绿色木霉β-葡萄糖苷酶的重组表达及进一步纯化

β-葡萄糖苷酶在食品风味物质形成和生物活性物质转化中发挥重要作用。以纤维素酶工业生产菌株绿色木霉Sn-9106的总RNA为模板,采用RT-PCR技术获得大小为2235bp的cDNA片段,该序列与GenBank中的U09580.1β-葡萄糖苷酶序列相比,氨基酸序列同源性达99%。经大肠杆菌原核表达,β-葡萄糖苷酶的活力达到20.3U/mg,为β-葡萄糖苷酶制剂大规模生产及在食品工业中的应用提供了理论依据。     

芽孢杆菌β-葡萄糖苷酶的分离纯化及特性研究

以芽孢杆菌作为试验材料,采用硫酸铵分级沉淀、DEAE-52离子交换层析、Sephadex G-100凝胶过滤方法分离纯化β-葡萄糖苷酶,并测定了其部分酶学性质。结果表明:该酶以水杨酸苷为底物时,最适pH值为7.0,最适温度为50℃,是一种中性酶,具有较好的热稳定性。金属离子对酶活性影响较大,其中Fe2+对酶的激活作用最为明显,而K+对酶有明显的抑制作用。     

耐碱锰超氧化物歧化酶基因(Mn-sodA)工程菌的构建及其表达条件

从Bacillus sp.110-2基因组上分离得到的耐碱锰超氧化物歧化酶基因(Mn-sodA),将其连接到原核表达载体pET-30a(+),得到重组载体pET-sodA,重组载体在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导得到表达.SDS-PAGE分析显示,融合表达产物的分子量大小为26.5 kD.对含有sodA基因工程菌的表达情况研究表明,重组蛋白全部以可溶性形式存在;重组酶的比活力252 U/mg,为原始菌株的2.1倍,目的基因在大肠杆菌中实现了高效表达;而且,重组酶还保留了野生型酶强的耐碱能力.BL21(pET-sodA)基因工程菌的构建提供了一种可利用的耐碱蛋白资源,同时探索了一种极端酶的生产方法.     

黄瓜黑星病菌致病机理的研究Ⅱ细胞壁降解酶及其在致病中的作用

 本文通过活体内外黄瓜黑星病菌(Cladosporium cucumerinum)产生的细胞壁降解酶活性分析,初步明确了Cx-酶(羧甲基纤维素酶)、β-葡萄糖苷酶和PMG(聚甲基半乳糖醛酸酶)、PMTE(果胶甲基反式消除酶)在该菌侵染黄瓜中的作用。瓜条感病的各部位,以病健交界处细胞壁降解酶活性最高;在检测的各类酶中,活性最高的为PMG、PMTE,Cx-酶、β-葡萄糖苷酶和FPA(滤纸酶)活性较低。抗感病黄瓜品种染病后,细胞壁降解酶活性均迅速增强。感病品种染病后,果胶酶(PMG、PMTE)活性远远高于抗病品种,其高峰值是抗病品种的2.72~7.52倍。感病品种接种后纤维素酶(Cx-酶、β-葡萄糖苷酶)活性一直增强;抗病品种接种后β-葡萄糖苷酶随着接种天数的增加酶活性一直增强,Cx-酶在染病后初期活性迅速增强,增至高峰后逐渐降低。     

生防木霉菌对嘧霉胺抗药性变异及其相关蛋白诱导

选育对杀菌剂具有抗性的生防菌株是生物防治研究的重要内容之一.通过药剂选择培养基及紫外光诱导获得对嘧霉胺具抗性的突变体KTm-1、KTm-2.研究结果显示,与亲本菌株相比,抗性突变体的耐药性提高20倍以上.抗性菌株在无药培养基上连续转代8次,耐药性未见下降.活体拮抗测定表明,耐药菌株的抑菌能力略高于亲本菌株.PAGE显示抗性突变体KTm-1的可溶性蛋白谱带比其亲本菌株多4条,其中Rf=0.64的蛋白谱带是两个耐药菌株的特异性谱带,可视其为耐药相关蛋白.经Sephadex G-100柱层析纯化,SDS-PAGE测定耐药蛋白分子量为44.1KDa.     

黄瓜枯萎病快速检测技术研究

以尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporium）菌体可溶性蛋白及菌体分泌物抗原作为免疫原,制备了高效价的兔抗尖孢镰刀菌菌体可溶性蛋白及菌体分泌物抗原抗血清,提取并纯化了抗体IgG。通过优化ELISA反应条件,建立了检测黄瓜枯萎病的间接ELISA方法,检测的灵敏度很高;特异性试验结果表明,除与茄病镰刀菌有一定交叉反应外,与黄瓜上的其他病原菌均无交叉反应,由于尖孢镰刀菌引起的枯萎病和茄病镰刀菌引起的根腐病所施的农药相同,说明本方法具有较强的实用性;田间实际检测效果明显,早期表现症状的黄瓜检测结果均呈阳性,具有较高的准确度。     

脱色素玉米活性肽对小鼠抗运动性疲劳的影响

以小白鼠为试验动物,建立小鼠疲劳模型,探讨脱色素玉米活性肽缓解疲劳的细胞生化机制.根据脱色素活性肽的药理作用,采用运动训练学方法研究了脱色素玉米活性肽对小鼠耐力及抗疲劳能力的影响.结果表明,脱色素玉米活性肽高剂量组(0.075 g/ml)能显著增强小鼠游泳时间、延长爬杆时间及常压耐缺氧时间(P<0.01),增加肝糖原、肌糖原含量(P<0.01),降低血清和肝组织中血清尿素氮(BUN)浓度、乳酸脱氢酶(LDH)活力(P<0.01).说明脱色素玉米活性肽对增强机体负荷的适应能力、抵抗疲劳产生和加速消除疲劳等方面具有明显作用.     

纤维素酶的固体发酵生产及其应用研究

纤维素酶是降解植物纤维素的一组酶,它能降解纤维素生成纤维二糖和葡萄糖等小分子物质.辽宁省酶工程技术中心通过研究进行小试、中试及建立纤维素酶生产线,找到了适宜的生产条件和工艺,并探索出一些应用领域的适宜条件.     

黄瓜黑星病菌致病机理的研究Ⅱ细胞壁降解酶及其在致病中的作用

 本文通过活体内外黄瓜黑星病菌(Cladosporium cucumerinum)产生的细胞壁降解酶活性分析,初步明确了Cx-酶(羧甲基纤维素酶)、β-葡萄糖苷酶和PMG(聚甲基半乳糖醛酸酶)、PMTE(果胶甲基反式消除酶)在该菌侵染黄瓜中的作用。瓜条感病的各部位,以病健交界处细胞壁降解酶活性最高;在检测的各类酶中,活性最高的为PMG、PMTE,Cx-酶、β-葡萄糖苷酶和FPA(滤纸酶)活性较低。抗感病黄瓜品种染病后,细胞壁降解酶活性均迅速增强。感病品种染病后,果胶酶(PMG、PMTE)活性远远高于抗病品种,其高峰值是抗病品种的2.72~7.52倍。感病品种接种后纤维素酶(Cx-酶、β-葡萄糖苷酶)活性一直增强;抗病品种接种后β-葡萄糖苷酶随着接种天数的增加酶活性一直增强,Cx-酶在染病后初期活性迅速增强,增至高峰后逐渐降低。