僧帽牡蛎EGFR基因的原核表达及其在幼体附着变态过程中的表达特性

扩增僧帽牡蛎(Crassostrea gigas angulata)的表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)基因,并与pET32a(+)载体连接,构建pET32a(+)/EGFR重组质粒.将重组质粒导人大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3),成功地表达并纯化了一个50 ku的重组蛋白.采用RT-PCR技术,检测了僧帽牡蛎幼体附着变态前后EGFR基因表达量的变化,结果表明,EGFR基因在附着变态前的浮游幼体阶段和附着变态24 h后的稚贝阶段低表达,附着后1～6 h强烈表达,这预示着EGFR基因在僧帽牡蛎幼体附着变态这一生物学过程中具有重要作用.     

杂色鲍×盘鲍杂交及亲本自繁群体的AFLP分析

应用AFLP技术研究了杂色鲍(SS)、盘鲍(JJ)及其正反交群体(SJ和JS)的遗传关系,并比较了各群体内的遗传多样性.3对选择性引物共扩增出344个位点.双亲自繁群体SS和JJ 的AFLP图谱差异很大,平均遗传距离达1.425.因此,AFLP图谱可以用于两物种及其杂交种的种质鉴别.正反交群体SJ与JS的AFLP图谱很接近于母本自繁群体,平均遗传距离分别为0.111(SJ与SS之间)和0.134(JS与JJ之间),而与父本自繁群体则有较大区别,平均遗传距离分别达1.408(SJ与JJ之间)和1.394(JS与SS之间).将4个群体分为SS/SJ和JS/JJ两组,进行三水平的AMOVA分析,结果显示:84.74%遗传变异来源于母本不同的两组之间(SS/SJ组和JS/JJ组之间),12.66%变异存在于群体内个体之间,正反交群体与母本之间的变异仅有2.60%.另一方面,正反交F_1群体的多态性位点比例、Nei′s 遗传多样度、香农多样性指数均低于母本自繁群体.综合群体内多样性和群体间遗传关系分析结果,杂色鲍与盘鲍正反交F_1的遗传物质组成有别于同时含有双亲基因组的实质性杂交,而与母本有着高度的遗传同质性,且遗传多样性水平略低于母本自繁群体.     

海洋底栖动物浮游幼体附着和变态的研究

海洋底栖动物浮游幼体附着和变态的研究具重要的理论和应用价值.我校海洋系在国内较早开展该领域的研究,近10年来,取得了系列研究成果,促进了我国在海洋底栖动物幼体附着和变态研究领域的发展.所研究的海洋底栖动物有翡翠贻贝(Perna viridis)、僧帽牡蛎(Saccostrea cucullata)、盘鲍(Haliotis discus discus)、杂色鲍(Haliotis diversicolor)、华贵栉孔扇贝(Chlamys nobilis)、台湾东风螺(Babylonia formosae)、方斑东风螺(B.areolata)、冠瘤海鞘(Styela canopus)和白脊藤壶(Balanus albicostatas).研究内容包括幼体附着和变态过程中的幼体行为学和形态学观察、幼体附着和变态的影响因子、机制及应用研究.     

僧帽牡蛎EGFR基因的克隆及早期发育阶段的表达

僧帽牡蛎(Crassostrea angulata)也称葡萄牙牡蛎,是我国广泛分布的一种传统大宗养殖贝类.本研究利用消减杂交文库结合RACE技术,从僧帽牡蛎中克隆获得了表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)的cD-NA全长序列.EGFR基因cDNA序列1 608 bp,编码298个氨基酸,预测存在1个跨膜结构域和5个酪蛋白激酶II磷酸化位点.构建了该基因的UPGMA进化树,比对发现其氨基酸序列与高等动物的差异较大.给出了该基因的标准曲线,利用RT-PCR技术检测了该基因在僧帽牡蛎胚胎发育早期阶段的表达量变化.该基因从僧帽牡蛎发育的卵到D型幼虫期间均有表达.其中早期的卵母细胞和后期的担轮幼虫,D型幼虫阶段表达量较高,表明该基因在牡蛎幼体胚胎发育早期具有阶段性调控的作用.     

不同群体东风螺属齿舌的比较

采集中国沿海不同区域的方斑东风螺、泥东风螺标本,从这2种螺4个群体中每个群体抽样解剖30个个体,进行齿舌结构的对比.结果表明,东风螺属种间齿舌的区别主要体现在中央齿的中间突起,方斑东风螺种内不同群体间差别较小,但泥东风螺种内存在较大的中央齿第三突起基部角的差异.种间的差异要明显大于种内的差别,通过对结果的分析提出了一些通过齿舌鉴别东风螺属内各种的方法.     

几种药物对波部东风螺早期发育的影响

检验了几种药物对东风螺早期发育阶段的影响,测定了东风螺胚胎和幼体对福尔马林、KMnO4及孔雀石绿的安全浓度及不同浓度作用下东风螺受精卵的孵化率,试验结果表明,在育苗过程中,用2－5μL／L的福尔马林、0．2－0．9 mg/L的KMnO4和100－200万单位／m^3的制霉素等药物处理受精卵,可提高受精卵的孵化率或提高孵化速度,并可减少育水池中的有害微小生物,在面盘幼虫培育过程中,低于1．233μL／L的福尔马林或低于0．138mg／L斩KMnO4起到控制水体环境的良好效果,波部东风螺幼体对福尔马林的安全浓度为1．233μL／L,对KMnO4的安全浓度为138mg／L。     

西氏鲍与盘鲍杂交育苗的初步研究

于2005年11月～12月利用从日本引进的西氏鲍与盘鲍进行了杂交育苗实验,获得西氏鲍♀×盘鲍♂、盘鲍♀×西氏鲍♂、西氏鲍♀×西氏鲍♂和盘鲍♀×盘鲍♂4个组合的F1代.对西氏鲍和盘鲍的卵径以及4个组合的受精率、孵化率、胚胎发育速度、子代早期阶段的生长速度以及存活率进行比较,结果表明:西氏鲍和盘鲍的卵黄径并无明显差异,而二者的卵膜径差异显著.西氏鲍♀×盘鲍♂的受精率为19.1%～65.3%,孵化率为76.3%～84.8%.盘鲍♀×西氏鲍♂的受精率为22.3%～82.7%,孵化率为77.1%～85.2%.在水温19.0℃、盐度30的条件下,杂交组合比自繁组合的胚胎发育速度明显滞后.在鲍苗生长的早期阶段(12、20、30、60 d),各组合生长速度差异不显著(p＞0.05),但从100 d后,杂交子代的生长速度快于盘鲍和西氏鲍的自繁子代,其中以西氏鲍♀×盘鲍♂的生长速度最快,与其它组合相比差异显著(p＜0.05),表现出一定的杂种优势.但是,在180 d内,杂交组合和自繁组合稚鲍的存活率差异不显著(p＞0.05).     

日本囊对虾人工诱变子一代遗传变异的RAPD分析

以性腺成熟的日本囊对虾（Marsupenaeus japonicus）作为亲代，进行不同剂量的^60Co-γ射线照射．采用RAPD技术对诱变子一代的无节幼体基因组DNA多态性进行了检测．从20个随机寡核苷酸引物共检测177个位点，其中多态位点152个，占85．9％．单个引物获得的标记为6～12个，平均8．85个，分子量在150～2500bp之间．遗传相似系数用Nei的计算方法进行计算。遗传距离则用Lynch的计算方法进行计算．实验数据表明：诱变子代与正常对照组相比，遗传多样性水平较高，诱变产生了较为显著的变异．研究结果证实：在对虾大规模养殖，种质质量严重退化的情况下，人工诱变能够促进基因组更加广泛的变异，为新品种的选育打下坚实的基础；同时证明RAPD技术在检测遗传差异方面具有较高的灵敏度和分辨率．     

两种东风螺的染色体核型

方斑东风螺(Babylonia areolata)和泥东风螺(Babylonia lutosa)隶属于东风螺属,是中国重要的水产经济品种.以这两种东风螺的担轮幼体为实验材料,经秋水仙素处理,空气干燥法制片,Giemsa染色,观察分析获得的两种东风螺染色体核型.结果表明,方斑东风螺核型为2n=66=32m+20sm+8st+6t,染色体总臂数NF=118.泥东风螺核型为2n=66=30m+22sm+8st+6t,总臂数NF=118.两种东风螺的全套染色体中均未发现次缢痕、随体及性染色体.另外,本研究还分析了这两种螺与蛾螺科其他种类之间的染色体数目差异,为探讨它们之间的亲源关系提供科学依据.