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新基因PRR11的克隆、原核表达及鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
克隆新基因PRR11的开放阅读框区,构建其原核表达载体,并进行表达检测及鉴定.以Hela细胞cDNA为模板,RT-PCR扩增PRR11基因,克隆入原核表达载体PET-28a中,酶切、测序鉴定确认获得PRR11基因的重组原核表达载体PET-28a-PRR11.然后把PET-28a-PRR11重组载体转化到BL21中,经IPTG诱导蛋白表达,提取细胞蛋白并采用SDS-PAGE和蛋白质免疫印迹法检测目的蛋白的表达情况.结果表明成功扩增了PRR11基因,双酶切、测序鉴定证实目的基因成功克隆到原核表达载体PET-28a中,目的蛋白成功表达.成功构建的PRR11基因的原核表达载体,及PRR11的重组蛋白表达产物,为进一步研究PRR11的基因功能奠定了基础. 相似文献
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目的构建MKRN1的siRNA重组腺病毒载体,并在表达MKRN1的HeLa细胞中鉴定其干扰作用和对端粒酶活性的影响,为探讨MKRN1功能及其与肿瘤关系提供有效工具。方法人工合成靶向MKRN1的siRNA干扰序列,用分子克隆的方法克隆到穿梭载体pSES-HUS上得到pSES-HUS-MKRN1 siRNA,并与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在BJ5183细菌中进行同源重组得到pAdeasy-SES-HUS-MKRN1 siRNA;在HEK293细胞中包装成重组腺病毒,感染表达MKRN1的HeLa细胞株,用RT-PCR法及Western印迹技术检测腺病毒对细胞MKRN1表达的影响,用PCR-TRAP法检测细胞中端粒酶活性的变化。结果成功构建了MKRN1的siR-NA重组腺病毒载体;MKRN1的siRNA重组腺病毒能显著抑制HeLa细胞中MKRN1的表达,并显著上调细胞中端粒酶的活性。结论构建的Adeasy-MKRN1 siRNA腺病毒能有效地抑制HeLa细胞中MKRN1的表达并上调细胞端粒酶活性,从而为进一步研究MKRN1的功能及其与肿瘤的关系提供了有效的新工具。 相似文献
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目的研究Bmi-1对MCF-7细胞阿霉素敏感性的影响及机制。方法阿霉素处理MCF-7/Bmilsi、MCF-7/GFPsi和MCF一7细胞株,M1Tr法检测阿霉素的IC50;DAPI检测阿霉素处理后细胞的凋亡,计算凋亡指数(apoptosisindex,AI);Western印迹检测相关蛋白P53,phospho—Akt(Ser473)(pAkt),totle—Akt(tAkt),Bcl-2,Bax的表达。结果阿霉素处理72h的MCF-7/Bmi.1si组生长抑制率明显高于MCF-7和MCF-7/GFPsi组,MCF-7/Bmilsi组的IC50为(0.15±0.02)μg/ml,而MCF-7组和MCF-7/GFPsi组的IC50分别为(0.87±0.06)μg/ml和(0.81±0.02)μg/ml(P〈0.05)。阿霉素处理48h后用DAPI检测凋亡发现,MCF-7/Bmi.lsi+doxorubiein组可见大量凋亡细胞,而MCF-7+doxorubicin和MCF-7/GFPsi+doxo—rubicin组出现较少的凋亡细胞,MCF-7/Bmi-1si+doxorubicin组凋亡指数明显高于对照组(P〈0.05)。进一步研究发现:MCF-7/Bmi.1si+doxorubicin组与MCF-7+doxorubiein及MCF-7/GFPsi+doxorubiein组相比,P53表达量增加,tAkt表达未发生改变,而pAkt的表达明显减少,另外,Bcl-2表达量减少而Bax表达量增加,差异具有显著性(P〈0.05)。结论沉默Bmi—l基因表达能增加MCF-7细胞对阿霉素的敏感性,增加阿霉素引起的凋亡。 相似文献
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一株携带质粒的人两歧双歧杆菌的分离与鉴定 总被引:2,自引:1,他引:2
目的:分离携带天然质粒的人双歧杆菌.方法:用自制的改良型Blb双歧杆菌选择培养基,从人新鲜粪便分离双歧杆菌,对初步质粒检测阳性的单菌落通过糖发酵试验、(G C)mol%测定和16S rDNA序列分析,进行菌株鉴定.结果:筛选到一株携带天然质粒的人双歧杆菌,编号B200304,在1.0%琼脂糖凝胶上,测得质粒的相对分子质量约为22 kb.通过对该菌株的形态学观察和糖发酵试验等生理生化特征研究,证明该菌株为两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum);HPLC法测得其(G C)mol%为55.6,16SrDNA序列分析进一步证实该菌株为两歧双歧杆菌.结论:分离得到一株携带天然质粒的人两歧双歧杆菌新菌株. 相似文献
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家蚕丝心蛋白H链基因的荧光原位杂交(FISH) 总被引:3,自引:0,他引:3
蚕丝业在国民经济中占有极为重要的地位. 家蚕作为重要的模式生物和生物反应器, 历来为人们所关注. 有关蚕丝基因的结构、表达调控和分子进化都已有较详细的研究和报道, 但关于蚕丝结构基因的分子细胞遗传学基因定位的研究, 几乎尚无报道. 经用荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization, FISH)对家蚕丝心蛋白H链基因(Fib-H)的分子细胞遗传学定位研究结果, 初步将家蚕丝心蛋白H链基因定位在了分子细胞遗传学第25连锁群染色体的端部, 即25~0.0的位置, 从而解决了该基因迄今尚未定位的问题, 并证实了丝心蛋白H链基因在染色体位置上为单一座位. 相似文献
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应用荧光原位杂交技术对家蚕单拷贝的丝胶基因1(Ser-1)及胰凝乳蛋白酶抑制因子13基因(CI-13)进行了分子细胞遗传学的染色体定位.结果表明:Ser—1位于第11连锁群染色体的近端部位置,在粗线期染色体上的相对位置为12.5±1.4;CI-13位于第2连锁群染色体的近端部,在粗线期染色体上的相对位置为8.2±1.2,进而绘制了上述基因在家蚕染色体上的位置模式图——FISH图,并对家蚕染色体的荧光原位技术及其应用进行了探讨. 相似文献