人胎盘绒毛提取物体外对T细胞应答的抑制效应

目的:了解胎盘绒毛对T细胞应答的抑制能力及其在妊娠周期不同阶段的变化. 方法:制备孕10,20和37 wk的绒毛提取物,通过检测CD69和CD25分子的表达,评价其对T细胞活化的影响,WST-1法分析其对T细胞增殖的影响,流式微球阵列(CBA)法分析其对Th1/Th2细胞因子谱的影响,并以Western印迹法分析提取物中吲哚胺-2,3双加氧酶(IDO)的含量. 结果:孕早、中、晚期的胎盘绒毛提取物均能显著抑制植物血凝素(PHA)诱导的人T细胞活化,增殖,细胞因子分泌以及ConA诱导的小鼠T细胞活化(P<0.01). 但三个时期的提取物对上述不同T细胞行为的抑制强度不同,以20 wk提取物的抑制作用最强. 提取物中IDO蛋白的含量20 wk最高,37 wk次之,10 wk最低. 结论:妊娠不同时期的绒毛滋养细胞均能够抑制T细胞应答,但抑制强度不一致,且对T细胞不同行为的抑制存在分离现象,提示妊娠不同时期的绒毛滋养细胞表达抑制因子的模式不同.     

融合基因FADDdel-GFP修饰在胰岛细胞自杀效应中的作用

目的 研究FADDdel-GFP在Fas/FasL介导的胰岛细胞自杀效应中的作用.方法 采用DNA转染技术将重组体pFADDdel-GFP导入哺乳动物细胞NIT(鼠胰岛细胞瘤细胞);采用FACS检测细胞因子诱导后NIT细胞的Fas和FasL表达情况及细胞自杀效应;采用active caspase3检测试剂盒检测细胞因子作用前后NIT细胞的caspase-3活性变化.结果 NIT细胞表面无Fas和FasL表达,细胞因子可促其表达增加;细胞因子作用后,FADDdel-GFP修饰的NIT细胞的细胞损伤百分率和细胞内caspase3活性明显低于对照组.结论 FADDdel-GFP修饰的NIT细胞具有一定的抵抗Fas/FasL途径介导细胞自杀效应的能力.     

曲古抑菌素A对缺糖/缺氧损伤PC12细胞的保护作用

目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对PC12大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞缺糖/缺氧损伤的保护作用及其可能的作用机制。方法建立PC12细胞缺糖/缺氧(oxygen and glucose deprivation,OGD)损伤模型,1-640 nmol.L-1TSA处理细胞,噻唑蓝(MTT)检测对PC12细胞活性的影响,Propidium iodide(PI)和Hoechst33258染色检测细胞凋亡与坏死,荧光显微镜和流式细胞仪检测各组细胞内活性氧(ROS)的含量。结果与模型组相比,80 nmol.L-1TSA可明显提高ODG PC12的细胞存活率,降低细胞内的ROS含量(P<0.05)。结论 TSA对OGD损伤的PC12细胞具有保护作用,其机制可能是通过增加细胞内能量代谢中各种酶的乙酰化水平来应对缺血损伤。     

染料木黄酮对生长板软骨细胞胶原合成的影响及其机制

目的探讨染料木黄酮(5,7,4′三羟基异黄酮)对大鼠肋生长板软骨细胞(ratcostochondralgrowthplatechondrocyte,RGC)胶原和Sox9表达的影响。方法原代培养RGC,3Hproline参入、RTPCR和Westernblot分别检测染料木黄酮对第1代RGC胶原合成、col2a1基因转录和Sox9表达的影响。结果染料木黄酮抑制RGC的胶原合成(P<0.05),col2a1的转录和Sox9的表达,其抑制作用随着浓度的升高而增强。结论染料木黄酮抑制培养RGC胶原合成的作用至少部分是通过下调Sox9的表达实现的。     

激光共聚焦显微镜在细胞内ROS研究中的激光干扰问题

目的 对激光共聚焦显微镜在细胞内ROS研究中的激光干扰问题进行探讨.方法 ROS探针标记ECV-304及BAW264.7细胞后,激光共聚焦显微镜488nm波长检测器分别进行连续和间隔观测1200s,比较两种观测方式下细胞荧光强度的变化;外源性加入H2O2,证实间隔观测时系统的灵敏性.结果 在连续观测方式下,细胞荧光强度短时间内显著增强,改为间隔观测后细胞荧光强度变化缓慢,但维持在低水平且在外源性加入H2O2后细胞荧光强度迅速增强.结论 激光共聚焦显微镜激发激光可引起细胞大量产生ROS,对检测系统造成干扰,采用间隔观测的方法可显著改善系统自身的这种缺陷,并能保持系统的检测灵敏性.