白藜芦醇对活化小鼠T淋巴细胞IL-2和CD25表达的影响

目的：研究白藜芦醇(RSV)对活化的小鼠T淋巴细胞分泌IL-2和CD25的影响，并探讨其免疫抑制机制。方法：无菌分离小鼠淋巴结细胞，与不同浓度的白藜芦醇共同孵育1小时后，用多克隆刺激剂佛波醇酯和离子霉素刺激T细胞活化，继续培养6小时后收获细胞，进行胞内细胞因子染色，流式细胞仪检测IL-2的分泌情况，RT-PCR检测IL-2 mRNA的表达：24小时后检测CD25表达。结果：RSV对IL-2的分泌具有抑制作用，并呈剂量依赖性，同时RSV也能抑制T细胞表面活化分子CD25。结论：RSV对活化T细胞分泌的细胞因子IL-2及IL-2α链CD25的表达可能是RSV对T细胞具有免疫抑制作用的机制之一，并可能与T细胞活化通路的PKC-NF-κB信号传导途径相关。     

ERK信号途径对EGF诱导的HaCaT细胞增殖具有双向调节作用

目的利用带有ERK-2基因的腺病毒载体感染成角质细胞系HaCaT,探讨ERK信号途径在EGF对HaCaT细胞增殖影响中的作用。方法用3H-TdR掺入法检测HaCaT细胞增殖及PD98059对EGF促HaCaT细胞增殖的影响。腺病毒载体转染HaCaT细胞,流式细胞仪检测转染率,W estern b lot检测ERK-2蛋白的表达。结果1μg/L和10μg/L EGF可促进HaCaT细胞增殖,而100μg/L EGF促增殖作用反下降。PD98059抑制EGF引起的HaCaT细胞增殖,且具有浓度依赖性。腺病毒载体具有高转染率,感染Ad-ERK2的HaCaT细胞高表达ERK-2。EGF抑制转染的HaCaT细胞增殖。结论ERK信号途径在EGF促HaCaT细胞增殖中具有双向调节作用。     

维生素C对大鼠肋骨生长板软骨细胞增殖和胶原合成的影响

探讨不同浓度的维生素C(AscorbicAcid ,Asc)对培养大鼠肋生长板软骨细胞 (ratcostochondralgrowthplatechondrocyte,RGC)增殖和胶原合成的影响。分离、培养RGC ,以组织化学和免疫组织化学的方法鉴定第 2代RGC的表型 ;分别用3 H TdR和3 H Proline掺入法检测 2 5、5 0和 10 0mg/LAsc对第 2代RGC增殖和胶原合成的影响。3种浓度的Asc均能促进RGC胶原合成 (P <0 0 5 ) ,2 5mg/L和 5 0mg/LAsc的促胶原合成作用明显强于 10 0mg/L(P <0 0 5 ) ;2 5mg/L和 5 0mg/L的Asc促进RGC增殖 (P <0 0 5 ) ,10 0mg/L的Asc抑制RGC的增殖 (P <0 0 5 )。因此一定浓度的Asc具有促进RGC增殖和胶原合成的作用 ,2 5mg/L～ 5 0mg/L是较为合适的添加浓度。     

染料木黄酮抑制生长板软骨细胞的增殖与基质合成

目的： 探讨染料木黄酮对大鼠肋生长板软骨细胞（RGC）的形态、增殖和胞外基质成分合成的影响。方法： 原代培养RGC，1×10^－6 μmol/L-1×10^－4 μmol/L染料木黄酮处理第1代RGC 24 h，观察RGC形态，同位素掺入检测RGC增殖、胶原和蛋白多糖合成，RT-PCR检测collagen Ⅱ和aggrecan基因表达。结果： 染料木黄酮改变了RGC的形态，随着浓度的升高，突起和漂浮细胞的数量增加。染料木黄酮剂量依赖性地抑制RGC的增殖、胶原和蛋白多糖的合成（P<0.05），以及collagenⅡ和aggrecan mRNA的转录。结论： 染料木黄酮抑制RGC的增殖和胞外基质的合成。     

腺病毒介导细胞外信号调节激酶2表达对去分化软骨细胞增殖及胞外基质合成的影响

目的:观察腺病毒介导细胞外信号调节激酶2的过度表达对去分化软骨细胞增殖和细胞外基质合成的影响,以及腺病毒介导细胞外信号调节激酶2用于修饰去分化软骨细胞的可行性。方法:实验于2004-09/2005-05在暨南大学组织移植与免疫研究中心进行。SD大鼠5只,周龄为3～5周,此处请核对体质量为(150±20)g,分离、培养大鼠肋生长板软骨细胞,利用Adeasy系统构建携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体。流式细胞仪检测不同感染复数的携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体感染第5代大鼠肋生长板软骨细胞的效率,Westernblot检测携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体感染大鼠肋生长板软骨细胞中细胞外信号调节激酶1/2和磷酸化细胞外信号调节激酶2的表达,3H-TdR,3H-proline和35S-sulfate同位素掺入检测携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体感染对大鼠肋生长板软骨细胞增殖、胶原和蛋白多糖合成的影响。结果:①成功构建携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体重组腺病毒。②100感染复数的携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体感染第5代大鼠肋生长板软骨细胞的效率大于90%。③携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体感染的第5代大鼠肋生长板软骨细胞中细胞外信号调节激酶1/2和磷酸化细胞外信号调节激酶2的表达均显著增加,分别是Ad-CMV组的15.58和1.85倍。④同位素检测结果表明携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体的感染促进3H-TdR、3H-proline和35S-sulfate的掺入,分别是对照组的2.52,1.61和1.53倍(P<0.05)。结论:腺病毒介导细胞外信号调节激酶2基因的过度表达促进去分化大鼠肋生长板软骨细胞的增殖和细胞外基质成分的合成。     

可溶性Jagged 1/Fc嵌合蛋白对小鼠淋巴细胞活化、增殖和周期的影响

目的:研究可溶性Jagged 1/Fc嵌合蛋白在小鼠淋巴细胞活化、增殖和周期中的作用.方法:选择有效剂量为500 μg/L Jagged 1/Fc嵌合蛋白(Jagged 1/Fc),以活体染料/羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯染色,建立在多克隆刺激剂刀豆蛋白A(ConA)或佛波醇酯(PDB)加离子霉素(Ion)刺激下评价淋巴细胞增殖的模型,通过流式细胞术分析Jagged 1/Fc对淋巴细胞增殖的作用;采用碘化丙锭染色检测Jagged 1/Fc对PDB加Ion刺激的淋巴细胞周期变化的影响;利用荧光标记的mAb双染技术观察Jagged 1/Fc对T细胞早期和中期活化标志CD69和CD25表达的影响.结果:Jagged 1/Fc对ConA刺激或非刺激的CD3 细胞CD69和CD25的表达无明显影响,对ConA或PDB加Ion刺激或非刺激的淋巴细胞的增殖指数也无明显影响,导致非刺激的淋巴细胞sub-G0期细胞百分比增高,S期细胞百分比降低,但并不影响PDB加Ion诱导的淋巴细胞各期的变化.结论:这些结果提示500 μg/L Jagged 1/Fc对小鼠淋巴细胞活化和增殖无明显作用,对PDB加Ion刺激的淋巴细胞周期也无明显影响,但能促进未受刺激的淋巴细胞凋亡,使细胞停滞于GO/G1期,阻止其进入S期.     

杨梅素对淋巴细胞活化及增殖的影响

目的研究杨梅素(myricetin)对小鼠T细胞活化及增殖的影响,探讨其作为免疫调节药物开发的可能性并提供相关实验依据。方法无菌分离小鼠淋巴结细胞,加入不同浓度的杨梅素预先孵育1h,用多克隆刺激剂刀豆蛋白(ConA)刺激T细胞活化,利用荧光标记的单克隆抗体双染技术,流式细胞仪检测杨梅素对小鼠CD3+T细胞CD69表达的影响;采用3H-TdR参入法检测杨梅素对淋巴细胞增殖的影响,采用半定量RT-PCR技术从mRNA水平检测杨梅素对IL-2mRNA表达的影响。采用ELISPOT检测杨梅素对IFN-γ分泌的影响。结果杨梅素能抑制T细胞早期活化标志CD69的表达,并能抑制淋巴细胞增殖反应,同时对淋巴细胞活化后IL-2 mRNA的表达及IFN-γ的分泌也有抑制作用。结论杨梅素对淋巴细胞的活化增殖反应具有抑制作用。     

nanoLC-ESI/MS/MS在ECV304细胞蛋白质组学研究中的应用

目的：应用纳升液联用技术(nanoLC-ESI/MS/MS)对ECV304细胞蛋白质组学进行初步分析。方法：提取ECV304细胞总蛋白,经变性、还原、烷基化和酶解,nanoLC-ESI/MS/MS对酶解后的肽段进行分析,数据库（Swissprot）检索鉴定蛋白质,生物信息学工具对所鉴定的蛋白质进行细胞定位和功能分类。结果：从8 μg细胞总蛋白中鉴定了120种蛋白质,所鉴定蛋白质的分子质量（MW）范围从6 648 D至280 739 D, MW<20 kD的蛋白质占24.2%,MW>100 kD的蛋白质占5.0%;主要位于细胞质、细胞骨架、细胞核和细胞膜,分别为27.8%、19.0%、15.2%和10.1%;大多为结构蛋白质和催化活性的蛋白质,分别为36.4%和34.1%,具有信号转导活性的占11.4%;其中角蛋白8、18和vimentin等为内皮细胞特异表达的蛋白质。结论：本研究建立了nanoLC-ESI/MS/MS分析ECV304细胞的蛋白质组学方法,为内皮细胞及内皮细胞损伤机制的蛋白质组学研究奠定了实验基础。     

子痫前期患者血清细胞因子表达谱及其临床意义

目的:研究子痫前期患者血清中细胞因子表达谱的变化及其临床意义。方法:①以Luminex液相芯片技术检测子痫前期患者(A组)16例、正常妊娠妇女(B组)19例、正常非孕妇(C组)12例3组人群血清IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IFN-γ、TNF-α、MCP-1、VEGF、NT-proBNP等细胞因子表达水平,并进行比较;②收集、整理和分析3组对象血压、白细胞计数、尿蛋白及尿酸等临床常规检查指标,并与细胞因子表达谱的变化间进行对比分析。结果:①与B比,A组血清中IL-8、MCP-1、IL-6、TNF-α和VEGF5种细胞因子表达水平升高,有统计学差异(P<0.05),与疾病严重程度无明显相关性;②与B比,轻度(A1组)和重度(A2组)子痫前期者白细胞计数、尿酸水平均升高,有统计学差异(P<0.05或0.01);A1组与A2组间比较,尿酸水平有统计学差异(P<0.05),而白细胞计数水平则无统计学差异(P>0.05)。结论:子痫前期患者血清细胞因子表达呈炎症及血管损伤特征,尿酸水平可作为其疾病严重程度的监控指标。     

活化大鼠肝星状细胞的蛋白质表达谱

目的 用在线二维纳升高效液相结合串联质谱(2D nanoLC-MS/MS)技术分析体外培养大鼠原代肝星状细胞(HSC)的蛋白质表达谱. 方法 分离培养大鼠原代HSC,取体外培养第10天自动活化的大鼠HSC总蛋白质,通过2D nanoLC-MS/MS对酶解所获肽段进行分离和鉴定,并对鉴定的蛋白质进行细胞定位和功能分类. 结果从50μg HSC总蛋白质中鉴定出1014种蛋白质,相对分子质量范围为7832～588 364;主要分布于细胞核、细胞骨架、线粒体、内质网,分别占25%,17%、13%、13%.蛋白质功能主要与核酸代谢,细胞器组装、信号传导、能量代谢等生理进程有关,分别占17%、14%,10%、9%;其中细胞骨架蛋白α-平滑肌肌动蛋白,波形蛋白和结蛋白是活化大鼠HSC特异性表达的蛋白质.结论 本研究获得了目前较为全面的活化大鼠原代HSC的蛋白质表达谱,为深入研究HSC的活化机制奠定了基础.