含CD自杀基因腺病毒载体的构建及其应用

构建了含ＣＭＶ启动子、大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（ｃｄ）基因的复制缺陷型重组腺病毒载体（ＡｄＣＭＶＣＤ）。经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和ＲＴ－ＰＣＲ鉴定证实,ｃｄ基因已克隆进入ＡｄＣＭＶＣＤ,并在受染细胞中表达。经氯化铯密度梯度离心法纯化的病毒滴度达１×１０１５ｐｆｕ／Ｌ。经１００ｍ．ｏ．ｉ．的ＡｄＣＭＶＣＤ感染的ＨｅＬａ和Ｃ６细胞株在１００μｍｏｌ／Ｌ５ＦＣ处理后,细胞存活率＜２０％。同时也观察到ＡｄＣＭＶＣＤ／５ＦＣ系统有很强的旁杀伤效应,将３．３％的ＡｄＣＭＶＣＤ受染细胞与９６．７％的野生型细胞混合,经５０μｍｏｌ／Ｌ５ＦＣ处理后,＞６０％的细胞被杀死。ＡｄＣＭＶＣＤ／５ＦＣ系统的建立为肿瘤基因治疗的研究提供了新的手段。     

帕金森病裸DNA法基因治疗的实验研究

采用体内裸DNA基因治疗帕金森病(PD)取得显著疗效.将酪氨酸羟比酶(TH)基冈表达质粒与Lipofectin形成的复合物立体定位注射于PD模型鼠纹状体,显著改善了PD鼠的不对付旋转行为.免疫组化证实神经细胞表达了外源TH.     

干扰素的功能表达机理——Ⅹ、pppA_(2′p5′)A_(2′p5′)A抗病毒作用的条件

本工作说明pppA2′p5′A2′p5′A(2′-5′p_3A_3)能使Lpa小鼠细胞对新城鸡瘟病毒或水泡性口腔炎病毒的攻击起一定的保护作用,进一步支持2′-5′p_3A_3抗病毒作用的普遍性。本文还证明在无Ca~(++)存在下,2′-5′p_3A_3于病毒攻击前数小时处理细胞,也能得到抗病毒效果。     

CEA启动子控制HSV-TK基因表达对人结直肠癌细胞的杀伤作用

构建了以CEA启动子控制的HSV-TK基因表达质粒pCEA-TK。转染pCEA-TK的人结肠癌细胞LoVo对GCV的敏感性提高了1300倍。同样条件下,人宫颈癌细胞HeLa对GCV的敏感性仅提高8倍,且对低于血药浓度(20μmol/L)的GCV不敏感。以上结果显示在GCV存在时,CEA启动子控制下HSV-TK基因的表达使CEA阳性的人结直肠癌细胞获得专一性杀伤。此外,DNA片段分析和电镜观察表明GCV诱导转染pCEA-TK的LoVo细胞发生凋亡可能是这个系统杀死肿瘤细胞的机制之一。本工作还讨论了癌胚抗原(CEA)基因启动子用于人结直肠癌专一性自杀基因治疗的可能性。     

人类淋巴细胞干扰素的简易部分纯化方法

干扰素的纯化是一个重要的问题,对临床疗效与应用研究将有很大的推动作用。七十年代,特别是最近几年以来,干扰素的纯化研究取得了重大的进展,人的α及β型干扰素已基本上纯化了,但由于细胞(特别是人白细胞)来源困难以及单层细胞培养产量受限制,故干扰素仍然供不应求。1975年Strander等发现一株“人类淋巴细胞”(Namalwa)可以诱导产生干扰素,因为它来源方便,又可连续传代及大规模悬浮培养,还可在无血     

癌胚抗原启动子用于结直肠癌专一性自杀基因治疗(英文)

以癌胚抗原（ＣＥＡ）阳性人结直肠癌细胞株ＬｏＶｏ及ＣＥＡ阴性细胞株ＨｅＬａ为模型,进行了结直肠癌专一性自杀基因治疗研究。在ＣＡＴ分析验证了ｃｅａ启动子的细胞专一性的基础上,构建了在ｃｅａ基因启动子控制下表达大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶基因（ＣＤ）的真核表达质粒ｐＣＥＡＣＤ。转染ｐＣＥＡＣＤ的ＬｏＶｏ细胞对原药５－氟胞嘧啶（５ＦＣ）的敏感性提高了７５０倍,并存在着明显的旁杀伤效应;同样条件下,ＨｅＬａ细胞对５ＦＣ的敏感性仅提高７．５倍,且对低于血药安全浓度的５ＦＣ不敏感,显示在原药存在下,ｃｅａ启动子驱动自杀基因ＣＤ的表达使ＣＥＡ阳性的结直肠癌细胞获得了专一性杀伤。透射电镜及ＤＮＡ片段化分析证明,诱导细胞凋亡是ＣＤ／５ＦＣ自杀基因系统的作用机制之一。     

白细胞介素2-绿脓杆菌外毒素融合基因的克隆及高效表达

利用聚合酶链式反应和寡核苷酸介导的定向诱变技术构建了白细胞介素2-绿脓杆菌外毒素IL2-PE40、IL2-PE40KDEL、IL2-PE66~(4Glu)和IL2-PE66^4GluKDEL融合基因的原核表达重组质粒,并实现了高效表达,表达产物占菌体总可溶蛋白的20％～30％。此外,由于这一表达质粒在IL-2cDNA与PE基因连接处引入了唯一的SmaⅠ位点,其5＇、3＇端分别含有唯一的EcoRⅠ、PstⅠ位点,因此可方便地用其它基因替换IL-2或PE基因而获得相应融合蛋白的表达质粒。     

干扰素的功能表达机制——Ⅵ.2'-5'三腺苷酸对烟草花叶病毒增殖的抑制作用

2'-5'三腺苷酸是否能抑制植物病毒在植物组织中的繁殖,过去无人报告过。本文证实2'-5'三腺苷酸能抑制烟草花叶病毒对离体的枯斑三生烟(Nicotina tabacum cv. samsum NN)叶片的侵染和在离体的普通烟(Nicotina tabacum)叶片内的繁殖,说明在植物中也存在2'-5'寡腺苷酸的作用体系,为植物干扰素的作用机理研究提供了新的依据。     

大肠杆菌及聚肌胞核苷酸对柞蚕、家蚕蛹诱导产生溶菌酶、抗菌肽及凝集素的动力学

大肠杆菌D₃₁诱导柞蚕蛹产生抗菌多肽。同时,溶菌酶和凝集素活性都比诱导前有明显增高.其活力高峰、抗菌多肽在第7天左右、溶菌酶在第5天,而凝集素在第3天即达最高水平。不同品种的柞蚕蛹,经诱导产生的三种活性物质其活力差异不明显,但741、河四和小混品种中的抗菌多肽P_9A及P_9B组成比例较高。上述三种活性物质的诱导变化与性别有关,雄性高于雌性。比较了柞蚕蛹和家蚕经细菌诱导后上述三种活性物质的变化,家蚕凝集素活力很低,诱导后活力增高不明显。抗菌活力及溶菌酶活力的提高程度柞蚕也高于家蚕。聚肌胞核苷酸(Poly I:C)也能诱导两种蚕产生抗菌多肽及溶菌酶,但活力提高的显著程度都不及大肠杆菌诱导,凝集素活力变化也不显著。     

多酶单一切点Tac启动子质粒pTL的组建与应用

本工作组建了一个含Tac启动子(promoter)的表达载体质粒pTL。pTL带有Trp-35区、Lac-10区及两个终止区(t_1t_2),并带有EcoRⅠ、SmaⅠ、BamHⅠ、SalⅠ、PstI及HindⅢ等单一酶切点,可以在这些切点中插入各种基因片段,由Tac启动子促进基因的表达。在Ap抗性基因中无PstⅠ切点,故在PstⅠ切点插入外源基因后,Ap抗性不受影响。用pTL表达人干扰素αD基因,获得较高的产率,每立升菌液约得8.2×10~7单位,相当于每立升4mg干扰素。