异基因造血干细胞移植治疗慢性粒单核细胞白血病及幼年型粒单核细胞白血病

本研究探讨异基因造血干细胞移植治疗慢性粒单核细胞白血病（CMML）及幼年粒单核细胞型白血病（JMML）的疗效及其影响因素.对3例CMML及2例JMML患者接受异基因造血干细胞移植治疗的临床资料进行多参数分析.结果表明,造血干细胞在5例患者中均成功植入,除1例JMML死于移植后并发症外,余4例至今无病生存.移植前疾病负荷、染色体核型及Ⅱ-Ⅳ度aGVHD的发生均对CMML的复发率或无病生存率有相关的影响;低剂量预处理方案优于清髓性预处理方案,而HLA的相合度及干细胞的来源均不影响总的生存率及无复发生存率,在JMML患者中脐带血造血干细胞移植的移植失败率明显高于骨髓或外周血造血干细胞移植;移植前脾脏的大小及是否行脾切除或者脾区照射对移植结果无影响,而移植年龄、GVHD的发生及HbF的水平对移植复发率均有重要意义.结论：异基因骨髓造血干细胞是治疗CMML及JMML的有效方法,但仍存在一系列问题需要解决.     

树突状细胞外泌体诱导间充质干细胞向成骨细胞分化

本研究观察人树突状细胞（dendriticcells,DC）来源的外泌体（DC—derivedexosome,DCex）对人骨髓间充质干细胞（mesenchymalstemcells,MSC）成骨分化的影响。采用超速离心法从树突状细胞培养上清中获取DCex,应用电子显微镜观察DCex形态并通过流式细胞术检测和鉴定其细胞来源。取第3代MSC,设3组培养诱导体系：①对照组：d—MEM基础培养液组;②实验组：d—MEM基础培养液＋DCex（10μg/m1）组;③α-MEM基础培养液＋标准诱导剂组。采用荧光实时定量PCR、琼脂糖凝胶电泳检测各组成骨分化转录因子Runx2mRNA的表达情况,并进行碱性磷酸酶（ALP）活性检测。另外,荧光染料DiI标记DCex,应用共聚焦显微镜观察DCex进入MSC的过程。结果显示,在电子显微镜下DCex呈典型的圆形或椭圆形膜层结构,直径为40—100nm,并表达DC细胞的标志物CD83,CD86,CD80和HLA—DR。在DCex处理MSC后6h时,可在共聚焦显微镜下观察到进入到MSC胞质内的DCex,随着作用时间延长,细胞荧光强度增加。按组培养第7天,DCex实验组Runx2表达较对照组增高,差异有统计学显著性（P〈0．05）;MSC培养第14天,DCex组ALP含量OD值与对应蛋白比为2．22±0．27,显著高于阴性对照组（1．20±0．21）（P〈0．01）,但低于标准诱导组（3．22±0．24）（P〈0．05）。结论：DCex可以促进MSC向成骨细胞分化,其且体机制仍需讲一步研穷证实．     

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子膀胱灌注治疗骨髓移植术后出血性膀胱炎的疗效观察

目的：评估粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)治疗单倍体骨髓移植术后并发Ⅲ～Ⅳ级出血性膀胱炎的临床效果。方法：对7例出血性膀胱炎患者应用GM-CSF进行膀胱灌注300μg／d，连用5天。结果：7例患者中有6例完全缓解，1例无效，获得完全缓解的中位时间为11．3d(范围5～16d)。结论：膀胱灌注GM-CSF治疗骨髓移植术后出血性膀胱炎有效，未见不良反应发生。     

达利珠单抗在未去T淋巴细胞单倍体相合的骨髓移植中的应用

目的探讨达利珠单抗预防未去T淋巴细胞单倍体相合骨髓移植后移植物抗宿主病(GVHD)的效果。方法9例白血病患者接受单倍体相合的骨髓移植，HLA有2～3个抗原错配，移植骨髓未去除T淋巴细胞，对受者除采取环孢素A、甲氨蝶呤、抗胸腺细胞球蛋白和霉酚酸酯联合应用等综合措施外，还分别在移植前2h和移植后第4d加用达利珠单抗预防GVHD。结果9例均获造血重建，骨髓植活直接证据证实为完全供者造血，无一例发生Ⅱ度以上急性GVHD，除1例因巨细胞病毒感染于移植后3个月死亡外，其余患者存活均超过1年，8例均发生局限性慢性GVHD，现无病存活者7例，1例在移植后14个月因原发病复发死亡。结论达利珠单抗联合其它免疫抑制措施对单倍体相合骨髓移植后的GVHD有较好的抑制作用。     

免疫抑制剂联合脐带间充质干细胞输注治疗单倍型相合造血干细胞移植后急性移植物抗宿主病的初步观察

急性移植物抗宿主病(aGVHD)是异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)尤其是单倍型相合造血干细胞移植的严重并发症之一,约半数患者对激素等一线治疗耐药.重度aGVHD患者病死率较高,成为影响造血干细胞移植总体疗效的重要因素.间充质干细胞( MSC)为中胚层发育的早期细胞,是一类多能干细胞.近年来的研究显示[1],MSC具有促进造血和减轻GVHD作用.我院2008年1月以来应用体外扩增的人脐带组织源间充质干细胞( hUC-MSC)治疗9例单倍型相合HSCT后激素耐药aGVHD患者,获得较好疗效,现将结果报告如下.     

飞行员特发性血小板减少性紫癜放飞二例

一、临床资料 例1,男性,26岁,初教-6飞行员,飞行时间900 h.患者于2007年11月在疗养院体检时发现血小板为62×109/L.同年12月分别在解放军第四○一医院、二一一医院就诊,经血象、骨髓象检查后诊断为特发性血小板减少性紫癜,给予人血丙种球蛋白冲击治疗,10 g/d、甲基强的松龙80 mg/d;2 d后复查血象,血小板为33×109/L.2008年1月收住我院血液科.     

血浆置换成功救治冷凝集素病1例

冷凝集素病是一种少见的难治性疾病,激素治疗效果不好,输血会加重溶血.由于冷凝集抗体IgM在血管内占优势,血浆置换可以作为有效的治疗手段[1].     

多种来源造血干细胞移植治疗重型再生障碍性贫血

背景：造血干细胞移植是年轻重型再生障碍性贫血患者首选方法,但在中国多数重型再生障碍性贫血患者无合适的供者,单倍体相合或非血缘造血干细胞移植国内外目前还处于探索阶段,联合间充质干细胞移植报道少见。 目的：观察不同干细胞来源造血干细胞移植治疗重型再生障碍性贫血的疗效。 方法：10例(3~52岁)重型再生障碍性贫血患者,分别接受了亲缘HLA相合(2例),单倍体相合(5例),非血缘(3例)的外周血和/或骨髓造血干细胞移植,其中5例患者同时联合了间充质干细胞共移植。预处理方案主要为环磷酰胺、氟达拉滨和抗人胸腺球蛋白,以霉酚酸酯、环孢素A加短疗程的甲氨蝶呤预防移植物抗宿主病,单倍体相合移植的患者在此基础上加马利兰和CD25单克隆抗体;同基因的例5患者预处理方案为抗人胸腺球蛋白+甲基泼尼龙。输注间充质干细胞的量为(0.27~1.85)×106/kg。接受和未接受间充质干细胞组的患者回输的造血干细胞有核细胞分别为(7.4~17.38)×108/kg和(6.09~13.68)×108/kg。 结果与结论：除1例单倍体相合患者移植未成功,+36 d死于并发症外,余患者移植后染色体及DNA指纹检测等说明造血干细胞移植完全供者植入。移植后中性粒细胞达到0.5×109 L-1,血小板计数≥20×109 L-1中位时间分别为12 d和13 d;其中造血功能恢复快慢的趋势是同基因移植>外周血或/和骨髓+间充质干细胞移植>单纯外周血或/和骨髓干细胞移植,而亲缘HLA全相合的52岁患者造血恢复最慢。非血缘移植例1、6患者发生了Ⅰ度急性移植物抗宿主病,单倍体相合移植的例2和例10患者发生了Ⅱ度急性移植物抗宿主病后出现了局限性的慢性移植物抗宿主病,余下患者移植后生活质量良好,无慢性移植物抗宿主病;除未接受间充质干细胞的例3患者移植后出现严重感染外,其余患者移植后再未出现严重的感染和出血。结果提示造血干细胞是安全,高效治疗重型再生障碍性贫血的方法,联合应用间充质造血干细胞者患者造血恢复快,移植并发症少。     

一种从骨髓血凝块中分离间充质干细胞的方法

目的 探讨一种从骨髓血凝块中分离培养间充质干细胞的简易方法.方法 采集肝素化骨髓标本7份,部分加入凝血酶以模拟血液凝固过程,并于0、8和16 h分别使用尿激酶或机械处理,分为尿激酶处理组、机械处理组、凝固未处理组及未凝固对照组.各组标本经氯化铵溶解红细胞后,分别进行成纤维细胞集落形成单位(CFU-F)和MSC传代培养.计每组CFU-F及第0、1和2代MSC数量.流式细胞仪测定细胞表型,组织化学法检测细胞体外成骨和成脂肪能力.结果 尿激酶处理组样本CFU-F数平均为(33.71±23.54),接近于未凝固对照组样本(40.43±21.29)(n=7,P＞0.05),显著高于机械法处理组(13±11.91)(n=7,P＜0.01)和凝固未处理组(3.71±3.89)(n=7,P＜0.01).储存8或16h后的标本,各组CFU-F形成能力下降,而未凝固对照组和尿激酶处理组数量仍显著高于另外两组(P＜0.05).标本储存不同时间进行MSC传代培养,未凝固对照组及尿激酶处理组细胞数量无明显差别,但均显著高于凝固未处理组及机械处理组.各组MSC均表达CD73和CD90,不表达CD31和CD45.经特异诱导后,各组MSC均呈现碱性磷酸酶活性,细胞内出现亲油红O染料的脂肪滴.结论 对于已经凝固的骨髓标本而言,尿激酶预处理是分离培养MSC的良好途径.