对模拟肾虚痰湿特征信息的改良型PCOS动物模型卵巢形态学变化研究

目的:通过观察大鼠卵巢形态学改变,研究3种模拟肾虚痰湿特征信息的改良造模法对肥胖型PCOS动物模型的干预作用。方法:选择SD大鼠,在Letrozole、DHEA、INS+HCG造模基础上分别加用高脂乳剂造模,取双侧卵巢进行HE染色,观察卵巢中各级卵泡数及卵巢形态学变化情况。结果:3种模拟肾虚痰湿特征信息的造模法的大鼠卵巢次级卵泡数、成熟卵泡数、黄体、白体均显著低于空白对照组和高脂模型组(P0.01),囊状卵泡数、闭锁卵泡数均显著高于空白对照组和高脂模型组(P0.01)。结论:3种造模改良法的大鼠卵巢形态学改变均符合PCOS造模要求,能更好表现改良型PCOS卵巢形态学变化。     

养精种玉汤对卵巢储备功能减退模型大鼠RNA-m6A修饰的影响

目的 观察养精种玉汤对卵巢储备功能减退(DOR)模型大鼠RNA-m⁶A修饰的影响,探讨其改善卵巢储备功能的机制。方法 选取60只动情周期正常的SD雌性大鼠,采用雷公藤甲素诱导DOR模型,将大鼠分为空白组、模型组、脱氢表雄酮(DHEA)组和养精种玉汤低、中、高剂量组(中药低、中、高剂量组),每组10只,给药组分别灌胃相应药液,连续2周。HE染色观察卵巢组织形态,ELISA检测血清雌二醇(E2)、促卵泡激素(FSH)、黄体生成素(LH)、抗米勒管激素(AMH)含量,Western blot、qPCR测定卵巢组织METTL3、FTO、YTHDC2蛋白和基因表达。结果 与空白组比较,模型组大鼠卵巢组织皮质区损伤,颗粒细胞脱落,各级卵泡数量明显减少,闭锁卵泡及黄体数量增加(P<0.05);血清E2、AMH含量减少,FSH、LH含量增加(P<0.05),卵巢组织METTL3、FTO、YTHDC2蛋白及m RNA表达降低(P<0.05)。与模型组比较,中药高剂量组大鼠卵巢组织损伤明显改善,各级卵泡数量增加,闭锁卵泡及黄体数量减少(P<0.05);血清E2...     

养精种玉汤治疗卵巢储备功能下降的物质鉴定及网络药理研究

目的 基于液相色谱-质谱联用技术(LC-MS/MS)、网络药理学与动物实验,探讨养精种玉汤治疗卵巢储备功能下降(DOR)的机制。方法 采用LC-MS/MS对化合物进行鉴定,口服生物利用度(OB)筛选。DrugBank、GenCards、OMIM数据库用于收集药物和疾病靶点信息,STRING平台用于获取蛋白相互作用信息,Metascape平台进行基因本体(GO)分析及京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析。Cytoscape用于可视化网络,Autodock用于验证分子对接。结果 共鉴定出164个具有良好OB的化合物,预测出239个高度可靠的靶点。药物和疾病共同靶点与IL-8信号通路高度相关。富集分析显示NF-κB、PI3K等途径是潜在的机制,CDK6、GSK3B、INS、PTGS2、RXRA、EGFR、CXCL8、BCL2是潜在靶点基因,芹黄素具有最广泛的靶点信息。分子对接表明预测结果可信度较高(结合能<7.0 KJ·mol^-1)。结论 养精种玉汤可通过多靶点、多途径调控IL-8信号通路,芹黄素是具有潜力的药物单体。     

胰岛素联合HCG改良法建立肥胖型PCOS动物模型评价

目的：建立并评价肥胖型多囊卵巢综合征（PCOS）大鼠模型。方法：将大鼠随机分为空白对照组、高脂模型组、胰岛素（INS）联合人绒毛膜促性腺激素（HCG）模型组和INS联合HCG加高脂乳剂模型组。通过颈背部分别皮下注射INS和HCG加高脂乳剂灌胃导形成肥胖PCOS大鼠模型。监测大鼠动情周期,测定体质量增加幅度、血清黄体生成素（LH）、卵泡刺激素（FSH）、雌二醇（E₂）、睾酮（T）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）、甘油三酯（TG）、胆固醇（TC）、空腹血糖（FPG）、空腹胰岛素（FINS）、2 h血糖、2 h INS,计算稳态模型（HOMA）指数、相关脏器指数水平和双侧卵巢HE染色。结果：INS联合HCG改良法（INS联合HCG加高脂模型组）大鼠取材时,体质量、体质量增加幅度、卵巢脏器指数、T、LH、 HOMA指数均显著高于空白对照组、高脂模型组和INS联合HCG模型组（P<0.05,P<0.01）,HDL明显降低（P<0.05,P<0.01）。INS联合HCG改良法大鼠FPG、FINS、2 h INS均极显著高于高脂模型组（P<0.01）。结论：INS联合HCG改良法诱导的动物模型是研究肥胖型PCOS发病机制的较理想动物模型之一。     

从“肾虚血瘀”论治子宫内膜异位症并发不孕

子宫内膜异位症(EMS)是妇科难治病、多发病,该病多并发不孕,中医认为肾虚血瘀是该病并发不孕的病机。现代西医认为异位内膜种植学说是本病的发病机制之一,血管生成是本病的重要特征,也是本病并发不孕的重要原因。导师在体现活血化瘀治法的中成药在妇科临床和实验研究证实活血化瘀治法对EMS有效的基础上运用补肾活血化瘀治疗EMS并发不孕患者取得显著临床疗效,妊娠率显著增加。故认为肾虚血瘀是EMS并发不孕的主要病因病机,也是EMS并发不孕的主要病理基础,从"肾虚血瘀"论治EMS并发不孕值得从临床和实验研究两方面深入探讨。     

补肾活血导法改善PER“胞宫摄精成孕”的网络调控机制研究＊

目的 基于“精满则子宫易于摄精，血足则子宫易于容物”思想，通过实验研究结合网络分析、分子对接等方法，探讨补肾活血方治疗子宫内膜容受性不良（Poor endometrial receptivity，PER）的关键核心靶点及信号通路的作用机制。方法 建立肾虚血瘀-PER病证结合大鼠模型，补肾活血导法干预10天后，通过扫描电镜观察大鼠的种植期胞饮突形态；利用TCMSP数据库结合Batman数据库筛选补肾活血方中有效组分，通过Genecards、OMIM 数据库检索PER基因；筛选补肾活血方-PER共同作用靶点，导入String 数据库及 Cytoscape3.8.0软件进行可视化分析，构建PPI网络；应用Metascape数据库分别进行 GO富集分析及KEGG富集分析。采用AutoDock对补肾活血方有效组分与核心靶标蛋白进行分子对接验证，通过Western Blotting、q-PCR和ELISA检测相关关键基因蛋白或mRNA的表达水平。结果 补肾活血导法可提高PER大鼠着床率，促进胞饮突成熟。补肾活血方与PER共有130个交集靶点；String计算后应用Cytoscape中CytoNCA插件获得24个核心靶点，输入metascape平台获得相关66个生物学过程（BP）、38个分子功能（MF）、28个细胞组分（CC）和相关KEGG信号通路共113条。分子对接提示补肾活血方有效组分与关键蛋白具有良好的亲和力作用。实验研究显示补肾活血导法能够增强TNF、p-38、ESR1、PGR、IL6、1L1β等相关因子在子宫内膜组织上的表达。结论 通过网络分析结合药理实验研究发现，补肾活血导法能够有效改善PER相关指标，并通过调控IL6、IL-1β、p-38蛋白和基因表达水平，改善子宫内膜容受性进而实现“胞宫摄精成孕”。     

补肾化痰法对肥胖型PCOS雌鼠AdipoR1、AMPK的影响及其调控胰岛素抵抗的作用

目的:观察补肾化痰法经APN/AMPK通路调节肥胖型PCOS大鼠胰岛素抵抗的作用及机制。方法:选取7~8周龄SD雌性大鼠,来曲唑联合高脂灌服制备肥胖型PCOS模型,以补肾化痰法治疗,放射免疫法检测大鼠血清FSH、LH、E、P、T,免疫组织化学染色法检测AdipoR1、InR,Western blotting检测p-AMPK蛋白表达水平。结果:(1)与模型对照组比较,各治疗组排卵率显著升高;中药高剂量组、中剂量组大鼠体质量增长率显著低于模型组(P0.05);(2)与模型对照组比较,中药高、中剂量组血清FSH、P、E2含量显著增高(P0.05或P0.01),中药中剂量组血清LH显著降低(P0.01),中药高、中剂量组血清T含量降低(P0.05);(3)模型对照组卵巢颗粒细胞AdipoR1、p-AMPK表达显著低于空白对照组(P0.01),而中药高、中剂量组卵巢颗粒细胞AdipoR1表达明显高于模型对照组(P0.05或P0.01),中药各剂量组p-AMPK均高于模型对照组(P0.01);(4)与模型对照组比较,中药高、中剂量组FBG、Fins、HOMA-IR、INR显著下降(P0.05或P0.01),中药高、中剂量组卵巢组织胰岛素受体表达显著增高(P0.05)。结论:肥胖型PCOS雌鼠出现排卵障碍,生殖内分泌紊乱的表现,并伴随全身的糖代谢异常及胰岛素抵抗。补肾化痰法可能经APN/AMPK通路改善肥胖型PCOS的肥胖状态、生殖内分泌紊乱及胰岛素抵抗。     

补肾化痰法经APN信号通路调控肥胖型PCOS雌鼠糖脂代谢的机制研究

目的探究补肾化痰法通过调控APN/p38MAPK信号通路,改善肥胖PCOS雌鼠糖脂代谢的机制。方法来曲唑联合高脂制备肥胖PCOS雌鼠模型,补肾化痰方进行干预,采用ELISA法检测血清APN含量,免疫组织化学染色法检测卵巢组织AdipoR2,FATP1的表达水平,Realtime PCR检测卵巢颗粒细胞p38MAPK的mRNA表达水平,酶法检测血清FBG、TC、TG等含量。结果与模型组比较,(1)中药高、中剂量组雌鼠血清FBG、TC、TG、LDL、FFA含量显著低于模型组(P0.05或P0.01),HDL含量显著高于模型组(P0.05或P0.01);(2)中药高、中剂量组血清中APN含量升高(P0.05或P0.01);(3)中药高、中剂量组卵巢颗粒细胞膜AdipoR2的平均黑度值增高(P0.05);(4)中药高、中剂量组卵巢颗粒细胞p38MAPKmRNA表达增高(P0.05);(5)中药高、中剂量组卵巢颗粒细胞中FATP1平均黑度值增高(P0.05)。结论肥胖型PCOS雌鼠出现以生殖内分泌紊乱,排卵障碍为主要表现的病理改变,并伴随全身的糖脂代谢异常。补肾化痰法能有效改善肥胖PCOS雌鼠的糖脂代谢紊乱,其机制可能与补肾化痰法激活APN/p38MAPK信号通路相关。     

内异康复片对EMT大鼠VEGF、MMP-9、HGF及Wnt4、Wnt5α的调控机制研究

目的:分析内异康复片对子宫内膜异位症(EMT)大鼠异位内膜黏附、浸润及增生的调控作用,并探讨其作用机制。方法:建立子宫内膜异位症大鼠模型,随机分为模型对照组、阳性对照组、中药低、中、高剂量组,每组10只。治疗3周后,测量各组大鼠异位内膜体积;另取模型动物的异位内膜组织,分离异位内膜细胞,体外培养,设空白对照组、阳性对照组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组,每组4个复孔。采用ELISA法测定血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶(MMP)、肝细胞生长因子(HGF)含量;Western Blot检测Wnt4、Wnt5α的表达。结果:动物实验结果:与模型对照组比较,中药各剂量组、阳性对照组的异位内膜体积显著缩小,异位内膜厚度变薄,腺体面积减少,差异均有统计学意义(P0.01,P0.05);中药高剂量组、阳性对照组的腺体数目显著少于模型对照组,差异均有统计学意义(P0.05);中药高剂量组VEGF、MMP-9含量显著低于模型对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。细胞实验结果:中药低、中、高各剂量组培养上清液的VEGF含量显著低于空白对照组,中药高剂量组MMP-9含量显著低于空白对照组,中药高剂量组和阳性对照组Wnt4、Wnt5α表达水平均显著低于空白对照组,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论:内异康复片治疗EMT的机理可能与抑制异位内膜细胞分泌VEGF、MMP-9,以及调节Wnt信号转导通路有关。     

浅析《傅青主女科·种子篇》之尤重脾肾

《傅青主女科·种子篇》中傅氏强调五脏气血同调,认为不孕多虚证,而虚损中又以脾肾两脏为多,尤其重视先后天的培护,用药遵循补火不宜过用辛热,以防伤阴,补水不宜偏于寒凉,以损其阳的原则,此外巧用并完善了五行观点,重视任督带脉的维系。傅氏对种子从立法、方药、遣方均见解颇深,对后世影响深远。