植物血凝素及淋巴因子激活的杀伤细胞胞体外抗肿瘤作用的MTT比色法分析

目的：检测植物血凝素及淋巴因子激活的杀伤细胞（PHA－LAK）的体外广谱抗肿瘤作用。方法：用MTT比色法测定PHA－LAK对体外培养的K562，MGc80-3,143TK^-,143TK^-,HeLa,LoVo等5种肿瘤细胞的杀伤活性。结果：PHA－LAK对5种不同组织器官来源的肿瘤细胞均有明显杀伤活性，在效靶化为7．5：1．0时，PHA－LAK对143TK^-细胞的杀伤率可高达57．3％，杀伤效应随效靶比增加而升高；但在效靶比为15：1时，杀伤效应不随效靶比增加而增高数。结论：（1）来自健康献血员的PHA－LAK对肿瘤细胞具非特异性杀伤活性，能较好解决传统过继免疫治疗中免疫应细胞的数量和活性问题；（2）在一定的条件下，MTT法用于检测免疫效应细胞的杀瘤作用时才具寻敏，可靠的优点。     

血管形成素在宫颈鳞癌组织中的表达

目的:观察血管形成素(angiogenin,ANG)在宫颈鳞癌组织中的表达情况并探讨其临床病理意义.方法:应用免疫组化方法对48例石蜡包埋宫颈鳞癌组织切片进行ANG蛋白表达的检测,并分析其与宫颈癌患者年龄、肿瘤分化程度和浸润的关系.结果:48例宫颈癌中全部ANG蛋白免疫染色为阳性,分布部位在细胞浆和细胞核,细胞类型以癌细胞、间质成纤维细胞和血管内皮细胞表达为主.高分化组与低分化组之间(P=0.0032)、中分化组与低分化组之间ANG表达的差异有统计学意义(P=0.0265),有浸润和无浸润组之间差异有显著性(P=0.0184).结论:ANG蛋白在宫颈鳞癌中普遍表达,且表达水平与肿瘤分化程度以及浸润有关,提示ANG可能参与宫颈癌的发生发展.     

CEA分泌性肿瘤基因疫苗的研究

以CEA为靶抗原的基因免疫治疗是近年来肿瘤治疗学研究的突出进展,我们用CEA阳性中国胃癌细胞株构建了胃癌cDNA定向表达基因文库,库容量为1.2×10~6,重组率>99%.从文库随机挑出10个噬菌斑,对其插入片段做PCR扩增,电泳显示插入片段大小介于0.5～5Kb,平均1±500pb,符合一般cDAN文库构建的要求,为今后克隆已知或未知目的基因创造了条件.用国外获得的人CEA真核表达质粒,构建了中国天坛株重组人CEA痘苗病毒(rV-CEA),经细胞学和兔动物接种实验再次证实:中国天坛株痘苗病毒也是一种高效真核表达载体;rV-CEA在活体可高效表达人CEA,可激发机体抗CEA的免疫反应;rV-CEA的应用是安全的.用CEA真核表达质粒(pCEA)免疫兔子,兔血清CEA含量升高,     

人胃癌细胞定向克隆表达cDNA文库的构建及鉴定

目的：克隆胃癌的相关基因。方法：提取人胃癌细胞总RNA，分离其mRN。以NatI／oligo（dT）12-18为引物合成双链。cDNA，除去小于400bp的cDNA片段后，连接EcoRⅠ人工接头，经NotⅠ酶酶切，插入定向克隆表达载体λExcellNotI／EcoRI／CIP，体外包装后转染大肠杆菌NM522，构建了人胃癌细胞MGC－803定向克隆表达。cDNA文库。结果：文库含1．2×106个重组子，重组率为96．7％。用PCR技术鉴定，文库中插入cDNA的平均大小为1kbc结论：该文库适于筛选各种丰度mRNA的cDNA克隆。     

血管内皮生长因子受体KDR的靶向制剂的制备

目的：研究从噬菌体肽库中筛选到的与血管内皮生长因子受体Ⅱ(KDR)有特异结合活性的小肽，做为KDR靶向药物的先导物质的应用。方法：从噬菌体肽库中筛选能特异结合KDR的噬菌体克隆，挑选结合力最强的克隆测序并化学合成小肽P5，梯度ELISA、阻断实验和竞争结合实验测定小肽在体外与KDR的结合活性。将P5与生物素(NHS-d-Biotin)、BSA化学偶联，ELISA法和细胞免疫组化实验检测偶联物与KDR的结合活性。结果：化学合成的小肽P5在体外能特异结合KDR，Kd=168．6nmol／L，约是KDR与配体血管内皮生长因子(VEGF165)亲和力的1／30，P5能阻断VEGF165与KDR的结合活性，但不能竞争VEGF165与KDR的结合活性。将P5作为导向物质化学合成的P5-BSA-Biotin，在体外同样具有与KDR和细胞表面KDR分子结合的特性。结论：化学合成的小肽P5有望作为先导分子，在以KDR为靶点的肿瘤靶向治疗中得到应用。     

抗人血管生长素噬菌体基因工程抗体文库的筛选及可溶性抗体的制备

目的 制备高活性的可溶性抗人血管生长素噬菌体基因工程抗体。方法 采用ＥＬＩＳＡ等方法从文库中筛选高活性的抗体，再通过大肠杆菌ＨＢ２１５１使其以可溶性抗体形式表达，结果 获得了可溶性抗人血管生长素噬菌体基因工程抗体，结论 建立一种制备抗人血管生长素抗体的方法，该抗体在肿瘤的临床治疗上具有广阔的应用前景。     

正常恒河猴脾转移因子对人淋巴细胞内CAMP ~3H—TdR掺入及E受体的影响

正常人转移因子(简称 TF)在国内外应用于临床已有多年,对多种免疫性疾病有显著疗效。但正常人 TF 的材料来源有限。因此,我们拟探讨灵长类动物恒河猴的脾脏和淋巴结制备的 TF,除试投予临床试用外,亦对其进行一些体外免疫性的研     

疱疹病毒gD基因多聚核苷酸疫苗的构建和表达

目的：构建疱疹病毒gD2基因多聚核苷酸疫苗并在实验动物中得到表达。方法: 将构建的pcDNA3－gD2的质粒DNA注射入豚鼠的舌肌中,每周1次,共3次,最后1次免疫48h后引颈处死豚鼠,并取其舌、肝、脾、肾、心脏及股四头肌,用免疫组化法（SP法）检测gD2抗原的表达。结果：重组质粒组gD2真核表达载体免疫接种后,均可在舌肌测到抗原表达,而对照组均为阴性。结论：重组质粒gD2真核表达载体可以在豚鼠舌肌中表达,对建立基因免疫防治疱疹病毒感染奠定一定基础。     

钙载体A_(23187)快速诱导人外周血单核细胞成树突状细胞

 目的　探讨钙载体 (calciumionophore ,CI)A2 3 187对正常人外周血单核细胞来源的树突状细胞(Dendriticcell,DC)形态、表面分子表达及免疫功能的影响。方法　分离健康献血者外周血单核细胞 ,分别加入 :重组人粒 /单集落刺激因子 (rhGM CSF) 10 0ng/ml、rhGM CSF 10 0ng/ml +IL 4 5 0ng/ml、rhGM CSF +A2 3 187(钙载体 ,CI)各 10 0ng/ml。体外培养 4 0h后 ,于光镜及电镜下观察细胞的形态、流式细胞仪检测细胞的表面标志、MTT比色法检测上述细胞对同种异体T细胞的刺激增殖作用。结果　外周血单核细胞在GM CSF +A2 3 187各 10 0ng/ml的条件下培养 4 0h ,就可看到典型的DC形态 ,其表面单核细胞的特征性标志CD14分子表达减少 ,HLA DR、CD80、CD86及CD83分子的表达均明显增高 ,且具有明显刺激同种异体T细胞增殖的能力。结论　外周血单核细胞在钙载体A2 3 187及GM CSF的共同作用下 ,4 0h就能获得成熟的DC     

参桃软肝丸抑制人肝癌细胞增殖及增强LAK抑瘤活性的实验研究

目的：研究中药复方参桃软肝丸对人肝癌细胞BEL－7402、SMMC－7721增殖的影响,探讨其抗癌作用机制。方法：参桃软肝丸灌胃给药后,采集大鼠血清,处理人肝癌细胞BEL－7402、SMMC－7721,MTT法观察细胞增殖;并与淋巴因子激活的杀伤细胞（LAK）共同处理以上两种细胞,结果：参桃软肝丸具有显著抑制BEL－7402、SMMC－7721增殖的活性,结论：抑制人肝癌细胞增殖,提高LAK活性可能是参桃软肝丸抗肝癌的主要作用机制。