人白血病细胞裸鼠异种移植模型的建立

我们成功地将人T淋巴细胞白血病细胞（MOLT－4）、人早幼粒细胞白血病细胞（HL-60）移植到裸鼠体内。裸鼠经环磷酰胺（2.5mg／只）预处理后分别将（5～10）×10~6MOLT-4细胞及（2～4）×10~7HL－60细胞移植到动物皮下能形成实体瘤，该肿瘤呈进行性生长。MOLT－肿瘤在裸鼠间连续传代4次，移植成功率为69.2％，HL-60肿瘤连续传代3次，成功率为100％。肿瘤染色体分析属于人体细胞核型，细胞学研究显示裸鼠体内MOLT-4、HL-60细胞与体外培养的细胞具有良好的一致性，故裸鼠体内MOLT-4、HL-60肿瘤模型的建立对于研究人白血病提供了有用工具。     

抗转铁蛋白受体单链抗体原核表达载体的构建和表达

目的 构建抗转铁蛋白受体(TfR)单链抗体原核表达载体，为进一步研究其效应奠定基础。方法 从抗TfR单克隆抗体重链和轻链可变区基因的克隆载体pGEM-T-VH和pGEM-T-VL中扩增重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因，用重叠延伸PCR的方法，在VH和VL基因间引入连接短肽(Linker)，构建VH-Linker-VL的单链抗体(single chain Fv，scFv)基因。经NcoⅠ和NotⅠ酶切后亚克隆到原核分泌型表达载体pUCl9／119上，转化和筛选后，阳性细菌经IPTG诱导表达。间接免疫荧光法(IFA)及抗体封闭试验鉴定其抗体活性。结果 凝胶电泳可见重叠延伸PCR扩增产物约700bp条带，SDS-PAGE鉴定表达产物的分子量为27kD左右，与scFv的理论值一致，IFA及抗体封闭试验证明表达产物有抗人TfR的活性。结论 本研究成功地构建并表达了抗人TfR scFv，为抗人TfRscFv的应用奠定了基础。     

两种途径广泛性子宫切除术对比分析

目的回顾性分析改良广泛性子宫切除术和传统的广泛性子宫切除术对宫颈癌患者的治疗效果。方法选择2008年2月～2010年3月间在安庆市立医院接受手术治疗的患者共42例,其中接受两种手术方式的患者均为21例,接受改良广泛性子宫切除术的患者为Ia-IIb期宫颈癌;接受传统广泛性子宫切除术的患者为Ib1～IIb期宫颈癌。比较上述两种方式手术时间、术后住院时问、术中出血量和围手术期并发症的发生情况。结果平均手术时间、术中出血量改良组和传统组分别为（304±11）min、（935±75）mL和（357±1）min、（1331±494）mL,二者分别比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）。术后平均导尿管留置时间、术后住院时间、术后尿潴留、输尿管损伤和淋巴囊肿的发生率,两组分别比较,差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论改良广泛性子宫切除术安全可行,能有效缩短手术时间及减少术中出血量。     

抗人胸腺细胞球蛋白与柔红霉素交联方法及其偶联物体外抗肿瘤作用

分别用12.5％、25.0％、50.0％、75.0％和100.0％氧化的Dex T_(10)作为交联剂交联抗人胸腺细胞球蛋白(AHTG)和柔红霉素(DNR)形成免疫偶联物(AHTG-Dex-DNR),其中以25.0％氧化的DexT10作为交联剂最佳。它既提高了偶联物的交联度,又降低了硼氢化钠对AH-TG和DNR活性的损伤。偶联物对靶细胞CEM 24h细胞毒试验LD_(50)为10.68μg/ml。对非靶细胞K562仅有轻微杀伤作用,10min细胞毒试验为特异的杀灭肿瘤细胞试验,对CEM的LD_(50)为14.79μg/ml,对K562几乎无细胞毒作用,表明免疫偶联物有特异性细胞毒作用。     

转染不同基因的NIT细胞体外抗细胞毒T细胞杀伤作用

目的　研究转染FADD缺失突变体(FADDdel)和WeelHu/GFP的胰岛β细胞株(NIT细胞)抵抗细胞毒T细胞的杀伤作用及其分泌胰岛素与细胞增殖所受的影响。方法　采用免疫磁珠法测量转染WeelHu基因的NIT细胞培养上清中的胰岛素水平及观察其增殖速度。将分别转染空载体pUC-pIC、pCMV和转染pFADDdel、pCMV-WeelHu、pCMV-WeelHu/GFP的NIT细胞与活化的淋巴细胞共培养,利用51Cr释放试验检测淋巴细胞对NIT细胞的杀伤作用。结果　转染WeelHu基因与未转染的NIT细胞胰岛素的分泌和生长速度没有明显变化(P>0.05)。转染pCMV-WeelHu/GFP或pCMV-WeelHu的NIT细胞其抗淋巴细胞杀伤能力明显高于转染空载体的NIT细胞(P<0.01),表达WeelHu或WeelHu/GFP融合蛋白的胰岛细胞之间抗凋亡能力差异无统计学意义,转染FADDdel在低剂量效靶比时对胰岛β细胞有一定保护作用(P <0.05),但在高剂量效靶比时与转染空载体比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论表达WeelHu或FADDdel的胰岛细胞可抵抗T细胞的杀伤,且对胰岛素的分泌及细胞增殖元明显影响。     

自制肌瘤螺钻在经阴道子宫肌瘤剔除中的应用

目的评估运用自制肌瘤螺钻行经阴道子宫肌瘤剔除的效果及价值。方法回顾2017年10月至2019年10月在我院收治的100例子宫肌瘤病例,50例未使用肌瘤螺钻(对照组),50例使用自制肌瘤螺钻(观察组),观察手术完成情况、手术时间、出血量、术中术后并发症、术后住院天数指标进行分析。结果观察组手术成功100%;对照组手术成功96%,2例需要腹腔镜辅助。观察组手术时间、出血量、术后住院时间均优于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。两组均无膀胱、肠管、血管损伤。结论运用自制肌瘤螺钻行经阴道子宫肌瘤剔除手术安全有效。     

次级淋巴组织趋化因子浓度梯度抑制肿瘤细胞免疫逃逸

目的探讨人次级淋巴组织趋化因子(SLC)浓度梯度对肿瘤细胞免疫逃逸的影响。方法根据SLC浓度梯度,实验分6组;流式细胞术检测肿瘤细胞HLA-Ⅰ类分子的表达、肿瘤细胞凋亡,Western blot检测肿瘤细胞胞内BCL-2表达,ELISA检测肿瘤细胞培养上清中生长转化因子β(TGF-β)水平。结果在一定浓度范围内,随SLC浓度增加,肿瘤细胞的HLA-Ⅰ类分子表达增高,肿瘤细胞凋亡增多;BCL-2表达增高,而肿瘤细胞TGF-β分泌水平降低。结论SLC具有抑制肿瘤细胞免疫逃逸的作用。     

菌落PCR和质粒PCR对转化菌的筛选

为建立简便,可靠转化菌的筛选方法。方法应用菌落ＰＣＲ和重组质粒ＰＣＲ方法对转化菌进行筛选和ＤＮＡ序列分析。克隆载体和表达载体筛选及鉴定采用与载体多克隆插入位眯序列互补的通用引物或免疫球蛋白家族特异性引物。结果菌落ＰＣＲ和质粒ＰＣＲ技术可作为基因克隆筛选和鉴定的方法。结论菌落ＰＤＲ和质粒ＰＣＲ方向简便,快速,可靠,其产可作为模板直接用于序列分析。     

人-鼠抗CD4嵌合抗体的生物学效应研究

目的 探讨人－鼠抗ＣＤ４嵌合抗体的生物学效应,方法 观察ＣＤ４人－鼠嵌合抗体和鼠源性单抗对ＣＤ３,植物血凝素（ＰＨＡ）,白细胞－２（ＩＬ－２）及同种异体细胞诱导增殖的影响,以及介导的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性（ＡＤＣＣ）作用。结果 提示ＣＤ４嵌合抗体和鼠源性ＣＤ４抗体对以上几种诱导剂诱导的增殖均有抑制作用,且抗体剂量越大,抑制作用越强。