内质网蛋白29过表达慢病毒载体的构建及其对胃癌细胞生物学行为的影响

目的：构建内质网蛋白29（ERp29）慢病毒过表达载体,探讨ERp29过表达对胃癌MGC803和SGC7901细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法：构建带有红色荧光蛋白标签的ERp29基因表达质粒的慢病毒（pCDH-ERp29）和对照质粒（pCDH-Vector）,分别感染MGC803和SGC7901细胞;荧光显微镜观察细胞感染情况;CCK-8和平板克隆实验检测稳定感染ERp29基因的胃癌MGC803和SGC7901细胞的增殖能力;Transwell小室实验分别检测稳定感染ERp29基因的胃癌MGC803和SGC7901细胞的迁移和侵袭能力;应用Real-time PCR和Western blotting技术分别检测稳定感染ERp29基因的胃癌MGC803和SGC7901细胞中ERp29 mRNA和蛋白表达水平。结果：酶切鉴定显示成功构建pCDH-ERp29过表达载体,荧光显微镜下观察到成功感染胃癌细胞。CCK-8实验和平板克隆实验检测,与pCDH-Vector组比较,pCDH-ERp29组MGC803和SGC7901细胞增殖能力无明显变化（P>0.05）;Transwell小室实验,与pCDH-Vector组比较,pCDH-ERp29组MGC803和SGC7901细胞的迁移和侵袭细胞数明显减少（P<0.05）。pCDH-ERp29组细胞中ERp29 mRNA和蛋白表达水平明显高于pCDH-Vector组（P<0.05）。结论：成功构建过表达ERp29基因的慢病毒载体,过表达ERp29基因可明显抑制胃癌MGC803和SGC7901细胞的迁移和侵袭。     

经典名方保元汤UPLC特征图谱和多指标成分含量测定研究＊

目的 建立保元汤标准汤剂的超高效液相色谱法（Ultra Performance Liquid Chromatography，UPLC）特征图谱，并建立同时测定人参皂苷Rb1和甘草酸2种指标成分含量的方法，为该经典名方的质量控制及评价提供参考。方法 采用ACQUITY BEH Shied C18 column （2.1 × 100 mm，1.7 μm）色谱柱，以0.01%甲酸水（A）-0.05%甲酸乙腈（B）为流动相梯度洗脱，柱温30℃，流速0.4 mL min^-1，检测波长203 nm、237 nm。建立15批保元汤标准汤剂的UPLC特征图谱，应用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”软件（2012版）进行相似度分析，归属共有峰。采用层次聚类分析（HCA），主成分分析（PCA）等对特征图谱数据进行评价。利用UPLC特征图谱方法测定2种成分含量。结果 建立了15批保元汤标准汤剂的特征图谱，相似度均大于0.85，并确认了21个共有峰，指认出毛蕊异黄酮葡萄糖苷、甘草苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、甘草酸6个峰。15批保元汤聚为4类，载荷散点图显示毛蕊异黄酮葡萄糖苷、人参皂苷Rg1等7个成分含量对保元汤质量有较大影响。含量测定显示，在一定范围内人参皂苷Rb1、甘草酸线性关系良好（r ≥ 0.997）。标准汤剂中含量测定结果分别在12.62-30.33 μg·mL^-1、63.80-106.67 μg·mL^-1，转移率分别在51.04%-70.06%、54.89%-74.38%；对应实物中含量测定结果分别在0.98-2.27 mg·g^-1、4.42-8.74 mg·g^-1，转移率分别在78.14%-101.19%、89.99%-99.88%。结论 建立的保元汤UPLC特征图谱及双指标成分含量测定方法专属性强、灵敏度高，可为该方剂复方制剂的质量控制与评价提供参考。     

微小染色体蛋白家族和染色体结构维持蛋白4基因在宫颈鳞状细胞癌组织中的表达及其生物信息学分析

目的:通过生物信息学方法对癌症基因组图谱(TCGA)和高通量基因表达(GEO)数据库进行数据挖掘,探讨宫颈鳞状细胞癌(宫颈鳞癌)预后相关分子.方法:从TCGA和GEO数据库下载宫颈鳞癌相关数据,利用Perl软件和R语言软件进行数据整理和分析,筛选出2个数据库中在正常组织和肿瘤组织共有的差异表达基因(DEGs),并对DE...     

胃癌D2根治术后短期并发症对患者远期生存率的影响

目的 探讨胃癌D2根治术后短期并发症对患者远期生存率的影响.方法 采用回顾性病例对照研究方法,选取接受胃癌D2根治手术治疗的421例患者;根据术后短期有无并发症分为实验组(并发症组)76例和对照组(无并发症组)345例.为减小选择偏倚,通过倾向性得分匹配(PSM)平衡各组变量后,采用Kaplan-Meier生存分析法检...     

基于抗炎生物效价的甘草传统感官评价科学性研究

目的 通过整合分析甘草抗炎活性与性状特征数据,研究感官评价的科学性。方法 基于核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）炎症小体细胞模型,建立甘草的抗炎生物效价测定方法,根据测定生物效价将采集的甘草样品分级。通过电子鼻、色彩色差仪等采集不同等级甘草样品的性状信息,通过主成分分析（PCA）、正交偏最小二乘法-判别分析（OPLS-DA）分析不同等级甘草的差异性,并进一步考察性状特征与甘草抗炎活性的关联性。结果 实验结果显示,甘草提取物对尼日利亚菌素诱导的小鼠原代骨髓巨噬细胞NLRP3炎症小体的激活具有明显抑制作用,根据甘草的抗炎生物效价,可将10批次甘草分为两个等级,一等甘草的生物效价为5.949~11.418 U·mg^–1,二等甘草的生物效价为1.575~1.887 U·mg^–1;PCA结果显示,两等级甘草可以聚成两类;OPLS-DA结果显示,R²X=0.534,R²Y=0.863,Q²=0.75,模型的拟合能力较好,预测能力较强,并且发现色度值b^*和断面直径（2R）的变量重要性投影（variable important inprojection,VIP）分别为1.542 94、1.260 11,均大于1,两者可能是导致两等级甘草药效差异的关键参数,经过实测值比较,两等级甘草在b^*上的差异有统计学意义（P<0.01）。结论 研究表明,甘草的b^*与甘草抗炎活性具有显著的相关性,是其质量评价的一个重要指标,也佐证了甘草传统评价具有一定的科学性。     

DESI-MSI在半夏泻心汤质量控制中的应用

目的:制备不同产地15批次半夏泻心汤物质基准及对应实物,分别应用超高效液相色谱-二极管阵列检测器检测法(UHPLC-DAD)与解吸电喷雾电离-敞开式离子化质谱成像技术(DESI-MSI技术)对不同产地15批次半夏泻心汤对应实物进行分析,考察DESI-MSI在经典名方质量控制中的优势。方法:以半夏泻心汤为研究模型,采用UHPLC-DAD建立半夏泻心汤物质基准及对应实物指纹图谱,并对指标成分含量、出膏率进行考察。同时,以半夏泻心汤对应实物冻干粉为研究载体,将其复溶后以5μL定量毛细管点样于定性滤纸,并固定于载玻片制成样本,以甲醇-甲酸(1 000∶1)为喷雾溶剂,流量3μL·min~(-1),扫描范围100～1 200 Da,空间分辨率300μm,喷雾电压3 k V,采样锥电压±40 V,喷雾器(N_2)压力0. 5 MPa,喷雾器入射角60度,收集角10度,离子源温度120℃,正、负离子全扫描样本。结果:DESI-MSI能检测到指标成分甘草苷、黄芩苷、汉黄芩苷,及共有峰芹糖基甘草苷、小檗碱、甘草酸等,并对其半定量分析,分析结果与UHPLC-DAD基本一致。同时,DESI-MSI还能检测到来自甘草、黄连、黄芩、大枣和人参的甘草皂苷G_2,巴马汀,黄连碱,芦丁,人参皂苷Rg_1等16种成分,并对其相对含量进行直观呈现,定性分析能力远强于UHPLC-DAD。结论:DESI-MSI技术无需进行复杂的样品处理过程,且灵敏度高、分析能力强,可以在无对照品情况下进行复杂样品的定性和相对含量分析,可作为经典名方物质基准、对应实物及配方颗粒样品的质控手段。     

中国民族药产业现状及发展策略

民族药是中国传统医药的重要组成部分,在发展过程中出现过许多问题,如各民族医药的经验实践未得到有效传承;基础研究薄弱、人才匮乏;民族药资源破坏严重,药材质量参差不齐;国内现行知识产权保护制度不完善,严重制约民族药的发展。鉴于这些问题,笔者提出应加大保护并挖掘古籍,弘扬民族医药文化;强化国家和地方标准建设,加强民族药材规范化种植基地和药材种质资源库的建设;打造民族药知名品牌,发挥品牌的引领作用;加强民族药基础研究,构建产学研一体化体系。通过整合文化、科研、人才、产业的力量,以期促进民族药的蓬勃发展。     

醋白芍、炙甘草及其配伍载体中药效组分变化规律分析

目的:研究醋白芍、炙甘草及其配伍载体中醋白芍及炙甘草药效组分的变化规律。方法:以醋白芍、炙甘草单味药及其药对为研究对象,采用水煎煮法制备供试品溶液,采用HPLC法测定。结果:醋白芍4种药效组分(氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酰芍药苷)含量分别为:醋白芍(1.07±0.12、0.36±0.02、2.00±0.21、0.37±0.03)mg/m L;醋白芍-甘草(1.89±0.11、0.86±0.05、3.25±0.13、0.52±0.03)mg/m L;醋白芍-炙甘草(1.90±0.09、0.87±0.04、3.30±0.24、0.52±0.01)mg/m L。炙甘草五种药效组分(甘草酸、甘草苷、甘草素、异甘草苷、异甘草素)含量分别为:炙甘草(6.53±0.25、2.17±0.33、0.52±0.21、0.48±0.23、0.09±0.03、9.79±0.65)mg/m L;炙甘草-焦白芍(5.13±0.32、2.11±0.21、0.47±0.12、0.57±0.22、0.12±0.02、8.40±0.75)mg/m L;炙甘草-炒白芍(6.47±0.33、2.67±0.23、0.56±0.23、0.60±0.23、0.12±0.01、10.42±0.78)mg/m L;炙甘草-醋白芍(8.76±0.35、3.10±0.43、0.79±0.32、0.76±0.34、0.15±0.05、13.56±0.99)mg/m L。结论:配伍影响或改变了药效组分的物理、化学性质,进而改变了药效组分的溶出,最终改变了药效组分在复方汤剂中存在状态。中药治疗作用的关键在于药效组分,包括药效组分的组成及各药效组分之间的比例。药效组分的组成不同,疗效也不同;药效组分的组成相同,但比例不同,疗效也不一样。不同组成的药效组分或不同比例的药效组分分别代表不同的中药,具有不同的临床疗效,其根源在于药效组分的不同,应加以区分。因此,对中药药效组分的研究与探讨是解析中药配伍机制的关键。     

基于传统煎药工艺的野菊花饮片标准汤剂制备及其质量评价方法分析

目的:制备5个产地15批次野菊花饮片标准汤剂并确立其质量评价方法,研究其出膏率、指标成分含量及转移率、指纹图谱等数据,为野菊花饮片标准汤剂及其配方颗粒的制备提供参考。方法:参照传统煎药工艺制备标准汤剂,采用超高效液相色谱-二极管阵列检测器(UPLC-DAD)测定指标成分蒙花苷的含量,计算该成分的转移率,绘制指纹图谱,采用真空干燥法制备浸膏粉,计算出膏率。结果:15批野菊花饮片标准汤剂中蒙花苷质量浓度0. 19～0. 74 g·L~(-1),转移率21. 95%～66. 23%,平均转移率37. 12%(RSD 11. 8%); p H 5. 1～5. 5;出膏率24. 7%～32. 5%,平均出膏率27. 87%(RSD 2. 4%)。指纹图谱共有峰有9个,确认其中2个色谱峰(2号和9号)分别为绿原酸和蒙花苷。结论:建立的制备工艺符合传统汤剂制备方法且稳定可行,可用于野菊花饮片标准汤剂的制备及质量评价。     

痛风饮联合秋水仙碱治疗急性痛风性关节炎临床研究

目的：观察痛风饮联合秋水仙碱治疗急性痛风性关节炎（AGA） 的临床疗效。方法：选取163 例AGA 患者,根据单盲法随机分为痛风饮组82 例和对照组81 例。痛风饮组给予痛风饮联合秋水仙碱治疗,对照组仅给予秋水仙碱治疗,2 组均持续治疗1 周。比较2 组治疗前后中医证候评分,黄嘌呤氧化酶（XOD）、血尿酸（BUA） 水平及血清白细胞介素（IL）-1β、IL-6、IL-8 水平;比较2 组临床疗效及不良反应。结果：治疗后,2 组关节疼痛、关节肿胀、心烦不安、发热口渴、小便黄评分均较治疗前降低（P＜0.05）,痛风饮组上述5 项中医证候评分均低于对照组（P＜0.05）。治疗后,2 组BUA、XOD 水平及血清IL-1β、IL-6、IL-8 水平均较治疗前降低（P＜0.05）,痛风饮组BUA、XOD 水平及血清IL-1β、IL-6、IL-8 水平均低于对照组（P＜0.05）。痛风饮组总有效率为91.46%,对照组总有效率为77.78%,2 组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。治疗期间,2 组均未发生严重不良反应。结论：痛风饮联合秋水仙碱治疗AGA 可提高临床疗效,有效缓解患者的临床症状,降低其BUA、XOD 水平,减轻炎症反应,且安全性高。