转录因子EB及下游自噬相关基因Beclin1在肌萎缩侧索硬化症转基因鼠海马中的表达变化

目的:探讨TFEB及其下游自噬相关基因Beclin1在95、108 d和122 d肌萎缩侧索硬化症(ALS)转基因鼠大脑海马中的表达情况。方法:分别取95、108 d和122 d ALS转基因鼠和野生型鼠的海马,应用RT-PCR、免疫印迹和免疫荧光,检测TFEB和Beclin1在大脑海马区的表达变化。结果:与同窝野生型鼠比较,ALS转基因鼠TFEBmRNA和蛋白水平在95d升高,108 d和122 d均降低。免疫荧光结果显示,与同窝野生型鼠比较,95 d TFEB免疫阳性反应增强,108 d和122 d减弱。自噬相关基因Beclin1表达情况与TFEB一致。结论:TFEB和Beclin1在ALS转基因鼠海马中表达异常,表明TFEB和Beclin1调节的自噬与ALS发生密切相关。     

关于NAFLD临床研究的初步探讨

NAFLD(非酒精性脂肪性肝病)主要指的是除外酒精和其他明确损害肝脏的因素所致的以肝细胞内脂肪过度沉积为主要特征的临床病理综合征。历代中医文献中记载的该病病因病机纷繁多样,然不外乎由内伤七情、饮食,外感六淫等因素加之脾胃气血虚弱,虚实相合而成。而现代医学认为,NAFLD多与肥胖、高脂血症、2型糖尿病、高血压以及多坐少动的生活方式密切相关。故本文特从中医学及现代医学的角度,对NAFLD的临床研究做初步的探讨。     

细胞凋亡在熄风止颤合剂治疗PSI诱导的帕金森病中的作用

目的 观察熄风止颤合剂对蛋白酶抑制因子(PSI)诱导的帕金森病慢性动物模型大鼠的治疗作用,探讨熄风止颤合剂对帕金森病治疗的细胞凋亡机制.方法 雄性SD大鼠背部皮下注射PSI,制备慢性帕金森病动物模型,将造模成功大鼠随机分为3组:分别以生理盐水、美多巴及熄风止颤合剂进行灌胃治疗,观察其行为变化,并分别通过Tunel法、免疫组织化学的方法观察大鼠脑多巴胺神经元的变化.结果 中药熄风止颤合剂可以改善帕金森病的症状,且中药组大鼠大脑中多巴胺神经元的密度高于美多巴组,细胞凋亡指数低于美多巴组.结论 熄风止颤合剂对帕金森病有治疗作用,其作用可能是通过降低多巴胺神经元的凋亡.     

脂质体介导化学合成siRNA转染原代心肌细胞:筛选理想浓度

背景:siRNA转染是完成RNA干扰的关键一步.目前用于心肌细胞的RNA干扰技术多以质粒为载体转染长链shRNA,其步骤复杂.脂质体转染化学合成短链siRNA是一种操作简便,低毒高效的转染方法,将其应用于心肌细胞转染,有利于RNA干扰技术的推广应用.目的:筛选脂质体介导化学合成siRNA转染原代心肌细胞的最佳浓度,以及简单高效的RNA干扰操作方法.方法:应用脂质体siPORT~(TM)>NeoFX~(TM)转染试剂介导5,10,20,30 nmol/L的CY3-Negative siRNA转染心肌细胞,同时设立空白对照组,转染24 h后分别应用荧光显微镜,流式细胞仪检测转染效率和细胞凋亡率,筛选最优浓度.根据优化浓度转染PHB siRNA,48 h后检测蛋白表达验证转染效果.结果与结论:随CY3-Negative siRNA浓度的增加,在荧光显微镜下观察到激发出红色荧光的细胞比例随之增加,流式细胞仪检测出各组平均转染效率也依次增高(P＜0.05),其中30 nmol/L组转染效率最高(P＜0.05),而各实验组与空白对照组之间的细胞凋亡率差异无显著性意义(P＞0.05).将心肌细胞转染30 nmol/L的PHB siRNA,48 h后PHB蛋白表达平均下降74.11%(P＜0.05).实验结果表明,脂质体转染试剂siPORT~(TM) NeoFX~(TM)介导化学合成siRNA转染原代心肌细胞的理想浓度是30 nmol/L.     

熄风止颤合剂对PSI诱导的帕金森病大鼠黑质超微结构的影响

目的:观察熄风止颤合剂对帕金森病模型大鼠行为学及脑内黑质多巴胺神经元、神经胶质细胞超微结构的影响。方法:雄性SD大鼠背部皮下注射蛋白酶抑制因子(proteasome inhibitorsI,PSI)造模,造模成功的大鼠随机分为三组:模型组、西药组、中药组。造模完毕四周后,连续3周分别灌胃给予生理盐水、美多巴、熄风止颤合剂。灌胃前、后观察各组大鼠行为学改变。各组大鼠以4%多聚甲醛经心脏灌注固定后取黑质,应用透射电镜观察其神经元、神经胶质细胞超微结构的改变。结果:模型组大鼠出现不自主动作增多、颤抖、卷曲姿态、运动迟缓等表现,中药组上述行为学异常明显减轻。电镜下观察到模型组黑质多巴胺神经元胞膜不连续,核内染色质凝集,线粒体空泡样变或髓样变,高尔基复合体囊泡变,核糖体明显减少。神经胶质细胞核异染色质边集,核周隙增宽,多条胞周有髓神经纤维髓鞘明显剥离。上述病理性改变在中药组较模型组明显轻微。结论:熄风止颤合剂能改善帕金森病模型大鼠的行为学异常、减轻黑质多巴胺神经元和神经胶质细胞的超微病理变化。     

DDX3和酪蛋白激酶1ε在肌萎缩侧索硬化症转基因鼠脑干中的表达变化

目的检测DDX3和酪蛋白激酶1ε(CK1ε)在肌萎缩侧索硬化症(ALS)转基因鼠脑干中的表达变化,探讨DDX3和CK1ε在ALS脑干运动神经元变性中的作用。方法选取ALS转基因鼠33只,分别于发病早期(95 d)、中期(108 d)和晚期(122 d)3个时间点剥离脑干,应用RT-PCR、Western blotting和免疫荧光染色技术分别检测ALS转基因鼠脑干组织中DDX3和CK1ε的表达规律,在脑干运动核团舌下神经(12 N)和面神经(7 N)中阳性细胞的分布特点及细胞定位,每组均选择相同数量的同窝野生型鼠作为对照。结果 RT-PCR和Western blotting结果显示,与同窝野生型鼠相比,ALS转基因鼠脑干组织中DDX3和CK1εmRNA于95 d、108 d、122 d表达均无明显变化,DDX3和CK1ε蛋白在95 d和108 d表达上调,122 d表达下调(P<0.01,P<0.001)。免疫荧光结果显示,在ALS鼠和野生型鼠脑干的12 N和7N区域均可检测到DDX3和CK1ε阳性细胞,DDX3和CK1ε表达在神经元,在星形胶质细胞不表达。ALS鼠和野生型鼠DDX3和CK1ε免疫反应性具有差异。结论 DDX3和CK1ε在脑干中的表达异常与ALS发病密切相关。     

DDX3和CK1ε在ALS转基因小鼠大脑皮层中的表达变化

目的:观察RNA解旋酶DDX3和酪蛋白激酶1ε(CK1ε)在ALS转基因小鼠大脑皮层组织中的表达变化,探讨DDX3与CK1ε表达改变在ALS发病中的作用和意义。方法:选择SOD1-G93A转基因小鼠进行试验,分别于发病早期(95 d)、中期(108 d)、晚期(122 d)取材。应用免疫荧光双标染色方法检测DDX3和CK1ε在ALS转基因小鼠大脑皮层中的表达变化规律及其与神经元的共定位关系。应用RT-PCR和Western Blot技术检测ALS转基因小鼠大脑皮层组织中DDX3和CK1ε在mRNA、蛋白水平的表达变化,每组均选择同年龄的野生型小鼠作为对照组。结果:与野生型鼠相比,ALS转基因小鼠大脑皮层组织中的DDX3蛋白和mRNA早期表达均无明显变化,中、晚期表达均升高;CK1ε蛋白在ALS小鼠发病早期没有明显改变,中、晚期表达升高,mRNA表达无明显变化。免疫荧光双标结果显示,ALS转基因小鼠和野生型小鼠大脑皮层组织中均可检测到DDX3和CK1ε阳性细胞,且与神经元共表达。ALS转基因小鼠大脑皮层组织内DDX3与CK1ε免疫反应性较同龄野生型鼠明显增强。结论:DDX3与CK1ε表达异常与ALS大脑皮层病变密切相关,参与了ALS发病。     

NLRP3炎症小体在肌萎缩侧索硬化症中的作用

肌萎缩侧索硬化症(ALS)是一种以运动神经元变性为特征的神经退行性疾病。其具体发病机制迄今尚未完全阐明,研究发现持续过度的炎症反应在ALS的发病机制中发挥重要作用。而作为中枢神经系统中最具特征的炎症小体,NLRP3炎性小体的激活是ALS发病的关键因素之一。因此,靶向NLRP3炎症小体可能为ALS的治疗开辟新的途径。     

高脂血症性急性胰腺炎临床分析

目的 探讨高脂血症性急性胰腺炎(HLAP)的临床特征.方法 对20例HLAP患者(HLAP组)资料进行回顾性分析,并与50例急性胆源性胰腺炎(ABP)患者(ABP组)进行对照研究,比较实验室指标、病情严重程度和临床转归等方面的差异.结果 HLAP组入院时血淀粉酶(580±220)U/L,尿淀粉酶(384±55)U/L,ABP组患者入院时血、尿淀粉酶分别为(1362±473)、(775±68)U/L,两组比较差异均有统计学意义(P<0.01);HLAP组患者入院时Ranson评分、入院前3 dAPACHEⅡ评分、胰腺Balthazar CT评分分别为(5.21±0.34)、(14.56±2.89)和(5.78±1.17)分,ABP组患者分别为(4.21±0.64)、(11.34±2.09)和(5.21±1.12)分,两组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 当遇到患者有胰腺炎临床表现伴有血三酰甘油明显升高,但血、尿淀粉酶轻度升高或不升高时,应考虑HLAP的可能,在治疗过程中,除常规治疗外,应积极降血脂治疗.     

Cx43在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的 探讨非小细胞肺癌组织及癌旁正常肺组织中Cx43蛋白及mRNA的表达及意义.方法 应用免疫组织化学、Western blot和原位分子杂交观察48例非小细胞肺癌（NSCLC）及22例癌旁正常肺组织中Cx43蛋白及mRNA的表达.结果 ①癌旁正常肺组织和NSCLC组织中Cx43蛋白阳性表达率分别为90.91%和47.92%;Cx43mRNA的阳性表达率分另别为95.45%和60.42%.NSCLC组织中Cx43蛋白及mRNA阳性表达率均低于正常肺组织（P均＜0.05）.②有淋巴结转移组Cx43蛋白及mRNA阳性表达率分别为16.00%和20.00%;无淋巴结转移组两者的阳性表达率分别为69.57%和78.26%.两两比较差异均有统计学意义（P均＜0.05）.③Western blot显示NSCLC组织中Cx43的蛋白表达水平低于正常肺组织,有转移组中Cx43的蛋白表达水平低于无转移组,各组比较差异均有统计学意义,P均＜0.05.结论 Cx43蛋白和mRNA低表达与非小细胞肺癌发生和转移有关.