利拉鲁肽对博来霉素诱导大鼠肺纤维化的作用及其机制研究

目的：研究利拉鲁肽（liraglutide,Li）对博来霉素（bleomycin,BLM）诱导大鼠肺纤维化的影响及其机制。方法：将SD大鼠随机分为4组：对照组（Con）、BLM组、BLM+Li组、Li组。气管内一次性注入BLM（4 U/kg）后,BLM+Li组、Li组大鼠予以每日皮下注射Li（0.2 mg/kg）。28 d后处死大鼠,采用HE、Masson三色染色法评估肺组织病理情况;甲苯胺蓝染色法评估肥大细胞浸润情况;碱水解法测定肺组织羟脯胺酸水平;RTq PCR法检测肺组织I型胶原蛋白α1、Ⅱ型胶原蛋白α1、Ⅲ型胶原蛋白α1、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor,TNF）?α、白介素（interleukin,IL）?6、IL?1β、转化生长因子β1（transforming growth factor β1,TGF?β1）mRNA水平;ELISA法检测肺组织TNF?α、IL?6、IL?1β含量;免疫荧光法检测上皮细胞钙连蛋白（E?cadherin）、α?平滑肌肌动蛋白（α?smooth muscle actin,α?SMA）的表达;Western blot法检测E?cadherin、紧密连接蛋白1（zonaoccluden?1,ZO?1）、闭合蛋白（Occludin）、α?SMA、TGF?β1的表达。结果：与BLM组相比,BLM+Li组肺组织炎症细胞浸润、肺泡结构破坏及纤维化程度减轻,羟脯胺酸及胶原含量显著降低。Li能抑制BLM诱导的肺组织TNF?α、IL?6、IL?1β、TGF?β1表达上调,并抑制上皮细胞标志物E?cadherin、ZO?1、Occludin下调及间质细胞标志物α?SMA的上调。结论：Li可减轻BLM诱导的大鼠肺纤维化,这种保护作用与其减轻肺内炎症反应、降低TGF?β1的表达及抑制上皮细胞间质转化有关。Li有望成为未来治疗肺纤维化的候选药物之一。     

Cbfαl对釉原蛋白转录调控作用的初步分析

目的：研究Cbfαl对釉原蛋白启动子转录活性的影响。方法：利用生物信息学的方法分析釉原蛋白启动子区域的序列，确定可能存在的结合位点，将利用PCR及酶切的方法从小鼠C57BL/6J基因组上扩增的、不同长度的釉原蛋白启动子构建的虫荧光素酶报告载体与Cbfαl共转Hela细胞，分析cbfαl对不同长度的启动子转录活性的影响，将包含整个启动子区域的报告载体与Cbfαl共转Hela、CHO、UMR-106细胞，分析在不同细胞中Cbfαl对全长启动子转录活性的影响。结果：在Hela细胞中，Cbfαl对各段启动子都有激活作用，且该作用不随着启动子长度的变化而变化，在CHO、UMR-106细胞中，Cbfαl对启动子转录活性的影响很弱。结论：在Hela细胞中，Cbfαl对釉原蛋白启动子的转录活性有明显的增强作用，而且在对逐步缩短的启动子表现出一致的增强效能。结合生物信息学对Cbfαl结合位点的分析，可以初步判断在启动子下游，第一个内含子中存在Cbfαl的作用位点，另外，这种增强作用表现出明显的上皮细胞特异性，表明Cbfαl对釉原蛋白启动子的增强作用是有组织特异性的。     

血清骨保护蛋白水平与骨质疏松发病的关系

目的探讨骨保护蛋白(OPG)在增龄、去卵巢小鼠和骨质疏松患者血清中的变化。方法应用双能X线骨密度仪和酶联免疫法分别测定增龄、去卵巢小鼠及骨质疏松症患者骨密度和血清OPG水平。结果去卵巢小鼠的骨密度显著低于增龄小鼠〔分别为(0.151±0.008)和(0.160±0.007)g/cm2,P<0.01〕,两组骨密度值均较成年鼠低(P<0.01);去卵巢小鼠血清OPG水平(20.57±7.00)pmol/L显著高于增龄小鼠(15.39±2.86)pmol/L,P<0.01;骨密度值与OPG浓度呈显著负相关(r=-0.246,P<0.05)。老年骨质疏松症患者血清OPG浓度男性和女性分别为(10.77±3.14)pmol/L和(10.56±2.56)pmol/L,均显著高于健康人〔男性和女性分别为(6.55±0.87)pmol/L(、9.19±1.73)pmol/L,P<0.01〕;血清OPG与年龄呈显著正相关(r=0.656,P<0.01)。结论血清OPG水平在骨质疏松小鼠模型和老年骨质疏松患者中均与骨密度或年龄密切相关,表明OPG浓度升高在老年绝经后骨质疏松的发病中具有重要作用。     

肺血管内皮功能紊乱与肺动脉高压

肺动脉高压是以肺血管阻力进行性增加并伴有不可逆的血管重塑为特征的疾病.越来越多的研究表明,肺血管内皮功能紊乱在肺动脉高压形成的起始及发展阶段都起着重要作用.本文就肺血管内皮功能紊乱在肺动脉高压发病机制中的研究进展作一综述.     

糖皮质激素的非基因组效应及其在支气管哮喘治疗中的作用

经典理论认为糖皮质激素(glucocorticoid,GC)通过调节基因表达发挥其生理药理作用,该过程耗时长,起效慢.然而,越来越多的证据表明GC可在数秒钟或者数分种内完成对神经内分泌、细胞因子释放、能量代谢及机体行为的调节,该效应被称为GC的快速非基因组效应.深入阐明GC非基因组作用机制将有助于指导GC的临床合理用药并减少其不良反应.以下就GC的非基因组效应机制及其在哮喘治疗中的作用展开综述.     

上海农村地区居民大病寻医行为及保障情况的个案研究术

选择上海某农村地区,通过多阶段随机抽样方法选取了2镇、6村、144户家庭作为样本,确定了其中7位发生过1万元以上住院费用的住院病人及其家庭为研究对象,分析其寻医行为和就医保障情况.(1)7位住院病人中,有3位放弃进一步的治疗,原因皆为无法负担医疗费用;(2)放弃继续治疗的家庭,自负医疗费用与当年收入的比在40%以上;不放弃继续治疗的家庭,自负医疗费用与当年收入的比在40%以下;(3)7户家庭有4户因为病人的医疗费用支出陷入贫困状态,在经过各方补偿之后,有2户脱离贫困状态,还有2户仍然致贫.(4)仍然致贫的家庭.一户是因为高额的癌症治疗费用导致返贫;另一户是因为车祸事主逃逸自身又是外来人口没有医保.     

鹦鹉热衣原体肺炎21例临床特征分析

目的 探讨鹦鹉热衣原体肺炎的临床诊疗特点。方法 回顾性分析2020年1月—2023年3月在南京医科大学第一附属医院住院并经宏基因组二代测序（metagenomic next-generation sequencing,mNGS）确诊的21例鹦鹉热衣原体肺炎患者的临床资料。根据重症肺炎诊断标准分为重症组（10例）和非重症组（11例）,分析两组临床表现、实验室检查、影像学特征、治疗及预后。结果 21例患者中男11例,女10例,平均年龄（51.7±11.6）岁,均为急性起病,12例有禽类接触史。18例患者发病时间为秋冬季节。所有患者均有高热,其他常见症状包括咳嗽、咳痰、胸闷及乏力。重症组实验室检查提示白细胞、中性粒细胞计数、C反应蛋白、降钙素原、转氨酶、肌酸激酶、乳酸脱氢酶（lactic dehydrogenase,LDH）、脑钠肽前体及D-二聚体水平明显高于非重症组。影像学检查发现所有患者均出现不同程度实变影及斑片影,周围伴有渗出,重症组患者中更易出现双肺受累、双侧胸腔积液、空洞及纵隔淋巴结肿大。治疗方面,11例患者单用四环素类药物,3例患者单用大环内酯类,2例患者单用呼吸喹诺酮类,5例患...     

多重连接依赖探针扩增技术检测胎儿非整倍体染色体异常

目的 探讨多重连接依赖探针扩增技术(multiplex ligation-dependent probe amplifiea-tion,MLPA)在检测胎儿非整倍体染色体异常中的作用. 方法 2007年6月至2008年12月对263例需进行产前诊断的孕妇(产前诊断组)取羊水或脐血进行MLPA检测,同时进行传统的染色体核型分析.对26例发生稽留流产或死胎的孕妇取胎儿组织提取DNA进行MLPA检测. 结果 产前诊断组检出5例21-三体,4例18-三体,1例13-三体和3例45,X,与细胞核型分析结果一致.稽留流产或死胎组检出2例45,x和1例18-三体. 结论 MLPA可用于检测胎儿最常见的13、18、21、X、Y染色体非整倍体异常,用于产前诊断,快速简单,准确经济,有一定的临床推广价值.     

GLUT4-Cre转基因模型建立与Cre酶特异性表达

目的：建立骨骼肌和脂肪组织特异性表达Cre重组酶基因的转基因小鼠，以期在上述组织细胞中实现相关基因的条件性剔除。方法：选择人葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)基因的启动子驱动Cre重组酶的特异性表达，利用基因重组技术，构建GLUT4-Cre转基因表达质粒。通过显微注射法将该质粒导入小鼠受精卵细胞核，获得的新生鼠经PCR和Southern杂交方法进行基因型的分析鉴定，常规方法培育、传代转基因鼠。用RT-PCR和免疫组化法对Cre酶在阳性转基因鼠体内mRNA和蛋白表达水平进行检测。结果：获得5只阳性转基因首建鼠，其中3只已建系并稳定传代。在脑、脂肪组织中检测到Cre基因表达，而心肌、骨骼肌及肝脏组织中未检出转基因表达。结论：成功构建了在脑、脂肪组织中特异性表达Cre的转基因鼠，为研究与2型糖尿病、胰岛素抵抗等相关的条件性基因剔除小鼠模型的建立奠定了基础。     

人原代肺动脉内皮-平滑肌接触式共培养方法的技术改进

目的：改进人肺动脉内皮细胞（human pulmonary artery endothelial cells,HPAECs）-人肺动脉平滑肌细胞（human pulmonary artery smooth muscle cells,HPASMCs）接触式共培养方法,为更好模拟体内两种细胞间相互作用提供研究平台。方法：采用微孔聚碳酸酯膜为载体,将HPAECs和HPASMCs接种于微孔膜两侧,建立HPAECs-HPASMCs联合培养模型以模拟正常血管壁两种细胞的结构关系,通过调整细胞种植密度、培养时间、培养液体系、培养基种类、血清浓度等,倒置相差显微镜、Hoechst染色及流式细胞术比较不同条件下接触式共培养模型中细胞贴壁、生长和凋亡的差异,免疫荧光染色观察优化共培养条件后细胞标记物的表达变化。结果：①明胶预包被Transwell膜可促进内皮细胞的黏附和生长;②渗透压升高增加内皮细胞凋亡;③内皮细胞培养基较DMEM、RPMI1640更有利于接触式共培养模型的建立;④内皮细胞生长因子为1%、胎牛血清为2%时两种细胞生长稳定;⑤优化共培养条件对两种细胞的自身特性无显著影响。结论：当培养体系为内皮细胞培养基、维持1%内皮细胞生长因子及2%胎牛血清组分条件,可建立稳定的HPAECs-HPASMCs接触式共培养模型,为体外模拟人肺动脉血管壁结构功能和研究两种细胞间相互作用构建了良好平台。