人催乳素受体胞外区蛋白的原核表达及纯化

目的:建立人催乳素受体的原核表达系统,并在大肠杆菌中获得表达。方法:由RT-PCR获得人催乳素受体(human prolactin receptor,hPRLR)胞外区氨基酸的编码序列,扩增并通过酶切位点修饰后克隆至pMD18-T载体,经测序正确后,切下编码序列连接到重组表达载体pGEX-4T-2中,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),用IPTG诱导重组工程菌表达,使用谷胱甘肽偶联的GSTrapFF柱亲和层析纯化重组蛋白。结果:重组菌株可以表达GST-hPRLR融合蛋白,用免疫印迹反应鉴定纯化的融合蛋白,在相对分子质量为37.6×103处有一条带。结论:利用大肠杆菌表达系统获得了较高纯度的GST-hPRLR融合蛋白,为进一步研究催乳素受体的功能和制备特异性的抗体奠定了基础。     

抗菌肽体外对结核杆菌的作用初探

将结核杆菌接种于含抗菌肽的苏通氏培养基中 ,在接种后不同时间内取样接种于罗氏培养基上 ,观察结核杆菌在罗氏培养基上的生长情况 ,初步探讨了抗菌肽 (CecropinB)对结核杆菌标准株H3 7RV的作用。结果显示 ,接种 10天后在罗氏培养基上结核杆菌对抗菌肽敏感。说明在体外培养中 ,抗菌肽有一定的抗结核杆菌的作用     

拟南芥阿拉伯糖-5-磷酸异构酶的原核表达、纯化及酶催化特性

阿拉伯糖-5-磷酸异构酶(Kds D)是2-酮-3-脱氧辛糖酸(KDO)生物合成途径的第一个关键限速酶,通过无缝克隆技术将拟南芥Kds D基因构建至原核表达载体p ET-HTT,经过IPTG诱导,在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了大量重组蛋白的可溶性表达;表达产物经Ni-NTA亲和层析和分子筛层析(SEC)方法进行酶蛋白的分离纯化步骤,得到纯度85%以上的高纯度酶;分子筛层析结果发现纯化后的目的蛋白Kds D在溶液中主要以多聚体、二聚体和单体形式存在,这同微生物来源Kds D酶在溶液中以四聚体形式存在很大差异;进一步使用Western blotting和MALDI-TOF MASS技术对纯化的蛋白进行鉴定;测定了拟南芥Kds D酶学性质,证明该酶催化反应的最适p H值为8.0,最适作用温度为37℃,各种金属离子在低浓度均对酶活性存在不同程度的抑制作用,其中以Co~(2+)、Cd~(2+)对酶活性的抑制作用最强,而5 mmol/L金属螯合剂EDTA对酶有激活作用。此外,以阿拉伯糖-5-磷酸(A5P)为底物时,拟南芥Kds D酶动力学常数Vmax和Km值分别为0.18 mmol/(L·min)、0.16 mmol/L,比较发现该酶与底物的亲和性高于大肠杆菌Kds D。以上研究结果为Kds D蛋白结构与功能及其在新型抗生素研制领域中的工业化应用奠定了基础。     

融合蛋白CTP-SOD在毕赤酵母中的表达、纯化及抗氧化能力

超氧化物歧化酶(SOD)是一种在生物界广泛存在的抗氧化酶,在抗衰老、抗肿瘤、抗免疫疾病和电磁辐射上都起着重要的作用。本实验利用含有细胞质转导肽(CTP,一种能够携带外源大分子穿过细胞膜,定位于细胞质的短肽)基因序列的特异引物,以人总RNA反转录产物为模板,扩增出了CTP和人铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn SOD)的融合基因。运用毕赤酵母表达系统成功表达了具有活性的CTP-SOD融合蛋白。CTP-SOD预处理HeLa细胞后,明显提高了邻苯三酚(Progallol)诱导氧化胁迫下HeLa细胞的存活率,和对照组野生型SOD相比具有显著性差异。结果表明,CTP-SOD融合蛋白比野生型SOD更容易进入细胞,具有更高效的抗氧化功能。     

土壤水势对水曲柳幼苗水分生态的影响

采用根区渗灌控水技术,将土壤水势长期控制在0～-20kPa(W1)、-20～-40kPa(W2)、-40～-60kPa(W3)、-60～-80kPa(W4)、-80～-160kPa(W5)范围内,系统地研究了不同土壤水势条件下水曲柳幼苗的蒸腾过程、吸水过程、根叶水势13动态过程及SPAC体系的水流阻力,结果表明,在亚饱和土壤水分状态下(W1),细根水势最高,水分由土壤进入细根的阻力最小,根系吸水速率最高,从而支持了13间强烈的蒸腾作用．在田间持水量土壤水分状态下(W2),细根吸水阻力成倍增加,吸水速率和蒸腾速率显著下降,但尚未改变蒸腾作用13动态过程的单峰模式．当土壤水分在田间持水量状态以下(W3-W5)时,随着土壤水势递降,细根吸水阻力急剧增加至几倍乃至几十倍,根系吸水速率过低,吸水与蒸腾矛盾加剧,叶水势降至很低,气孔关闭,蒸腾作用受到严重抑制,呈现明显的午休低谷．在实验范围内(0～-160kPa),土壤水分对水曲柳幼苗是非等效的,当土壤水分在田间持水量状态以下(<-40kPa)时,水曲柳全光苗发生显著的水分胁迫。     

聚焦水利与抗旱

特殊的自然地理条件,决定了我国是世界上千旱灾害最为严重的国家之一。我国的旱灾发生概率大、范围广、历时长。据统计,从公元前206年到1949年的2155年间,我国发生较大旱灾有1056次,平均每两年发生一次。历史上发生的特大旱灾,往往造成赤地干里、民不聊生,给中华民族带来深重的灾难。新中国成立以后,党和政府高度重视抗旱减灾工作,通过组织实施大规模的水利基础设施建设,使我国抗御干旱灾害的能力大大提高,不仅为解决世界第一人口大国的吃饭问题提供了保障,也为我国改革开放以来的经济发展和社会进步奠定了坚实的基础。     

土壤水势对水曲柳幼苗水分生态的影响

采用根区渗灌控水技术,将土壤水势长期控制在0～-20kPa(W₁)、-20～-40kPa(W₂)、-40～-60kPa(W₃)、-60～-80kPa(W₄)、-80～-160kPa(W₅)范围内,系统地研究了不同土壤水势条件下水曲柳幼苗的蒸腾过程、吸水过程、根叶水势日动态过程及SPAC体系的水流阻力.结果表明,在亚饱和土壤水分状态下(W₁),细根水势最高,水分由土壤进入细根的阻力最小,根系吸水速率最高,从而支持了日间强烈的蒸腾作用.在田间持水量土壤水分状态下(W₂),细根吸水阻力成倍增加,吸水速率和蒸腾速率显著下降,但尚未改变蒸腾作用日动态过程的单峰模式.当土壤水分在田间持水量状态以下(W₃～W₅)时,随着土壤水势递降,细根吸水阻力急剧增加至几倍乃至几十倍,根系吸水速率过低,吸水与蒸腾矛盾加剧,叶水势降至很低,气孔关闭,蒸腾作用受到严重抑制,呈现明显的午休低谷.在实验范围内(0～-160kPa),土壤水分对水曲柳幼苗是非等效的,当土壤水分在田间持水量状态以下(<-40kPa)时,水曲柳全光苗发生显著的水分胁迫.     

患者住院期间握力变化与分析

目的：研究患者在住院期间的握力变化及其影响因素。方法：选取926例于2012年6月1日—2012年12月31日期间在北京友谊医院住院的患者,分析其住院期间握力变化情况及其影响因素。结果：75%的患者住院期间握力降低。外科系统中,无论男性还是女性,中年组和老年组出院时的握力较入院时有所降低（P<0.05）,而青年组患者则无明显差异（P>0.05）。内科系统中,所有女性患者出院握力均低于入院握力（P<0.05）;男性患者中,青年组和中年组出院时的握力低于入院时握力（P<0.05）,但65岁以上老年男性患者的握力在出院时虽较入院时有所降低,但差异无统计学意义（P>0.05）。Logistic回归分析结果显示,住院患者的性别、年龄及其营养风险筛查分值(NRS2002)高低影响其入院及出院握力（P<0.05）,此外出院时的握力还与患者的疾病及其严重程度（所处科别、所患疾病及并发症、住院时长）有关（P<0.05）。患者营养风险筛查得分的高低主要与性别、体重指数、经口的进食途径、入院握力等因素有关（P<0.05）。结论：大部分患者住院期间握力降低,这与患者营养风险筛查得分的高低有关,而合理的营养支持途径是降低患者营养风险筛查得分的主要措施之一。     

喀斯特土壤条件下丛枝菌根真菌侵染对任豆幼苗生物量分配和根系结构特征的影响

喀斯特地区土壤瘠薄,植被恢复困难,根系对幼苗生长发育起重要作用.丛枝菌根真菌(AMF)侵染可促进喀斯特植物干物质积累及提升抗逆能力,但AMF对喀斯特地区主要恢复树种根系侵染机制及影响的研究尚不够深入.本研究以喀斯特地区典型造林树种任豆(Zenia insignis)幼苗为试验材料,利用不同养分条件的喀斯特原生土壤开展盆...     

广西野生稻保护进展与思考

论述了野生稻保护的意义;原生境保护、异生境保存所取得的主要进展;提出存在的问题,以及今后发展的思路。