RNAi沉默Stat1基因对胶质瘤细胞FAT10表达的影响

目的 观察U251人胶质瘤细胞中Stat1基因沉默对FAT10蛋白表达的影响.方法 采用电穿孔法将Stat1 siRNA转染人胶质瘤细胞系U251细胞,采用Western印迹检测各组细胞中Stat1和FAT10蛋白的表达变化,用染色体核型分析Stat1干扰对FAT10过表达而导致的非整倍体现象的阻断作用.结果 Westem印迹结果显示,Stat1 siRNA干扰可以有效抑制U251细胞中Stat1的表达,并且通过抑制Stat1可以有效抑制TNF-α诱导的FAT10高表达,进而通过有效抑制TNF-α诱导的FAT10高表达而阻断TNF-α诱导的非整倍体现象.结论 Stat1的表达下调可以抑制TNF-α诱导的FAT10高表达及非整倍体现象.     

交叉反应物质197转运大分子物质通过血肿瘤屏障的效果和机制

目的研究白喉毒素的无毒突变体交叉反应物质197(cross-reacting material 197,CRM197)转运大分子物质通过血肿瘤屏障的效果和机制。方法制备CRM197-HRP偶联物,建立体外血肿瘤屏障模型,给予CRM197-HRP作用2 h后,通过TMB显色法检测transwell下室中HRP活性的变化;给予CRM197作用1 h后,采用免疫组化法检测体外血肿瘤屏障内皮细胞中p-Akt的表达变化;Western blot法检测p-Akt、p-FOXO1A和质膜微囊蛋白caveolin-1的表达变化。结果和对照组相比,CRM197-HRP能有效通过血肿瘤屏障,并且其转运水平呈时间依赖性增加;p-Akt主要分布在内皮细胞的胞质和胞核中,CRM197作用1 h后p-Akt的表达水平下降;同时伴有内皮细胞中p-FOXO1A表达下降和质膜微囊蛋白caveolin-1的表达上调。结论 CRM197可能通过抑制内皮细胞中p-Akt的表达,减少转录因子FOXO1A的磷酸化水平,进一步上调质膜微囊蛋白caveolin-1的表达,增加血肿瘤屏障的通透性。     

美罗培南透过血脑屏障的观察分析

目的 验证开颅手术前静脉注射美罗培南预防颅内感染的有效性.方法选择21~64岁的开颅手术患者,开颅手术前留置腰大池引流管,术前30min静脉给予美罗培南1.0g,给药的起始时间记为0点,采集静脉血和脑脊液标本时间为给药后0.5、1、2、3、4h,采用高效液相色谱法(HPLC)检测美罗培南浓度.结果血清峰浓度为(52.88±4.39)mg/L,达峰时间为30min.脑脊液峰浓度为(2.85±0.19)mg/L,达峰时间为2h.美罗培南术前静脉持续注射时脑脊液最大穿透率为13.75%±7.26%,最大穿透率出现的时间为静点后3h.结论 术前30min经静脉注射抗生素美罗培南,脑脊液中药物浓度在注射后2h达到最大值并可持续数小时.经静脉注射1.0g美罗培南,血清稳态药物浓度高于多数颅内感染常见致病菌的MIC90.     

恶性脑胶质瘤U87细胞系肿瘤干细胞放疗敏感性的体外实验研究

目的探讨脑胶质瘤细胞系U87细胞及其肿瘤干细胞（CSCs）对体外放疗的敏感性。方法应用神经干细胞（NSCs）培养基分离培养形成细胞球克隆,检测细胞球细胞的NSCs特性。采用不同剂量放射线照射U87细胞及其CSCs,应用集落形成实验和生存曲线检测其生存情况。结果 U87细胞在NSCs培养基中形成悬浮的细胞球克隆,具有自我更新和多向分化能力,表达CD133、Nestin;两种细胞的存活率均随照射剂量增加而下降,且CSCs的存活率明显高于U87细胞（P〈0.01）。结论在体外条件下,CSCs的放射敏感性明显低于U87细胞,其可能是恶性脑胶质瘤放疗抵抗的主要原因。     

过表达miR-34a增加血肿瘤屏障通透性机制的研究

目的探讨过表达miR-34a增加血肿瘤屏障通透性的机制。方法将miR-34a模拟物转染至培养的人脑微血管内皮细胞NKIM-6,采用实时荧光定量PCR方法检测miR-34a的表达。用miR-34a模拟物转染的NKIM-6细胞和U87胶质瘤细胞建立体外血肿瘤屏障模型,跨内皮电阻测量系统检测血肿瘤屏障跨内皮阻抗值的变化;western blot和免疫荧光法检测体外血肿瘤屏障NKIM-6细胞中,紧密连接相关蛋白ZO-1和claudin-5的表达。结果经miR-34a模拟物转染后,NKIM-6细胞中miR-34a的表达水平显著升高;血肿瘤屏障跨内皮阻抗值显著下降;体外血肿瘤屏障NKIM-6细胞中紧密连接相关蛋白ZO-1和claudin-5的表达水平分别显著降低,在细胞膜上呈不连续分布。结论过表达miR-34a显著增加血肿瘤屏障的通透性,其机制之一可能与降低紧密连接相关蛋白相关。     

内皮—单核细胞激活多肽酶Ⅱ增强血肿瘤屏障通透性的作用位点

目的研究内皮—单核细胞激活多肽Ⅱ(EMAP-Ⅱ)增强血肿瘤屏障(BTB)的作用机制。方法采集出生3～5 d的Wistar胎鼠大脑皮质,应用酶消化法及葡聚糖离心法获得脑微血管段后,接种于培养皿中进行脑微血管内皮细胞(BMEC)的原代培养;将BMEC与C6脑胶质瘤细胞共培养,构建体外BTB模型;实验随机分为4组(每组6例):对照组、EMAP-Ⅱ组、寡霉素组和寡霉素+EMAP-Ⅱ组。测定跨内皮阻抗值和辣根过氧化物酶流量,评估各组BTB通透性变化;Western blot检测BMEC上紧密连接(TJ)相关蛋白ZO-1的表达水平;双重免疫荧光法检测EMAP-Ⅱ和α-ATP合成酶在BMEC上的分布。结果 EMAP-Ⅱ组BTB通透性较对照组和寡霉素组显著增高(P<0.01);与对照组和寡霉素组比较,EMAP-Ⅱ组TJ相关蛋白ZO-1的表达水平显著降低(P<0.01);EMAP-Ⅱ组与寡霉素组比较,EMAP-Ⅱ的作用受到ATP合成酶抑制剂寡霉素的显著抑制(P<0.01);EMAP-Ⅱ与α-ATP合成酶在BMEC膜上共定位。结论 EMAP-Ⅱ通过开放TJ增强BTB的通透性,BMEC膜上的α-ATP合成酶是其作用的位点。     

低频超声辐照联合小剂量缓激肽选择性开放大鼠血肿瘤屏障及其可能机制

目的研究应用低频超声辐照和小剂量缓激肽颈内动脉灌注非侵袭性、可逆性、靶向最大限度开放血肿瘤屏障的可行性。方法应用伊文氏兰检测血肿瘤屏障通透性,透射电镜观察吞饮小泡数量,Westernblot法检测质膜微囊结构蛋白caveolin-1和caveolin-2的蛋白表达,RT-PCR法检测caveolin-1和caveolin-2的mRNA表达。结果低频超声辐照联合应用小剂量缓激肽后伊文氏兰检测血肿瘤屏障通透性显著增加(P<0.01),透射电镜示吞饮小泡数量显著增加(P<0.01),RT-PCR法、S-P免疫免疫组织化学法、Westernblot法检测质膜微囊结构蛋白caveolin-1和caveolin-2的mRNA和蛋白表达表达显著增加(P<0.01)。结论低频超声辐照联合应用小剂量缓激肽通过增加胞吞饮转运显著增加血肿瘤屏障通透性。