天然除虫菊素的毛细管气相色谱定量分析

本文建立了一种利用毛细管气相色谱从除虫菊提取物中分离六个有杀虫活性菊酯类化合物,并进行定量分析的方法.采用15 m × 0.25 mm i.d.0.25 μm 的DB-1MS石英毛细管柱,柱温从150至242 ℃分二阶程序升温分离除虫菊提取物中六个有杀虫活性菊酯类化合物,以邻苯二甲酸二丁酯为内标物,用FID检测器进行六个化合物的定量分析.该方法线性相关系数为0.9995,高、中、低三个水平的添加回收率分别为99.7%、99.4%和99.3%.     

分泌抗黄曲霉毒素M1抗体的大鼠－小鼠淋巴细胞杂交瘤细胞株的建立及其特性的研究

通过大鼠、小鼠对AFM1－BSA抗体应答的比较,选用应答强的大鼠脾细胞作为亲本细 胞,与小鼠骨髓瘤P3X63一Ag8．653系细胞融合制作杂交瘤。经HAT培液选择和RIA的筛选, 克隆化,最终获得生长良好、稳定分泌抗AFMl抗体的5株大鼠－小鼠淋巴细胞杂交瘤细胞 株。以EusA、竞争结合的RIA进一步证明获得的5个单抗是针对AFMl,并与其衍生物 AFB1有明显的交叉反应。5个单抗亲和力的平衡常数K为10⁹－10¹¹l／M,这表明这些单抗 具有组建检测AF试剂盒的潜在实用价值。     

小鼠抗天花粉蛋白IgE单克隆抗体的制备、分离和鉴定(英文)

天花粉蛋白是中药天花粉的有效引产成份,在应用中它偶尔也引起过敏反应。我们用杂交瘤技术建立了一株分泌抗天花粉蛋白特异性IgE单克隆抗体的杂交瘤细胞系。在实验中,二次免疫的C57 BL/6 J小鼠的肠系膜淋巴结细胞和脾细胞分别被用来同NSI骨髓瘤细胞进行融合。虽然在融合前动物血清IgE抗体效价仅为40～160 PCA滴度,但用肠系膜淋巴结细胞进行的4次融合都产生了IgE杂交瘤。阳性率为1.0-6.7%。对比之下,用脾细胞进行的另外两次融合却没有观察到IgE杂交瘤产生,统计结果说明差异显著(P<0.05)。该IgE单克隆抗体可以在体内和体外诱发大鼠肥大细胞脱颗粒。56℃热处理2小时能使该抗体诱导PCA反应的能力完全丧失,然而却不影响其结合抗原的能力。对该单克隆抗体的特异性的鉴定表明,它可以特异性地识别精制天花粉蛋白和结晶天花粉蛋白上的抗原决定簇。     

用体外免疫的人淋巴细胞建立抗破伤风类毒素的杂交瘤克隆

我们应用破伤风类毒素体外免疫的人扁桃体细胞和人-鼠异源骨髓瘤RF 系细胞进行融合,从中筛选到一株杂交瘤细胞89112—50,并通过克隆化筛选获得了两个亚克隆,其分泌的抗体是抗原特异的,和三种抗原(OVA、TC-S、FYG)都不交叉,分泌抗体的功能也比较稳定,在培养瓶内连续扩增传代13次后,仍维持相当高的抗体分泌能力,在常规传代培养过程中所收集的培养物上清液中抗体的含量平均为69.6μg/ml。     

产生5-氨基乙酰丙酸(ALA)光合细菌生物学研究进展

5氨基乙酰丙酸(ALA)是卟啉、血红素和维生素B12的类似物。ALA作为一种无公害绿色除草剂、杀虫剂、抗微生物药剂、植物生长促进剂及治疗癌症与其它疾病等而备受国外研究者及产业界的关注。本文对ALA光合细菌合成、调节途径、分子遗传学的研究作一简要综述。     

人淋巴细胞的体外抗体诱发及其在杂交瘤中的应用

本文应用手术切除的人扁桃体或外伤脾为材料,在体外诱发了针对不同类型抗原的抗体应答,其中包括羊红细胞、卵白蛋白、破伤风类毒素和乙肝病毒表面抗原的抗体应答,并应用破伤风类毒素体外激活的人B淋巴细胞制作杂交瘤。根据多次融合的结果表明其融合率平均为52.1%,抗体阳性率为15.6%,分泌IgM和IgG抗体的阳性集落孔的比例接近1∶1。我们还研究了体外诱发人淋巴细胞产生抗体的条件,发现细胞类群(在本研究中是采用不同的细胞分离方法)是主要的影响因素,值得进一步研究。目前所建立的体外免疫实验系统,主要是应用尼龙毛柱法富集B细胞,在96孔培养板上加上一定剂量范围的抗原刺激。为了协助淋巴细胞反应,可再加10%的T细胞条件培液或少量丝裂原混合物(LPS0.1μg/ml+PWM1μg/ml)。     

小鼠对天花粉蛋白体内及体外免疫应答的基本特点

C 57 BL/6 J小鼠在应用弗氏全佐剂或铝矾为佐剂结合天花粉蛋白免疫后都能引起抗原特异的IgE类抗体的反应以及其它Ig类抗体的反应;IgE的滴度和总的抗天花粉蛋白抗体的滴度的动态变化趋势基本一致,但并不完全同步。IgE类上升得较IgG等类抗体为慢,但上升的速度要快。脾和肠系膜淋巴结细胞分泌抗体的动态变化也和血清并不完全一致。天花粉蛋白在一定浓度下能抑制小鼠T淋巴细胞在体外的抗原特异的增殖反应和ConA反应。这抑制并不限于增殖过程的启动。补充外源性的IL-2也不能消除这抑制作用。天花粉蛋白加热变性后丧失了对小鼠淋巴细胞的毒性,并能引起经未变性天花粉蛋白体内致敏的小鼠的T淋巴细胞在体外的明显增殖。应用微量的天花粉蛋白为抗原,以及少量的无凝集素的conA条件培液等能在体外诱发致敏的B淋巴细胞产生二次抗体应答。     

光合细菌利用工业有机废水产生5-氨基乙酰丙酸

[目的]利用本实验室筛选的5-氨基乙酰丙酸(5-aminolevulinic acid,ALA)高产紫色非硫红假单胞菌株,以味精、柠檬酸、啤酒和豆制品生产废水作为底物,进行光合细菌利用废水产生ALA并去除化学需氧量(CODcr)的研究.[方法]光合细菌培养温度为30℃,光照强度为3000 Lux,进行乙酰丙酸、甘氨酸、琥珀酸的添加与否和废水灭菌与否的处理,用比色法测定菌液光密度,ALA检测采用Ehrlich'S试剂分光光度检测法.[结果]在不添加乙酰丙酸(levulinic acid,LA)、甘氨酸和琥珀酸的条件下,菌株99-28的菌体生长在72～96 h达到稳定期,ALA产量在96h最高,在4种废水中,味精废水的ALA产量最高,CODcr去除率也最高;添加LA、甘氨酸和琥珀酸显著提高ALA产量,但CODcr去除效果不好.废水不灭菌略微降低99-28菌株的生长和CODcr的去除能力,在添加LA、甘氨酸和琥珀酸的条件下的,ALA产量明显下降.ALA高产突变菌株L-1在有机废水中的生长状况、对有机废水的CODcr去除与菌株99-28表现一致,在不添加和添加LA、甘氨酸和琥珀酸的条件下,突变株L-1的ALA产量明显比菌株99-28高.[结论]本实验室筛选的紫色非硫红假单胞菌株能利用有机废水作为底物产生ALA并降解CODcr.     

非常规酵母细胞工厂合成天然产物

天然产物在医药、美容、食品等行业具有重要的应用,随着人们需求的增加,迫切需要绿色可持续的生产过程.近年来,微生物细胞工厂合成天然产物发展迅速,目前常用的细胞工厂宿主包括大肠杆菌和酿酒酵母.与此同时,非常规酵母因其性状独特,如高密度有氧发酵、耐受温度和pH范围广,底物谱广泛(长链糖、脂肪酸、甲醇等),逐渐成为极具潜力的细...     

抗破伤风类毒素单抗可变区基因的克隆及在大肠杆菌中表达的三种工程抗体

我们采用RT-PCR,从小鼠杂交瘤细胞中扩增并克隆了抗破伤风类毒素(TT)抗体轻、重链可变区,重链Fd区基因,测定了其VH、Vk序列。并在大肠杆菌中表达了Fd片段,ELISA分析的结果表明Fd片段具有抗原结合的能力,但特异性很差。进一步采用SOE,和PCR技术,将VH、VK基因与ScFv连接片段组装成单链抗体(ScFv)基因片段,以及将人重链CH1和Fab基因连接片段组装成Fab基因片段。将它们分别插入含噬菌体fd外壳蛋白3基因的phagem-id pHEN 1中,在辅助噬菌体M 13-VCS作用下,噬菌体表面表达了抗TT的噬菌体单链抗体(phage-ScFv)与噬菌体Fab(phage-Fab),经ELISA检测,表明它们都能与TT特异结合。