转移负相关新基因C140rf106的生物信息学分析

目的研究肿瘤原发灶和转移灶的基因表达差异，并采用生物信息学方法对1条卵巢癌肝转移灶低表达基因C140rf106进行初步分析。方法分别制备卵巢癌原发灶和肝转移灶组织标本mRNA，线性扩增后与人类寡核苷酸芯片杂交，通过信号扫描、处理后获得两者的表达差异基因。并用生物信息学方法对1条无功能研究的新基因C140rf106进行初步分析，预测了它的基因结构、染色体定位、编码蛋白质的理化性质、亚细胞定位、蛋白质功能域等信息。并对多物种中的相似性蛋白进行了系统进化分析。结果人类寡核苷酸芯片发现了共272条差异表达基因。对转移负相关新基因C140rf106的上述性质进行了有效的预测，基本明确了该基因编码蛋白为一核蛋白，可能参与了肿瘤转移抑制基因的转录活化及促进表达。结论生物芯片技术是一种研究肿瘤转移基因表达差异的有效的高通量研究方法。通过生物信息学分析，表明新基因C140rf106是一个有肿瘤转移研究价值的新靶点。     

端粒酶活性对HeLa细胞生长及化疗敏感性的影响

目的研究抑制端粒酶活性对HeLa细胞在体内外生长和对顺铂敏感性的影响。方法将野生型端粒酶逆转录酶、端粒酶逆转录酶显性负突变体和对照质粒电转染于HeLa细胞中，绘制细胞生长曲线，四甲基偶氮唑蓝法（MTT）检测细胞对顺铂的敏感性，磷脂酰丝氨酸外翻分析（Annexin V）法检测细胞凋亡情况；接种裸鼠观察其致瘤性及对顺铂敏感性的影响。结果端粒酶逆转录酶显性负突变体转染于HeLa细胞后，端粒酶活性显著下降，细胞生长速度延缓，显著增强顺铂诱导的凋亡，端粒酶活性抑制后对裸鼠致瘤性丧失，而端粒酶活性增强后顺铂对肿瘤的抑制作用下降。结论端粒酶活性下降能抑制HeLa细胞生长，增强顺铂的杀伤作用，反之端粒酶活性升高将导致对顺铂耐药。     

Primary screening for breast diseases among 17618 women in Wufeng area, a region with high incidence of cervical cancer in China

In this study, the current status for breast diseases in a region with high-incidence of cervical cancer were epidemiologically investigated. From March to August, 2009, 17618 women, from Wufeng area of Hubei province, China, were recruited to screen breast diseases by using breast infrared diagnostic apparatus. Other diagnostic methods, such as B-mode ultrasound, X-ray mam-mography, needle biopsy and pathological examination were, if necessary, used to further confirm the diagnosis. The screening showed that 5990 of 17618 cases (34.00%) had breast diseases, 5843 (33.16%) had mammary gland hyperplasia, 48 (0.27%) had breast fibroadenoma, 11 (0.06%) had breast carcinoma, and 88 (0.50%) had other breast diseases. The peak morbidity of breast cancer was found in the women aged 50-60 ages. The morbidity of breast cancer was significantly increased in women elder than or equal to 50 years old (n=8, 0.157%) in comparison with that in the subjects younger than 50 years old (n=3, 0.024%) (u=2.327, P<0.05). It was shown that the occurrence of breast diseases was concentrated in women aged 20-40 years, while the total morbidity reached its peak at the age of 30 years and then decreased sharply after age of 40. Compared with the patients elder than or equal to 40 years old (n=3289, 27.46%), the morbidity rate of breast diseases was sig-nificantly increased in women less than 40 years old (2648 cases, 47.18%; P<0.001). However, there was no significant difference in the morbidity of breast diseases between the age group of 20-29 years and that of 30-39 years (P=0.453), and both of them were high. There was no significant asso-ciation between the morbidity of breast diseases and cervical cancer. Since the morbidity of breast diseases was higher among young women, more attention should be paid to the screening of breast diseases among young women for early diagnosis.     

血管内皮生长因子过度表达促进卵巢癌浸润转移的机制

为研究血管内皮生长因子 (VEGF)过度表达在卵巢癌转移中的作用及可能机制 ,以脂质体介导 VEGF c DNA转染 2株卵巢癌细胞系 Ca OV- 3、COC1,经逆转录聚合酶链式反应 (RT- PCR)、Western blot检测转染 VEGF c DNA前后癌细胞 VEGF、明胶酶 A(MMP- 2 ) m RNA及蛋白表达水平 ;Boyden小室体外侵袭实验比较 VEGF c DNA转染 2株癌细胞前后通过人工重组基底膜的能力变化。结果显示 :VEGF c DNA转染后 2株卵巢癌细胞 VEGF、MMP- 2在 m RNA及蛋白表达水平均较转染前明显增强。Boyden小室体外侵袭实验表明转染 VEGF c DNA的 Ca OV- 3和 COC1穿过人工重组基底膜的相对百分率为 (42 .5± 4 .1) %、 (2 6 .8± 2 .4 ) % ,较对照组穿膜细胞相对百分率 (2 4 .7± 1.9) %、 (8.6±1.1) %明显增加。提示微环境中 VEGF参与了卵巢癌浸润、转移 ,其机制可能与诱使 MMP- 2合成及分泌增加有关     

卵巢癌细胞上皮间质转化及侵袭转移过程中microRNA-9的调控作用

目的 探讨microRNA-9（miR-9）参与调控卵巢癌细胞EMT过程,以及影响卵巢癌细胞侵袭及转移的分子机制。方法 使用TargetScan及PicTar数据库,预测可能靶向E-cadherin 3’UTR区的miRNA,双荧光素酶报告体系进行验证;上调候选miR后,用qRT-PCR和Western blot检测E-cadherin的表达变化;细胞免疫荧光观察E-cadherin、β-Catenin和Vimentin的表达;划痕实验、Transwell实验,观察卵巢癌细胞运动和侵袭能力的改变。结果 TargetScan、PicTar预测发现miR-9是唯一可与CDH1结合的miRNA。双荧光素酶报告系统验证预测结果正确。在SKOV-3中上调miR-9后,E-cadherin的表达受到显著抑制;细胞形态向间质细胞样转变,发生EMT分子水平的特征性改变;体外实验表明,卵巢癌细胞的运动和侵袭能力得到明显促进。结论 miR-9可以通过靶向调控E-cadherin表达,促进卵巢癌细胞的EMT进程,对卵巢癌细胞的运动和侵袭能力产生重要影响。     

剖宫产与阴道分娩对女性产后性功能影响的比较研究

目的:研究剖宫产与阴道分娩对女性产后性功能的影响。方法:采用横断面调查方法,分析在我院产科分娩活胎的240例初产妇产后3个月和6个月的性生活质量情况,其中剖腹产组100例,阴道分娩组140例。结果:剖宫产组和阴道分娩组在产后3个月,恢复性生活者分别占79.00%、55.00%,性交疼痛者分别占30.00%,59.29%,差异均有统计学意义(P<0.05);产后6个月差异均无统计学意义(P>0.05)。两组产妇产后性生活满意度无统计学差异(P>0.05)。结论:剖宫产与阴道分娩对女性产后性功能的影响在产后3个月有显著差异,但产后6个月差异明显减少。女性为保护性能力而选择剖宫产不科学。     

高危型HPV检测在预测宫颈上皮内瘤变锥切后残存病变或复发中的意义

目的:评价高危型HPV(HR-HPV)检测在预测宫颈上皮内瘤变宫颈锥切术后残存病变或复发中的意义。方法:收集2004年4月1日～2009年5月30日武汉同济医院妇产科因宫颈上皮内瘤变行二次手术治疗的44例病人的临床资料进行回顾性研究,所有病人均于首次宫颈手术前6个月内进行了HR-HPV检查。结果:Logistic回归模型分析显示,患者年龄、产次、锥切方法、腺体是否累及和CIN病变程度与宫颈锥切后病人是否发生残存病变或复发无关,而HR-HPV测量值(RLU/PC)≥500是宫颈锥切术后发生残存病变或复发的高危因素。结论:HR-HPV检测是一种有效地预测宫颈锥切术后残存病变发生或复发的方法,对子宫颈疾病的诊疗具有重要的意义。     

132例宫颈腺鳞癌和腺癌临床分析

背景与目的:宫颈腺鳞癌是宫颈癌的一种病理类型,发病率较低。本研究分析宫颈腺鳞癌的临床病理特点及影响预后的因素,以探讨宫颈腺鳞癌的治疗方案,为临床治疗提供参考。方法:收集2002年1月至2007年12月收治的44例宫颈腺鳞癌患者的临床资料进行回顾性分析(研究组),选取同期88例宫颈腺癌作为对照组,用卡方检验、Kaplan-Meier法、log-rank检验、Cox回归模型进行统计学分析。结果:宫颈腺鳞癌患者肿瘤直径>4cm占47.7%,对照组占28.4%,差异有统计学意义(P<0.05);肿瘤组织为低分化者研究组占56.8%,对照组占30.7%,差异有统计学意义(P<0.05)。单因素分析显示肿瘤直径(P=0.011)、FIGO分期(P=0.013)、间质浸润(P=0.05)、淋巴结转移(P=0.017)与预后有关。多因素分析显示FIGO分期(P=0.032)和淋巴结转移(P=0.017)是影响预后的独立因素。2年总生存率和2年无瘤生存率宫颈腺鳞癌患者分别为83.3%和80.7%,宫颈腺癌患者分别为87.1%和85.0%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:宫颈腺鳞癌具有瘤体大、组织学分化差的临床特点,FI...     

短发卡状RNA抑制人Bub1基因表达及其对人卵巢癌A2780细胞药物敏感性和周期的影响

背景与目的:既往研究提示,紫杉醇类药物作用的发挥有赖于功能完整的纺锤体检查点,而Bubl是纺锤体检查点的重要组成部分.本研究旨在探讨Bubl短发卡状RNA真核表达载体稳定转染对人卵巢癌A2780细胞紫杉醇敏感性及细胞周期的影响.方法:构建Bubl基因短发卡状RNA真核表达载体pEGFP-Bubl-shRNA,以脂质体Lipofectamine~(TM)2000包裹空质粒转染体外培养的人卵巢癌细胞株A2780后进行稳定筛选.应用RT-PCR、Western印迹法分析目的基因mRNA及其蛋白水平的表达情况:MTT法、流式细胞术等方法检测转染前后,A2780细胞对紫杉醇敏感性及其细胞周期的变化;Hoechst33342染色法检测细胞分裂指数.结果:与对照组pEGFP-Cl/A2780及A2780组相比,pEGFP-Bubl-ShRNA/A2780组细胞中mRNA和蛋白水平的表达均明显下降,其差异具有统计学意义(P＜0.05);MTT检测结果提示,转染pEGFP-Bubl-shRNA质粒后细胞对紫杉醇的敏感性明显降低,与对照组相比,差异具有统计学意义(P＜0.05);流式细胞术检测结果显示,紫杉醇1 μ mol/L处理细胞24及48 h后,与pEGFP-Cl/A2780及A2780组相比,该组细胞凋亡率明显降低(P＜0.05),G_2/M期细胞比例下降,差异具有统计学意义(P＜0.05);Hoechst33342染色提示,与对照组相比,pEGFP-Bubl-shRNA/A2780组的分裂指数(MI)明显降低,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:Bubl基因的下调可导致人卵巢癌A2780细胞对紫杉醇敏感性及G_2/M期细胞比例下降.pEGFP-Cl-shBubl质粒的成功构建,为研究Bubl基因的功能及定位的研究提供了进一步的实验条件.     

人前列腺癌高低转移细胞株差异表达基因的筛选

目的：筛选高低转移能力人前列腺癌细胞株PC3M-1E8和PC3M-2B4间差异表达基因。方法：应用抑制性消减杂交（SSH）技术,对高转移能力人前列腺癌细胞株PC3M-1E8及其同源低转移细胞株PC3M-2B4进行2次消减杂交,第1次SSH实验,以PC3M-2B4细胞株为实验方,PC3M-1E8株为驱动方,构建正向消减文库。第2次实验则以PC3M-1E8株为实验方,PC3M-2B4为驱动方,构建反向消减文库。筛选出来的阳性克隆进行测序,并在GeneBank数据库中进行同源性比较后从中选取若干序列进行实时定量PCR验证。结果：2个消减文库共得到238个阳性克隆,从中各随机选取8个克隆测序并进行同源性分析,发现其中12条序列来自于11个已知基因,另外4条序列为新的未知功能的基因序列标签（EST）。结论：成功构建了高低转移力人前列腺癌细胞株的双向消减杂交文库。