机械划割至体外培养神经元创伤性损伤模型的建立

目的:探讨在细胞水平建立可靠、简便易行的神经元机械性损伤模型及神经系统损伤的分子病理学。方法:将大鼠脑皮层神经元体外培养7d,通过光镜、电镜和免疫组织化学法鉴定培养的神经元。以微量移液器塑料枪头划割细胞,造成神经元机械性损伤。研究神经元机械性损伤后细胞形态学变化。检测细胞存活率和培养液乳酸脱氢酶活性变化,从病理生理学角度阐明神经元机械性损伤的效果。结果:神经元体外培养7d,光镜及电镜检测符合神经元特点。NF200免疫组织化学染色细胞阳性率达90%;机械性划割后可见神经元立即坏死和伤后6h的细胞凋亡,以及伤后72h神经元损伤修复现象。神经元机械性损伤后细胞存活率下降,伤后30min起,各损伤组较对照组细胞存活率均明显下降;伤后1～24h,中﹑重型损伤组细胞存活率较轻型损伤组明显下降(P<0.05)。伤后30min起,各损伤组较对照组乳酸脱氢酶活性明显升高;伤后12～24h重型损伤组乳酸脱氢酶活性高于轻型损伤组(P<0.05)。结论:胎鼠脑皮层体外原代培养生成的神经元纯化率较高;划割损伤对神经元有确切的致伤作用,依据划割范围不同,可造成不同程度的神经元损伤。     

大鼠头颅侧向旋转致脑弥漫性轴索损伤的NF68免疫组化形态学观察

目的探讨大鼠头颅侧向旋转后脑弥漫性轴索损伤(DAI)的形态学改变。方法大鼠12只,随机均分为损伤后30min、2h、24h及对照组,制作头颅侧向旋转脑DAI模型。脑矢状切片经用小鼠抗神经纤维丝(NF)蛋白NF68亚单位的血清、免疫组化ABC法与DAB+H2O2显色技术等处理。选延髓部分,薄片间包埋,光镜定位,阳性区超薄切片,电镜观察。结果伤后30min光镜下延髓轴索迂曲肿胀;电镜下髓鞘轻度分离,轴浆NF结构紊乱。伤后2～24h,轴索破坏随时间渐重,光镜下轴索明显肿胀、断裂并形成轴缩球;电镜下髓鞘显著分离,局部断裂,线粒体空泡变并移向周边,部分胞浆溶解。和正常对照比,伤后轴索轴浆NF68染色也明显增强;伴随轴索结构的变化,NF68阳性轴索染色强度和数量逐步递增。结论大鼠头颅侧向旋转后脑神经轴索内NF蛋白的NF68亚单位免疫活性显著增强,引起NF结构紊乱,终致轴索肿胀、断裂并形成轴缩球。     

听神经鞘瘤的显微外科治疗

目的：探讨显微手术切除小脑脑桥角区听神经鞘瘤（AN）的治疗效果。方法：对经CT或MRI证实,位于小脑脑桥角区的425例AN,采用显微手术切除,术后评估治疗效果,分别比较术前,术后的面神经和听神经功能。结果：肿瘤全切率88．71％（377例）;次全切除率8．24％（35例）,部分切除率3．09（13例）;术后死亡率1．41％（6例）,对382例平均随访4．3年,其中293例恢复良好,64例恢复较好,25例恢复较差,后者中有12例肿瘤复发（再次手术治疗后治愈）。结论：采用显微外科技术切除小脑脑桥角区听神经鞘瘤是一种安全,有效的方法。     

人脑肿瘤中猴病毒40大T抗原的表达及与P53、PRb特异性复合物的形成

采用免疫共沉淀结合银染色及Ｗｅｓｔｅｒｎ 印迹法检测６５ 例人脑肿瘤及８ 名正常人脑组织中猴病毒４０（ＳＶ４０）大Ｔ抗原（Ｔａｇ）的表达,并对１８例和１５例Ｔａｇ 阳性瘤组织分别检测Ｔａｇ－Ｐ５３和Ｔａｇ－ＰＲｂ 复合物的形成。ＳＶ４０ Ｔａｇ 在室管膜瘤、脉络丛乳头状瘤、垂体腺瘤、星形细胞瘤、脑膜瘤、多形性胶质母细胞瘤及髓母细胞瘤中均有表达,而８ 名正常人脑组织均无Ｔａｇ 表达;所检测Ｔａｇ 阳性瘤组织分别发现Ｔａｇ 并可与Ｐ５３、ＰＲｂ 形成特异性复合物。结果提示ＳＶ４０ 与人脑肿瘤的发生有关,Ｔａｇ－Ｐ５３ 及Ｔａｇ－ＰＲｂ 复合物的形成导致Ｐ５３ 和ＰＲｂ 失活,可能是ＳＶ４０ 致人脑肿瘤发生的一个重要机制。     

经口咽入路显微直视减压术治疗颅颈区畸形

目的 探讨颅颈区畸形前路显微直视减压手术的方法和疗效。方法 颅颈区畸形45例,MRI表现为齿状突肥大,向后上方突出,斜坡了争入颅底,致颅底成角畸形,延髓及上颈段脊髓腹侧受压变形。其中16例还伴有颅后窝容积减小、小脑扁桃体下疝及脊髓空洞症。采用经口咽入路显微直视下切除齿状突、伴坡下部及增生的结缔组织,解除其对延髓、颈髓的压迫。结果 痊愈38例（84.4%),好转4例（8.9%),无效3例（6.7%)。手术并发症有脑脊液漏2例,环枕脱位1例,软腭裂开1例。结论 经口咽入路显微直视减压术是治疗以延髓、颈髓腹侧受压为主的颅颈区畸形的首选方法。     

抑癌基因PTEN诱导人脑胶质瘤SHG—44细胞凋亡

目的 研究外源性PTEN基因对人脑胶质瘤细胞系SHG－44凋亡的影响,探讨PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的机制。方法 以携有人PTEN基因的真核表达载体体外转染SHG－44细胞,筛选阳性转染的细胞克隆并扩增培养。以原位杂交和免疫组化染色法检测PTEN基因的表达。采用透射电镜、流式细胞仪和核DNA琼脂糖凝胶电泳,检测转染PTEN基因后SHG－44胶质细胞的凋亡。观察导入入PTEN基因对SHG－44细胞裸鼠致瘤能力的影响。结果 获得PTEN基因稳定转染的胶质瘤细胞SHG－44,并检测到PTEN基因和蛋白的表达。透射电镜下可见转染PTEN基因后细胞核染色质浓缩边集、胞浆浓缩、核碎裂及凋亡小体形成等典型的凋亡表面。流式细胞仪显示,细胞周期从G1期到S期发生抑制,并在G1期峰前出现1个明显的凋亡峰（12．9％）。细胞核DNA琼脂糖凝胶电泳显示凋亡细胞特朋的梯状条带。转染空载体及未转染的SHG－44细胞未见的凋亡表现。转染PTEN基因后,SHG－44细胞对裸鼠瘤能力明显降低。结论 将外源必PTEN基因导入SHG－44肿瘤细胞后,可诱导细胞凋亡,这可能是PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的重要机制之一。     

颅内外沟通瘤的诊断与显微手术治疗

 目的　对42例颅内外沟通瘤诊断与手术治疗进行回顾研究,以期进一步提高此类肿瘤的疗效。方法　全组男31例,女11例,年龄11月～68岁(32.2)岁。颅眶肿瘤14例,颅鼻沟通瘤6例,颅外部分位于颞下凹者8例,位于蝶窦者2例,另有颈静脉孔区肿瘤8例,枕骨大孔区4例。全部病人均行CT或MRI检查,35例行术前颈外供瘤血管检塞术。采用显微外科技术与不同手术入路切除肿瘤。结果　手术全切者28例,大部切除者14例,手术无死亡。随访7月～7年,24例完全恢复健康,8例生活需要照顾,5例有不同程度恢复。结论　颅内外沟通肿瘤症状多样,易误诊误治,需提高警惕;采用多学科联合与显微外科技术分块切除肿瘤,可直接改善手术治疗的效果。     

阻断与刺激颈交感神经对脑损伤后脑水肿的影响

为探讨交感神经兴奋在脑损伤后脑水肿中的作用及其机制。将 4 8只健康成年家兔 ,制成自由落体脑损伤模型 ,随机分为对照、颈上神经单纯阻断、阻断后刺激和单纯刺激组 ,观察伤后 2 4h脑组织含水量。结果 ,单纯阻断与单纯刺激组脑组织含水量分别为 ( 82 .53 1 2± 0 .83 58) %和 ( 82 .92 81±1 .0 0 1 5) % ,显著高于对照组 ( P <0 .0 1 )。阻断后刺激组脑组织含水量为 ( 79.5875± 0 .6588) %与对照组差别不显著 (P >0 .0 5) ,但显著低于单纯刺激组和单纯阻断 (P <0 .0 1 ,P <0 .0 5) ,组织病理学提示也是单纯阻断组和单纯刺激组脑组织出血、坏死较重 ,水肿广泛。提示 ,交感神经过度兴奋参与颅脑损伤早期脑缺血 ,并在外伤性脑水肿发生中具有重要作用。     

抑制NKCC1减轻小鼠创伤性脑损伤的研究

目的探讨钠．钾-氯共转运体1（Na＋-K＋-2C1-cotransporter1,NKCCl）抑制剂布美他尼处理（BT）对小鼠创伤性脑损伤（TBI）早期的脑保护作用及可能分子信号调控机制。方法成年雄性BALB／c小鼠54只,随机分为对照组,颅脑创伤组（TBI组）和布美他尼治疗组（B1Tr组）各18只,采用Mamarou加速性颅脑损伤方法制备小鼠TBI模型。采用HE染色法观察各组小鼠皮层损伤程度;利用神经功能学评分（NSS）进行神经功能学评分;干湿重法检测脑组织含水量;同时,Westernblot法检测磷酸化细胞外调节蛋白激酶（p-ERK）、细胞外调节蛋白激酶（ERK）蛋白的表达变化。结果与TBI组比较,BTT组皮层神经元损伤减轻,同时,BTT组小鼠神经功能学评分优于TBI组（P〈0．05）;TBI后12h,BTT组p-ERK的蛋白表达水平低于TBI组（P〈0．01）。结论抑制NKCC1的表达可能发挥重要的脑保护作用,而p-ERK可能参与NKCC1的信号调控机制。