从酵母基因组测序得到的启示

从酵母基因组测序得到的启示高向东李育阳（复旦大学遗传学研究所,上海２００４３３）关键词酵母基因组计划孤儿基因基因置换反向遗传学酵母基因组计划从１９８９年１月开始启动,经历了近七年时间,已于１９９６年１月测完了酿酒酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒ...     

地衣芽孢杆菌的温和性噬菌体——Ⅱ.DNA分子生物学特性的研究

增殖Blp7、Blp11、Blp16这一类群噬菌体并抽提其DNA,用电镜法测定噬菌体DNA长度为62.75±1.47 kb,并证实它们与λ噬菌体相似,含有一个能使DNA环化的粘性末端。DNA经碱部分变性后,电镜观察可以识别Blp 7 DNA分子的R端与L端。用限制性内切酶EcoR1、BamHI酶切Blp7及Blp16 DNA,经琼脂糖凝胶电泳后,观察到DNA分子的多态性。     

半乳糖基因的高频转导实验

1975年我们从低频转导子中分离到双重溶原菌Escherichia coli K12 F_2—建立了半乳糖基因的高频转导实验。经过七年的教学实践,证明本实验方法简便,重复性好,成功率高。现介绍如下,以便交流。     

噬菌体Charon4A增殖条件的研究

噬菌体Chmon 4A是噬菌体λ经过改建而成的,可用作基因工程的载体。由于这种噬菌体载体与相应的宿主菌Escherichia coil DP50supF一起成为EK_2级安全宿主载体系统,同时     

基因拷贝数与染色体位置对酵母表达乙肝病毒融合表面抗原SA-28基因的影响

应用ＦＬＰ重组酶介导的染色体定点整合技术,将带有不同拷贝数的乙肝病毒融合表面抗原ＳＡ－２８基因表达单元的质粒整合在酵母不同的染色体位点,并测定了ＳＡ－２８基因的表达情况,初步研究了基因拷贝数与染色体位置对酵母表达外源基因的影响。结果表明ＳＡ－２８基因在ＨＩＳ３位点整 合时的表达水平随基因拷贝数的增加而提高,遵循基因剂量效应;在某些染色体位点整２合时,插入方向对其表达有不同程度的影响,呈现出明显的染     

人纤溶蛋白酶原K5在毕赤酵母中的表达及其生物活性鉴定

化学合成人纤溶蛋白酶原K5 (pK5 )的编码基因并克隆到毕赤氏酵母表达系统的分泌型载体pPIC9K上 ,将重组质粒经BglⅡ单酶切后电转化PichiapastorisGS115菌株 ,筛选出对G4 18有高抗性和在MM培养基上生长缓慢的转化子。经摇瓶发酵和甲醇诱导后 ,用 15 %SDS PAGE检测发酵上清液 ,表明有重组蛋白pK5的高表达。经CM-Sepherose离子交换柱和Superdex 75分子筛层析两步分离纯化 ,获得了纯度达到 98%的rpK5。用MTT方法检测的结果表明 ,纯化的rpK5可显著地抑制人血管内皮细胞的生长     

酿酒酵母位点特异性DNA切离及定点整合的研究

酿酒酵母２μ环的ＦＬＰ－ＦＲＴ位点特异性重组系统由ＦＬＰ重组酶和ＦＲＴ重组位点所组成。将ＦＬＰ基因置于受半乳糖调控的酵母ＧＡＬ１０启动子控制下,在半乳糖诱导下实现了酿酒酵母染色体上两个顺向排列ＦＲＴ位点之间ＤＮＡ序列的切离;并将一个含有ＦＲＴ重组位点的环状质粒整合到酿酒酵母染色体上预先设置的一个ＦＲＴ重组位点上,实现了染色体定点整合。这个由ＦＬＰ重组酶催化的位点特异性重组过程具有重组效率高和重组位     

外源基因在酵母中的表达

随着基因工程研究的发展,至今已建立了不少系统可以用来表达外源基因。酵母系统就是其中最常用的系统之一。酵母作为外源基因的表达系统的好处在于:①酵母是一种传统的工业微生物,广泛被用于酿酒和食品工业中。它不会产生毒素,因此用它来表达医药工业和食品工业上有用的蛋白质,极易被人们所接受。②酵母是一种真核生物。尽管这是一种低等的真核生物,但它仍具有一般真核生物的特点。在基因工程中需要表达的外源基因多数来自人类或其他真核生物。要使表达产物具有生物活性常常需要对表达产物进行加工。酵母基本上具备这种能力。因此用酵母表达的产物生物活性要比原核生物表达的好。③酵母的遗传学