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兔骨髓基质细胞的体外培养及鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
背景:骨髓基质细胞的分离纯化、细胞培养、细胞标记、诱导因子、基因转染对细胞生物学影响、细胞载体构建及细胞复合物回植时间的选择等尚处于实验研究阶段。
目的:摸索一种较为简便且可有效获得骨髓基质细胞的体外培养方法。
设计、时间及地点:细胞学体外实验,于2006-06/2007-01在中国科学院北京基因组研究所完成。
材料:SPF级6周龄新西兰大白兔8只,由中国科学院遗传发育研究所实验动物中心提供。
方法:无菌条件下抽取兔骨髓1 mL,D-Hanks液稀释后,离心弃上清,DMEM培养基重悬,制备单细胞悬液,叠加在密度为1.077的等体积淋巴细胞分离液的液面上,离心后取界面云雾状的单个核细胞层,用含有20%胎牛血清的DMEM培养基重悬。以1×10/cm2接种后贴壁法纯化细胞,待70%~80%长满单层后消化传代。
主要观察指标:倒置显微镜下观察细胞生长情况,锥虫蓝染色计数活细胞,苏木精-伊红染色对细胞进行鉴定,MTT法检测细胞活性,观察传代培养的细胞冻存后复苏情况。
结果:接种24 h后细胞开始贴壁,呈短梭形或三角形,且有长短不等的细胞突起;3 d后贴壁细胞开始分裂增殖,部分区域形成细胞团簇;1周后大部分细胞呈成纤维状散落在培养瓶底生长;传代后细胞均匀分布,形态呈细长梭形,并沿一定方向排列,1 mL骨髓基质细胞悬液传3代后的贴壁细胞数可达5×106~1×107数量级。骨髓基质细胞成活率约为90%,经鉴定为单核细胞,接种后1~6 d细胞持续旺盛生长,至第8天细胞活性最高,随后生长活性下降。复苏冻存56 d的细胞,其生长良好,增长迅速。
结论:以淋巴细胞分离液梯度离心后可获得纯度较高的骨髓基质单核细胞,经体外扩增培养能够得到足够数量的种子细胞,冻存复苏后细胞活性无变化。 相似文献
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目的:研究小鼠局灶性脑缺血再灌(Ⅰ/R)后c-Jun氨基端激酶(JNK)通路在皮质神经元凋亡中的作用,探讨新的拟apoE-1410肽通过此途径发挥的保护机制.方法:建立小鼠可逆性大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,在预定时间点观察皮质区组织学变化,采用免疫组织化学法检测p-c-Jun、 caspase-3的表达;免疫印迹法检测p-c-jun的表达,TUNEL法检测皮质区凋亡细胞数.结果:与对照组比较,模型组12h后存活神经元数目明显降低;各组小鼠p-c-Jun、 caspase-3阳性反应均有不同程度增强;随缺血时间延长,凋亡细胞增多,并于24h达高峰.与模型组比较,治疗组各时相点3项指标的表达均不同程度下调. Ⅰ/R 3h~24h皮质区p-c-Jun表达与caspase-3呈正相关;caspase-3与TUNEL呈正相关.结论:缺血侧皮质区p-c-Jun表达的增强可能通过激活caspase依赖的凋亡途径诱导Ⅰ/R后神经元凋亡;拟apoE-1410肽对Ⅰ/R具有一定的治疗作用,其机制之一可能是通过抑制JNK通路活化实现的. 相似文献
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目的观察馥感啉口服液治疗毛细支气管炎痰热闭肺证的临床疗效。方法 2015年4月至2016年3月莱芜市人民医院儿科收治住院的毛细支气管炎痰热闭肺证患儿106例,随机分为对照组52例和观察组54例。对照组给予利巴韦林抗病毒,布地奈德、沙丁胺醇雾化吸入等常规治疗。观察组在对照组治疗基础上加馥感啉口服液口服。疗程7d。比较两组间的治疗结果。结果观察组用药后第3天,咳嗽、咳痰、发热等单项症状有效率优于对照组(P0.05);用药第5天,除发热外,其他各单项症状有效率均高于对照组。结论馥感啉口服液联合西医常规治疗比单纯应用西医治疗毛细支气管炎痰热闭肺证起效快,疗效好,安全性高。 相似文献
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大黄是我国常用大宗药材之一,其基原植物为唐古特大黄、药用大黄和掌叶大黄。不同基原的大黄药材活性成分和药效存在差异,为快速准确鉴定大黄药材3个基原物种,本文利用Illumina高通量测序技术对大黄药材基原物种叶绿体基因组进行测序,完成其组装注释与结构特征解析,并基于叶绿体基因组高变区开发精准鉴别大黄药材3个基原物种的特异DNA条形码,最后进行验证。结果如下:唐古特大黄、药用大黄和掌叶大黄叶绿体基因组全长分别为161 039 bp、161 093 bp和161 136 bp,呈典型四分体结构,均编码131个基因,包括86个蛋白质编码基因、37个tRNA基因和8个rRNA基因。基于高变区设计的5对引物均可对42份样品有效扩增,测序结果分析证明rps16-trnQ、psaA-ycf3、psbE-petL、ndhF-rpl32与trnT-trnL均可作为特异DNA条形码准确鉴定唐古特大黄、药用大黄和掌叶大黄。本文可为大黄药材3个基原物种分类鉴定、保证大黄药材临床用药安全及规范大黄药材市场提供依据。 相似文献