乙型肝炎病毒前S2蛋白结合蛋白基因的筛选

目的 筛选并克隆人肝细胞中与乙型肝炎病毒前S2蛋白（HBVPreS2)相互作用的蛋白质基因。方法 用聚合酶链反应（PCR）技术扩增HBVPreS2基因，连接入酵母表达载体pGBKT-7中构建诱饵质粒，转化酵母细胞AH109并在其内表达，然后与转化了人肝cDNA文库质粒的酵母细胞Y187进行配合，在营养缺陷型培养基上进行双重筛选阳性菌落，PCR从中扩增出目的片段并测序，进行生物信息学分析。结果 成功克隆出HBVPreS2基因并在酵母细胞中表达，配合后选出既能在4缺（SD/-Trp-Leu-SAde-His)培养基又能在铺有X-α-半乳糖（X-α-gal)的4缺培养基上生长并变成蓝色的真阳性菌落26个，其中含金属硫蛋白A2基因的菌落有12个，细胞色素C氧化酶Ⅱ有1个，细胞色素P450IVF亚基2个，细胞色素C氧化酶Ⅳ亚基同功酶1有2个，人血白蛋白3个，Na^ -K^ ATP的β1亚基1个，前清蛋白2个，植物血凝素半乳糖苷结合亚基1个，未知基因2个，结论 成功克隆出HBVPreS2蛋白的结合蛋白，为进一步研究HBVPreS2的作用提供了新线索。     

羧基末端截短的HBV表面抗原中蛋白反式激活c-myc表达

目的构建羧基末端截短的乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白（MHBst）反式激活基因的消减文库，并观察其对细胞原癌基因c-myc的反式激活作用。方法以重组表达质粒pcDNA3．1（-）．MHBst和空载体pcDNA3．1（-）瞬时转染HepG2细胞，提取细胞mRNA并逆转录为cDNA，分别标记为实验组与对照组，应用抑制性消减杂交技术，构建MHBst反式激活的cDNA消减文库。针对其中的原癌基因c-myc，进一步克隆其启动子序列并构建报告基因表达载体pCAT3．c-myc，与pcDNA3．1（-）．MHBst共转染HepG2细胞，ELISA法检测报告基因氯霉素乙酰转移酶CAT的表达活性。同时，应用反转录聚合酶链反应和免疫印迹方法检测表达MHBst的细胞中c-myc基因的mRNA转录和蛋白表达水平。结果随机挑选消减文库中的50个阳性克隆进行测序和生物信息学分析，显示19种已知功能基因，涉及细胞代谢、信号转导、细胞凋亡和肿瘤发生等生物学过程。细胞内瞬时表达的MHBst蛋白能够反式激活细胞原癌基因c-myc启动子的转录活性，并且RT-PCR和Western blotting结果也证明了表达MHBst蛋白的细胞中原癌基因c-myc的表达水平明显增强。结论成功构建MHBst反式激活基因的消减文库，MHBst可以反式激活细胞原癌基因c-myc的表达，为深入了解乙型肝炎病毒致癌的分子生物学机制提供理论基础。     

肝细胞癌免疫治疗的现状与挑战

免疫疗法是目前肿瘤治疗的一种新方法,应用前景广阔,在治疗相关毒性和疗效方面较传统疗法均具有明显优势。免疫检查点抑制、克服肿瘤免疫逃逸和重建抗肿瘤免疫机制是肿瘤免疫治疗的关键。在肝细胞癌中,免疫治疗尚处于初级阶段,免疫治疗单独或联合其他治疗方法可能有利于控制肿瘤进展,但总体疗效仍然有限。本文结合免疫治疗在肿瘤中的研究和应用进展,分析了肝细胞癌免疫治疗研究现状以及面临的挑战。     

内皮素对肝硬化大鼠Kupffer细胞血小板活化因子生成水平的影响

目的 探讨肝硬化时Kupffer细胞与血小板活化因子(PAF)生成的关系及内皮素-1(ET-1)在其中的作用.方法 30只SD大鼠随机分为正常对照组与CCl4诱导的肝硬化模型组,每组15只.分离、培养Kupffer细胞,培养24h后,分别用0、1、10、100和1 000nmol/L ET-1刺激,测定Kupffer细胞产生和释放的PAF水平.通过RT-PCR、受体饱和结合试验分析Kupffer细胞PAF、ET-1受体(ETA、ETB)和内皮素前体原(ppET-1)mRNA表达情况.结果 肝硬化大鼠Kupffer细胞合成与释放PAF明显增加,分别为对照组的1.48倍(1.02±0.06pg/g DNA vs 0.69±0.07pg/g DNA,P＜0.01)和2.15倍(1.42±0.14pg/g DNA vs 0.66±0.04pg/g DNA,P＜0.01).ET-1刺激增强了Kupffer细胞生成与释放PAF的效应,并呈剂量依赖性,在肝硬化组尤为明显.肝硬化组Kupffer细胞PAF及ETB受体mRNA水平及受体密度明显增加,而受体亲和力无变化,无ETA受体和ppET-1 mRNA表达.结论 Kupffer细胞是肝硬化时PAF生成的一个重要来源,ET-1通过表达增加的ETB受体进一步促进Kupffer细胞生成并释放PAF,提示Kupffer细胞参与了肝硬化门脉高压的形成.     

非酒精性脂肪性肝病对乙肝病毒相关肝细胞癌患者生存的影响

目的 探讨非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)对乙型肝炎病毒(HBV)相关肝细胞癌(HCC)患者生存的影响。方法 纳入2008年6月-2020年12月就诊于解放军总医院第五医学中心的HBV相关HCC患者833例，回顾性收集患者初次诊断HCC时的临床信息及随访资料，根据巴塞罗那肝癌临床(BCLC)分期进行分层，并以是否合并NAFLD分组，采用稳健逆概率处理加权法(IPTW)平衡相关临床指标，采用Kaplan-Meier生存曲线、Log-rank检验及Cox回归比较NAFLD组与非NAFLD组HBV相关HCC患者的预后，研究终点为肝癌相关性死亡。结果 以BCLC分期为标准，本组833例中可切除患者465例，不可切除患者368例；可切除患者中161例(34.6%)合并NAFLD，不可切除患者中76例(20.7%)合并NAFLD。进行稳健IPT W加权后，两组间所有指标差异均无统计学意义。生存分析结果显示，合并NAFLD的HBV相关HCC患者中位生存时间明显长于非NAFLD患者，可切除NAFLD患者3、5、8年累积生存率分别为96.9%、82.1%、41.2%，明显高于非NAFLD患者(分别为91...     

嵌合抗原受体T细胞治疗原发性肝癌临床研究进展

原发性肝癌具有起病隐匿以及早期诊断困难等特点，治疗手段有限且效果不佳。嵌合抗原受体(CAR)T细胞疗法是经基因编辑修饰的T淋巴细胞识别肿瘤特异性抗原并活化T淋巴细胞，发挥肿瘤杀伤作用。CAR-T细胞疗法治疗血液肿瘤取得重大进展，近年来在实体瘤领域也有了很好的临床疗效，尽管CAR-T细胞治疗技术已经从第一代发展到第五代，但在实体瘤领域仍存在诸多挑战。本文将对CAR-T细胞治疗原发性肝癌的机制以及相关研究进展进行全面的综述，包括目前CAR-T细胞疗法治疗原发性肝癌主要的靶点GPC3、AFP、MUC1、NKG2D等，CAR-T细胞治疗与溶瘤病毒，逐渐兴起的免疫检查点抑制剂等联合治疗，以及对以上靶点以及治疗方式的生物学研究、临床前研究和临床研究的回顾，并对CAR-T细胞治疗原发性肝癌面临的挑战及解决措施进行汇总。为未来CAR-T细胞疗法在肝癌领域的临床发展提供参考。