长管状骨骨折对血清瘦素和急性期反应蛋白及脏器功能生化指标的影响

目的 分析长管状骨骨折（LTBF）时血清瘦素（Leptin）、急性期反应蛋白及脏器功能生化指标的变化，探讨Leptin在创伤炎症反应中的作用。方法 收集100名四肢LTBF患者及100名正常对照者血清。采用放射免疫分析法检测血清Leptin及3种急性期反应蛋白[C-反应蛋白（CRP）、白细胞介素-1（II，-1）、IL-2]水平；采用全自动生化分析仪检测21项代表不同脏器和代谢功能的指标，分析Leptin与其他指标的相关性。结果与正常对照组比较．LTBF患者血清Leptin、CRP、IL-1及IL-2均显著升高（P均〈0．05）；肝、心、肾及代谢功能亦有不同程度改变；Leptin与其他各指标间相互独立并发挥独特作用。结论 Leptin在L-rBF所致急性创伤炎症反应中显著上升，对LTBF具有较强的应答能力，可能发挥抗炎细胞因子的作用。     

瘦素的信号传输及其在消化器官损伤中的作用

瘦素(Leptin)亦称消脂素,是一种由ob基因编码的活性蛋白,主要参与机体摄食、能量代谢和体重平衡的调节,发挥抑制摄食和促进能量消耗的作用.此外,它还参与激活交感神经、调控胰岛素代谢、促进造血和调节免疫应答,并在创伤修复、生殖和内环境紊乱恢复等方面起一定的作用[1].近年来对Leptin多样性功能的研究逐步深入,本文就Leptin相关的信号传输途径以及Leptin在消化器官损伤中的作用综述如下.     

表皮生长因子（EGF）放射免疫分析方法建立及临床应用

目的：研究表皮生长因子（epidermal growth factor,EGF）放射免疫分析方法的建立和临床应用。方法：采用人EGF对豚鼠免疫,获得高比度的抗血清,建立了体外放射免疫分析,并用来检测正常人、肝癌、糖尿病、结肠癌、肺癌、胃癌、子宫肌瘤及卵巢癌患者血清EGF浓度。结果：标准曲线范围（0.2～27）ng/ml;批内和批间（CV）分别为4.6%及8.7%;灵敏度为0.18ng/ml;回收率在95%～104%之间。分别测定正常人、肝癌、糖尿病、结肠癌、肺癌、胃癌、子宫肌瘤及卵巢癌血清EGF浓度,依次为（0.52±0.25）ng/ml,n=74;（1.29±0.58）ng/ml,n=99;（1.91±0.58）ng/ml,n=90;（1.43±0.56）ng/ml,n=90;（1.30±0.47）ng/ml,n=95;（1.25±0.58）ng/ml,n=87;（1.49±0.46）ng/ml,n=44;（1.79±0.60）ng/ml,n=54。病人血清EGF浓度与正常人经统计学处理均P〈0.01,有显著性差异。结论：所建立的EGFRIA能用于临床及科研需要。     

去甲基化处理对NK-92MI细胞杀伤活力的影响

为观察DNA去甲基化处理对NK细胞系NK-92M1细胞抑制性KIR表达及细胞杀伤活力的影响,探讨抑制性k打基因去甲基化与NK细胞功能之间的可能联系,采用甲基化抑制剂5-氮胞苷处理NK-92MI细胞,采用流式细胞术检测NK-92MI细胞表面KIR3DL1、KIR2DL2／KIR2DL3、KIR2DL1表达及细胞活力,并采用流式细胞仪将NK-92MI细胞分选为KIR3DL1阳性和KIR3DL1阴性细胞群,采用乳酸脱氢酶释放法检测NK-92MI细胞对白血病细胞系K562的杀伤活力。结果显示：应用终浓度为1．0、2．5和5μmol／L的5-氮胞苷作用72小时可以诱导NK-92MI细胞KIR3DL1、KIR2DL2／KIR2DL3、KIR2DL1表达增加,同时NK-92MI对K562细胞的杀伤活力降低,5-氮胞苷在1—5μmol／L范围内不影响NK-92MI的细胞活力,KIR3DL1阳性NK-92MI细胞的杀伤活力较KIR3DL1阴性细胞的杀伤活力低。结论：去甲基化处理通过诱导抑制性KIR表达增加抑制NK-92MI细胞的杀伤活力。     

瘦素及其抗体对小鼠皮肤创伤的修复作用

为探讨Leptin对小鼠皮肤创伤的保护作用机制,本文采用昆明小鼠40只,在背部各制备4个全层皮肤缺 损创面(0.8 cm×0.8 cm),将创面分成4组,分别用mLeptin、mLeptin-Ab、mLeptin mLeptin-Ab、生理盐水局部涂抹,测定伤口愈合时间和愈合率,并通过RT-PCR对伤口组织Leptin、Leptin受体(OB-Rb)和EGF-R的表达 进行了检测.结果表明:与生理盐水对照组比较,mLeptin组和/或mLeptin-Ab组小鼠皮肤伤VI愈合时间明显缩 短(P<0.01),EGF-R的表达明显升高(P<0.01);单用mLeptin-Ab组小鼠皮肤伤口愈合率,EGF-R、OB-Rb和 Leptin的表达均显著提高(P<0.01).结论为Leptin和/或mLeptin-Ab均可促进小鼠皮肤伤口愈合;未发现 mLeptin-Ab对Leptin的中和作用,单用mLeptin-Ab反而能够促进伤口修复.     

丙酮酸乙酯对脓毒症小鼠器官损伤的影响

目的 探讨丙酮酸乙酯(EP)与碱性磷酸酶(ALP)在脓毒症损伤过程中的作用机制.方法 建立小鼠盲肠结扎穿孔致脓毒症模型.90只雄性昆明小鼠随机分为假手术组、模型组、EP干预组;制模后1 h EP组腹腔给予EP 75 mg/kg,模型组给予等量乳酸林格液;两组分别于术后15 min和1、3、6 h各取10只小鼠摘除眼球并取血后活杀.用全自动生化分析仪检测血清中ALP、尿酸(UA)及肺组织匀浆中乳酸/丙酮酸比值;采用苏木素-伊红(HE)染色观察小肠组织病理学变化并进行小肠病理损伤评分.结果 与假手术组比较,模型组和EP组血清ALP均呈显著下降趋势(P<0.05或P<0.01),EP组术后6 h显著低于模型组(P<0.05).模型组血清UA水平1 h时显著升高,3 h达峰值(P均<0.05),随后下降;而EP组呈相反的变化趋势,于1 h、3 h显著低于模型组(P均<0.05).EP组肺组织匀浆乳酸/丙酮酸比值于各时间点均显著低于模型组(P均<0.05).病理学观察发现,与模型组比较,EP组肠道结构损伤随时间延长明显减轻;3 h、6 h时小肠病理损伤评分明显低于模型组(P均<0.05).结论 EP能促进血清ALP的利用,降低血清UA水平,改善机体酸中毒以及肠道损伤,对脓毒症所致损伤的脏器发挥保护作用.     

瘦素对LPS诱导的小鼠胸腺细胞凋亡的保护作用

目的：观察瘦素对小鼠胸腺细胞凋亡的保护作用，探讨其作用机制。方法：取出小鼠胸腺细胞，用MTT法检测瘦素对胸腺细胞的毒性作用，采用Annexin V／PI双染色法流式细胞仪检测细胞凋亡，以RT-PCR检测caspase 3 mRNA的表达。结果：瘦素可呈剂量依赖性的减少LPS对胸腺细胞的毒性作用，流式细胞仪检测表明瘦素可抑制LPS诱导的细胞凋亡，其浓度〉100ng／ml时有统计学意义。RT-PCR表明加入瘦素后caspase3的表达下降，且呈剂量依赖性。结论：瘦素对LPS诱导的胸腺细胞凋亡有一定的抑制作用。     

肠缺血再灌注损伤对血清及脂肪组织Leptin水平的影响

背景近年来的研究发现脂肪组织不仅仅是脂肪的储存库,还是一种能够分泌多种功能性细胞因子的多潜能内分泌器官.Leptin是一种由脂肪组织特异性分泌的蛋白质,主要功能是抑制摄食和增加能量消耗.目的研究肠缺血再灌注损伤对血清及脂肪组织Leptin水平的影响,探讨Leptin在急性炎症反应中的作用.设计完全随机设计,自身及组间对照.地点和材料本实验于解放军总医院生化研究室完成.3只雄性新西兰白兔及54只雄性SD大鼠作为实验动物.干预免疫新西兰白兔获得Leptin抗体,采用氯胺-T法碘标记Leptin抗原,由此建立一种简便的鼠Leptin放射免疫分析法.建立大鼠肠缺血再灌注损伤模型,实验大鼠随机分为6组假手术组(sham)、缺血60min-再灌注30 min组(I60-R30),I60-R90,I60-R150,I60-R240及I60-R360组,每组9只.主要观察指标采用放射免疫分析法测量血清及脂肪组织Leptin浓度变化.结果与损伤前自身对照组的血清Leptin水平相比,肠缺血60min再灌注损伤30min(I60-B30)组显著降低(t=2.389 1, P＜0.05),I60-R150组呈现增高的趋势,而I60-R360组显著增高(t=-2.343 7,P＜0.05);与损伤后sham组的血清Leptin水平(9.88±1.87)βg/L相比,I60-R240组呈现增高的趋势,而I60-R360组(19.43±2.84)μg/L显著增高(t=-2.808 5,P＜0.05);与损伤后sham组的脂肪组织Leptin水平(11.12±1.27)ng相比,I60-R30(4.46±2.63)ng、I60-R90组(3.45±2.77)ng显著降低(t=2.280 4,2.517 0,两者P均＜0.05),而I60-R360组(17.54±1.87)ng显著增高(t=-2.840 1,P＜0.05).结论Leptin对肠缺血-再灌注损伤等急性炎症刺激具有时间依赖效应,并在急性炎症反应的能量代谢障碍中发挥一定作用.     

丙酮酸乙酯对脓毒症小鼠血清Leptin及乳酸／丙酮酸比值、ALT和UA的影响

探讨丙酮酸乙酯(Ethyl Pyruvate,EP)对脓毒症小鼠血清Leptin、乳酸/丙酮酸比值、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和尿酸(UA)水平的影响.建立小鼠脓毒症模型,90只昆明小鼠随机分为:假手术组(Sham组)、林格氏液组(RLS组)、EP处理组(REPS组),后两组又设立15 min、1 h、3 h、6 h组,每组10只,用全自动生化分析仪检测血清乳酸/丙酮酸比值、ALT、UA;RIA测定血清Leptin水平.结果表明:1、血清Leptin水平:REPS组后期显著高于RLS组(P＜0.05)2、乳酸/丙酮酸:与Sham组比较,RLS组与REPS组均显著升高(P＜0.05或P＜0.01);REPS组与RLS组比较各相同时间点之间无显著性差异.3、血清ALT:与Sham组比较,REPS组与RLS组均显著增高(P＜0.01或P＜0.05);REPS组在后期显著高于RLS组(P＜0.05).4、血清UA:与Sham组比较,RLS组先显著升高(P＜0.05)后降低,REPS组先降低后升高,后期显著高于Sham组(P＜0.05);REPS组与RLS组比较显著降低(P＜0.05).EP对脓毒症损伤小鼠肾功能具有一定的保护作用,并加重脓毒症早期肝脏损伤,同时能促进Leptin的释放.     

C反应蛋白酶联免疫分析和化学发光免疫分析的建立及其初步应用

采用高纯度的C反应蛋白(CRP)免疫兔,获取高效价的CRP抗体.提取抗血清中IgG,包被酶标板.用生物素标记CRP抗原,辣根过氧化物酶标记亲和素,建立CRP的ELISA和化学发光免疫分析法(CLIA).用ELISA测定正常人80名,心梗患者43例和重症监护室(ICU)病人39例的血清CRP水平,发现心梗患者(27.21±38.67μg/mL)明显高于正常人(0.57±2.99μg/mL)(P《0.05);ICU病人(117.48±97.05μg/mL)明显高于正常人及心梗患者(P《0.001和P《0.01).用CLIA检测正常人68名,结果为0.77±3.29μg/mL.随机收集病人血清样品73份,分别用免疫比浊法、ELISA和CLIA检测,经统计三种方法高度相关.结果提示:ELISA和CLIA是一种简便、灵敏和特异的CRP测定方法,可用于人血清中CRP的测定.