB203580同样不能阻止胚胎发育到桑椹胚期.     

小鼠着床前胚胎发育中调控因子的时序表达及功能

哺乳动物着床前胚胎发育最基本的问题之一是高度分化的卵母细胞如何过渡到全能性的卵裂球。这一转换过程受到了多种调控因子正或负的调控作用,这些特定调控因子在着床前胚胎发育过程中呈现出较为显著的时空表达特征,它们对早期胚胎的进一步正常发育有重要的作用。研究这些调控因子在着床前胚胎发育中的表达模式和调控机制,将有助于我们对早期胚胎发育机制的进一步了解。作者主要对近些年来有关生长因子与细胞因子（如：PAF、IL－1、IGF、MIF）以及特定转录因子（如：SP1、TBP、mTEF、eIF、myc、c-jun等）在小鼠着床前胚胎发育中的时空表达及其相应功能的研究做一简要介绍。