DESI-MSI技术在经典名方芍药甘草汤质量控制中应用研究

目的使用超高效液相色谱-二极管阵列检测器检测法(UHPLC-DAD)和解吸电喷雾电离-离子化质谱成像技术(desorption electrospray ionization-mass spectrometry imaging,DESI-MSI)对15批芍药甘草汤(Shaoyao-Gancao-Decoction,SGD)物质基准和对应实物进行分析,考察DESI-MSI在经典名方SGD质量控制中的优势。方法以SGD为研究模型,采用传统UHPLC-DAD法建立物质基准指纹图谱,并对SGD指标成分(芍药苷、甘草苷、甘草酸)含量、出膏率进行考察。同时,以芍药甘草汤对应实物冻干粉为研究载体,将其复溶后点样于定性滤纸,并固定于载玻片制成样品,以甲醇-甲酸(1 000∶1)为喷雾溶剂,体积流量3μL/min;扫描范围m/z 100～1 200;空间分辨率300μm;喷雾气(N2)压力0.5 MPa;离子源温度120℃,采用正负离子全扫描样本。结果 DESI-MSI法能检测到SGD指标成分芍药苷、甘草苷、甘草酸以及共有峰成分芍药内酯苷等。同时,DESI-MSI法还能检测到来自甘草、白芍的甘草皂苷G2、甘草皂苷J2、没食子酸、柠檬酸、对羟基苯甲酸等11种成分,并对其相对含量进行直观呈现,定性分析能力远强于UHPLC-DAD法。结论基于DESI-MSI技术无需进行复杂的样品前处理,可以在无对照品情况下进行复杂样品的定性、相对含量分析,灵敏度高,分析能力强,可以作为经典名方物质基准、对应实物及配方颗粒样品的质控研究方法。     

一清颗粒中五种生物碱类药效组分分析

目的:分析市售一清颗粒中5种生物碱类药效组分盐酸药根碱-盐酸表小檗碱-盐酸黄连碱-盐酸巴马汀-盐酸小檗碱的含量,为建立与临床疗效相对应的质量标准提供依据。方法:采用高效液相色谱法。结果:7个厂家的一清颗粒中生物碱类药效组分含量分别为:厂家1:0.0738-0.1795-0.2517-0.2801-1.0109 mg·g-1;厂家2:0.1273-0.2527-0.3114-0.3890-1.7094 mg·g-1;厂家3:0.0570-0.2210-0.2501-0.2143-0.8732 mg·g-1;厂家4:0.0334-0.1164-0.1333-0.1256-0.4674 mg·g-1;厂家5:0.0201-0.0397-0.0545-0.0765-0.2403 mg·g-1;厂家6:0.0764-0.1387-0.2513-0.2648-0.9727 mg·g-1;厂家7:0.1408-0.1448-0.3089-0.2974-1.0175 mg·g-1。结论:本方法准确、简便、快速,为全面控制一清颗粒质量提供科学依据。7个厂家一清颗粒中5种生物碱药效组分含量差别较大,厂家2各组分含量较高,厂家4、5含量相对较低。     

配伍组分、配伍比例对芍药甘草汤抗炎镇痛作用的影响

目的：从配伍组分、配伍比例两方面考察对芍药甘草汤的抗炎、镇痛作用的影响。方法：分别将SD大鼠、昆明种小鼠随机分为空白组、阳性对照组、芍药甘草汤组（250 mg·kg-1）,采用大鼠角叉菜胶足肿胀实验、二甲苯致小鼠耳肿胀实验观察芍药甘草汤的抗炎效果,采用小鼠热板法实验、小鼠醋酸扭体法实验观察镇痛效果。结果：白芍、炙甘草（1∶1）组抗炎作用显著,有一定的镇痛作用。醋白芍、炙甘草（1∶1）组显示出明显的抗炎、镇痛效果,其次是醋白芍、炙甘草（1.5∶1）组。醋白芍、炙甘草（6∶1）组仅显示微弱的抗炎作用,未显示出明显的镇痛效果。结论：醋白芍、炙甘草按照质量比1∶1配伍时具有显著的抗炎、镇痛作用,且效果优于其他组。     

木樨科丁香叶中总黄酮的含量测定

目的:本实验用比色法对丁香叶中总黄酮的含量进行测定。方法:以乙醇为溶剂,用超声波提取的方法对丁香叶中总黄酮进行提取。结果:采用以上方法提取可得到黄酮类化合物,总黄酮含量是89．28mg/g。结论:该方法方便、准确可靠、重现性好,可以作为木樨科丁香中总黄酮含量测定方法。     

内质网蛋白29过表达慢病毒载体的构建及其对胃癌细胞生物学行为的影响

目的：构建内质网蛋白29（ERp29）慢病毒过表达载体,探讨ERp29过表达对胃癌MGC803和SGC7901细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法：构建带有红色荧光蛋白标签的ERp29基因表达质粒的慢病毒（pCDH-ERp29）和对照质粒（pCDH-Vector）,分别感染MGC803和SGC7901细胞;荧光显微镜观察细胞感染情况;CCK-8和平板克隆实验检测稳定感染ERp29基因的胃癌MGC803和SGC7901细胞的增殖能力;Transwell小室实验分别检测稳定感染ERp29基因的胃癌MGC803和SGC7901细胞的迁移和侵袭能力;应用Real-time PCR和Western blotting技术分别检测稳定感染ERp29基因的胃癌MGC803和SGC7901细胞中ERp29 mRNA和蛋白表达水平。结果：酶切鉴定显示成功构建pCDH-ERp29过表达载体,荧光显微镜下观察到成功感染胃癌细胞。CCK-8实验和平板克隆实验检测,与pCDH-Vector组比较,pCDH-ERp29组MGC803和SGC7901细胞增殖能力无明显变化（P>0.05）;Transwell小室实验,与pCDH-Vector组比较,pCDH-ERp29组MGC803和SGC7901细胞的迁移和侵袭细胞数明显减少（P<0.05）。pCDH-ERp29组细胞中ERp29 mRNA和蛋白表达水平明显高于pCDH-Vector组（P<0.05）。结论：成功构建过表达ERp29基因的慢病毒载体,过表达ERp29基因可明显抑制胃癌MGC803和SGC7901细胞的迁移和侵袭。     

一种高效稳定的磷酸钙转染293T细胞方法的建立及评价

目的：探讨2种磷酸钙转染法转染293T细胞的效果,建立一种实现高效稳定磷酸钙转染293T细胞的方法。方法：荧光显微镜观察采用2种磷酸钙转染方法（传统磷酸钙转染法和改良磷酸钙转染法）转染pCDH-GFP-3xflag-TRAF6质粒进入293T细胞的转染效率。采用Real-time PCR法和Western blotting法分别检测2种磷酸钙转染方法转染pCDH-GFP-3xflag-TRAF6质粒进入293T细胞后,肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6） mRNA和flag蛋白表达水平。结果：荧光显微镜下观察,与传统磷酸钙转染法比较,改良磷酸钙转染法转染pCDH-GFP-3xflag-TRAF6质粒进入293T细胞24和48 h后的转染效率明显升高（P<0.01）;Real-time PCR法和Western blotting法检测,与传统转染方法比较,磷酸钙转染改良法转染pCDH-GFP-3xflag-TRAF6质粒进入293T细胞24和48 h后,TRAF6 mRNA和flag蛋白表达水平均明显升高（P<0.01）。结论：本研究建立的改良磷酸钙转染方法是一种高效、稳定的DNA转染方法。     

基于传统煎药工艺的川牛膝饮片标准汤剂制备及质量评价方法研究

目的:制备来自于不同产地的15批次川牛膝饮片标准汤剂,并以其出膏率、指标成分含量及转移率、指纹图谱等数据为指征进行研究。方法:参照传统煎药工艺制备标准汤剂,采用UPLC-DAD法测定指标成分含量,计算转移率、出膏率及指纹图谱数据研究。结果:15批次川牛膝样品制成的标准汤剂中杯苋甾酮含量为0.066～0.210 mg/m L,转移率为61.27%～99.69%,平均转移率为73.27%,标准偏差为11.88%。出膏率范围为17.66%～31.45%,平均出膏率为24.48%,标准偏差为4.54%。指纹图谱共有峰11个,确认1个,为杯苋甾酮(C_(29)H_(44)O_8)。结论:本研究建立的制备工艺符合传统汤剂制备方法,且稳定可行,可用于川牛膝饮片标准汤剂的制备及质量评价,并为配方颗粒、经典名方研究及工业化生产提供基本的数据支撑和参考。     

全腹腔镜与辅助腹腔镜下远端胃癌根治术的近期疗效和安全性研究

目的 探讨全腹腔镜与辅助腹腔镜下远端胃癌根治术的近期疗效及安全性。方法 回顾性分析福建医科大学附属第一医院胃肠外科二区2016年2月—2017年8月收治的行腹腔镜远端胃癌根治术患者80例,根据手术方式分为全腹腔镜组（45例）和辅助腹腔镜组（35例）,比较两组患者的手术相关指标。结果 在术中指标方面,两组患者的手术时长和淋巴结清扫总数比较,差异均无统计学意义（均P>0.05）,但全腹腔镜组的切口长度和术中出血量均短于（少于）辅助腹腔镜组,差异具有统计学意义（均P<0.05）;在术后恢复指标方面,两组患者的术后排气时间、术后住院天数及术后总并发症比较,差异无统计学意义（均P>0.05）。结论 全腹腔镜下远端胃癌根治术具有术中出血少、手术切口长度较短、对机体损伤轻、愈合的瘢痕小等优点易于被患者所接受。因此,全腹腔镜下远端胃癌根治术疗效更好且安全可行。     

胃癌D2根治术后短期并发症对患者远期生存率的影响

目的 探讨胃癌D2根治术后短期并发症对患者远期生存率的影响。方法 采用回顾性病例对照研究方法，选取接受胃癌D2根治手术治疗的421例患者；根据术后短期有无并发症分为实验组（并发症组）76例和对照组（无并发症组）345例。为减小选择偏倚，通过倾向性得分匹配（PSM）平衡各组变量后，采用Kaplan-Meier生存分析法检验两组患者的远期生存率；Log rank法行单因素和Cox多因素分析筛选预后影响因素。结果 实验组与对照组的远期生存率比较差异无统计学意义（P>0.05）；组织学类型、淋巴结转移率和pTNM分期是影响患者术后远期生存率的独立危险因素。结论 胃癌D2根治术后的短期并发症对患者远期生存率没有显著性影响，但积极预防并控制并发症具有一定的临床意义。