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Objective To elucidate the effect of hSavl expression on Mstl-mediated apoptosis in HeLa cells. Methods Plasmids pCMV-HA-hSav1 and pcDNA/4TO-Flag-Mst1 were constructed and cotransfected into HeLa cells. Triple immunofluorescent labeling of hSav1, Mst1 and nucleus was performed to determine their subcellular localization. Plasmids pCMV-HA-hSav1 and/or pcDNA/4TO-Flag-Mst1 were transfected into HeLa cells, and 36 hours later cisplatin (50 μmol/L) as a pro-apoptotic agent was added for 14 hours. Cell apoptosis was analyzed by annexin V/PI assay. Results Plasmids pCMV-HA-hSav1 and pcDNA/4TO-Flag-Mst1 were constructed and the authenticity of constructs was verified by sequencing. The binding in vitro showed that hSavl could be detect from the anti-Mstl immunoprecipitation complex. The immunofluorescent labeling showed that hSavl and Mstl had the same localization in cells. Overexpressed protein hSavl did not induce a significant cell apoptosis. However, co-expression of hSavl with Mstl resulted in a significant increase of apoptosis above the level seen with Mstl alone (24. 5% ± 2.4% vs. 39.3% ± 4.0%, P < 0. 05). Conclusion Our findings indicate that hSavl is a newly identified protein that interacts with Mst1 and a, augments Mst1-mediated apoptosis. 相似文献
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活动形状模型(active shape models,ASM)是一种较为流行的用于目标对象定位的统计学形状模型.该模型结合了一个点分布模型(point distribution model,PDM)和每个标志点周围的局部灰度模型,从而能够获取可靠精确的图像解释结果.对于二维图像,一维曲线的灰度模型会丟失其它方向上的信息.本文对于每个标志点周围的正方形邻域的灰度信息建立了模型,希望能够使活动形状模型方法考虑到更多的信息. 相似文献
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四环素诱导可控表达细胞周期素B1单克隆的筛选 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 筛选四环素诱导细胞周期素B1(Cyclin B1)可控表达的293单克隆细胞株(tetracycline-regulated expression 293 cells,T-RExTM-293).方法 从人胎肝cDNA文库中PCR带有酶切位点的Cyclin B1基因全长,将其酶切后插入到pcDNA4/TO/myc-HisB载体中.然后用测序正确的质粒转染T-RExTM-293细胞,加杀稻瘟菌素(Blasticidin)和腐草霉素(Zeocin)双药物筛选两周后,传96孔板,等单个细胞扩增出单克隆.然后用Western印迹和流式细胞仪检测Cyclin B1的诱导表达情况.结果 构建好的pcDNA4/TO/myc-HisB-Cyclin B1载体,经鉴定序列正确.筛选出的单克隆细胞株,在未加四环素时没有外源性的Cyclin B1表达,在加入四环素后,3 h就有表达,随时间的增加,Cyclin B1表达量也增加,48 h最多.结论 筛选出的T-RExTM-293单克隆细胞株能可控表达Cyclin B1. 相似文献
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目的:构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)逆转录病毒载体,转染人骨髓间质干细胞(hMSCs),探讨EGFP作为组织工程种子细胞示踪剂的可行性。方法:构建携带EGFP基因的逆转录病毒载体,用阳离子脂质体介导法将病毒质粒导入包装细胞,取阳性包装细胞克隆的病毒上清感染hMSCs,筛选稳定表达EGFP的细胞克隆(hMSCs-EGFP),MTT法测定hMSCs-EGFP的生长曲线。结果:病毒上清转染hMSCs后,绿色荧光蛋白能稳定表达一个月以上,生长曲线显示转基因细胞增殖速度和未转染细胞无明显差别。结论:hMSCs转染EGFP后,不影响其生长,EGFP可作为组织工程种子细胞良好的示踪剂。 相似文献
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董硕 《国外医学:内科学分册》1993,20(6):268-270
染色体易位在人类白血病的发病机理中起着重要作用。人类常见白血病,如慢性粒细胞白血病、急性早幼粒细胞白血病和急性淋巴细胞白血病等中都存在特异染色体易位,由于易位使某些原癌基因激活或结构发生改变,从而可能导致白血病的产生。当认识了这些染色体易位性质时,人们在临床上可利用这些染色体易位,建立一些新的诊断方法,并采取一些针对原癌基因活化的治疗手段。 相似文献