SIK2 shRNA重组腺病毒载体构建及其在3T3-L1脂肪细胞的表达

目的构建特异性小鼠盐诱导基因（Salt induced kinase2,SIK2）的shRNA腺病毒载体,干扰脂肪细胞中SIK2的表达。方法设计3对靶向SIK2的shRNA,插入穿梭质粒pENTR/U6载体,转染3T3-L1脂肪细胞,通过Real-timePCR方法筛选最佳沉默SIK2效果的穿梭质粒,经腺病毒同源重组后,重组小鼠SIK2shRNA腺病毒载体经脂质体转染HEK293A细胞,在细胞内包装获得腺病毒颗粒AdV-SIK2-shRNA,并进行大量扩增和纯化。纯化的腺病毒感染成熟的3T3-L1脂肪细胞,通过Real-time PCR及免疫印迹法检测鼠SIK2在3T3-L1脂肪细胞中的表达水平。结果纯化后的Ad-shRNA-SIK2重组腺病毒载体可特异下调成熟3T3-L1脂肪细胞SIK2 mRNA和SIK2蛋白的表达。结论干扰3T3-L1脂肪细胞SIK2表达的短发夹RNA重组腺病毒载体构建成功。     

子宫破裂12例分析

现将我院收治的子宫破裂12例分析如下。1临床资料1.1一般资料我院1996-07~2005-06共收治孕产妇11 068例,其中子宫破裂12例,发生率1.08‰,所有病例均由院外转入。孕产妇年龄26~36岁,孕周33+1~42周。初产妇1例,经产妇11例。所有孕产妇均为郊县农村或社会流动人员,未做定期产前检查,发生子宫完全性破裂8例,不全性破裂4例。孕产妇死亡1例(8.3%),围产儿死亡8例(66.6%)。1.2子宫破裂的原因(1)疤痕子宫破裂:本组病例中疤痕子宫破裂5例,除1例疤痕子宫妊娠合并肌瘤在妊娠晚期(38周)发生子宫自然不全破裂外,其余疤痕破裂发生于分娩期,规律宫缩4~9 h期…     

多重聚合酶链反应检测vWF基因内微卫星DNA与vWD患者家系分析

目的：研究中国人ｖＷＦ基因内含子４０中２个微卫星位点扩增片段长度多态性（ａｍｐ－ＦＬＰ），并进行血管性血友病（ｖＷＤ）家系分析。方法：多重聚合酶链反应（ＰＣＲ）一次反应扩增Ａ、Ｂ两个片段，用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和高敏感度银染方法分析Ａ、Ｂ位点的ａｍｐ－ＦＬＰ。对１１２名上海地区正常人和两个ｖＷＤ家系成员ＤＮＡ标本进行了检测。结果：①所检测上海人群中在Ａ位点存在７种ａｍｐ－ＦＬＰ，杂合率为７５％；Ｂ位点存在５种ａｍｐ－ＦＬＰ，杂合率为７４％。②在两个ｖＷＤ家系中发现单倍型Ａ２／Ｂ３和Ａ４／Ｂ３分别与致病基因连锁，结合临床症状，为遗传咨询提供了线索。结论：①多重ＰＣＲ检测微卫星ＤＮＡ方便、快捷，适用于临床应用进行遗传性疾病的家系分析和遗传咨询。②ｎｔ１８９０－１９９０和ｎｔ２２１５－２３８０是用于ｖＷＤ家系连锁分析和遗传咨询较好的ｖＷＦ基因内遗传标记。     

多重聚合酶链反应检测vWF基因内微卫星DNA与vWD患者家第分析

研究中国人ｖＷＦ基因内含子４０中２个微卫星位点扩增片段长度多态性，并进行血管性血友病家系分析。方法；多重聚合酶链反应一次反应扩增Ａ，Ｂ两个片段长度多态性用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和高敏感度银染方法分析，ＡＢ位点的ａｍｐ－ＦＬＰ。对１１２名上海地区正常人和两个ｖＷＤ家系成员ＤＮＡ标本进行了检测。     

子宫内膜异位症患者子宫内膜组织中PDGF和OPN表达的变化及其相关性

目的探讨子宫内膜异位症(EMs)患者子宫内膜组织中血小板源性生长因子(PDGF)、骨桥蛋白(OPN)的表达变化及其相互关系。方法选取舟山市妇女儿童医院收集的88例EMs患者在位内膜、异位内膜组织,因盆腔器官脱垂等其他类型疾病获取的正常子宫内膜组织60例作为对照组;采用免疫组化染色技术检测两组标本中的PDGF、OPN表达水平,采用Spearman秩相关分析法分析二者表达的相关性。结果EMs组在位内膜、异位内膜组织中的OPN阳性表达率均高于对照组(P<0.05),异位内膜组织中的OPN阳性表达率高于在位内膜(P<0.05);EMs组在位内膜、异位内膜组织中的PDGF阳性表达率均高于对照组(P<0.05),异位内膜组织中的PDGF阳性表达率高于在位内膜(P<0.05);EMs组在位内膜组织中OPN与PDGF表达无明显的相关性(r=0.189,P=0.077);EMs组异位内膜组织中OPN与PDGF表达呈显著的正相关关系(r=0.560,P=0.000)。结论EMs患者子宫内膜组织中PDGF、OPN呈异常高表达,在异位内膜组织中二者表达具有一定的协同作用。     

胰岛素泵治疗对不同病程2型糖尿病患者8-异前列腺素F2α的影响

8-异前列腺素F2α是细胞膜上脂化的花生四烯酸受自由基攻击后裂解而形成的前列腺素衍生物,其产生与机体氧化应激损伤关系极为密切,是评价氧化应激和脂质过氧化反应最有效的生物指标之一[1].其可以促进胰岛素抵抗及胰岛β细胞功能凋亡.2型糖尿病被证实与氧化应激及炎症密切相关,C-反应蛋白是反应炎症的重要因子.胰岛素泵强化治疗可在短期内获得理想的血糖控制,逆转高血糖的某些毒性作用,使胰岛β细胞功能得到恢复,胰岛素分泌增加,改善机体胰岛素抵抗[2].目前国内外对胰岛素泵干预对8-异前列腺素F2α及C反应蛋白的影响尚未见相关报道,本试验通过对不同病程的2型糖尿病患者胰岛素泵强化治疗,测定8-异前列腺素F2α及C反应蛋白的变化情况,探讨胰岛素泵在氧化应激及炎症中的作用.