人胰腺核糖核酸酶的基因克隆、蛋白表达与活性测定

目的：构建人胰腺核糖核酸酶（hpRNase）原核表达载体、获得纯化hpRNase蛋白,为构建乳腺癌单链免疫毒素奠定基础。方法：针对编码hpRNase成熟蛋白基因的cDNA序列设计相应的引物,通过反转录PCR技术,从一例胰腺切除患者的组织标本中,扩增出编码hpRNase成熟蛋白的cDNA序列,亚克隆入表达载体pPROEX—HTb;在大肠杆菌BL21中经1PTG诱导融合蛋白表达,并用镍离子交换树脂进行蛋白纯化;通过RNA水解实验验证hpRNase重组蛋白的活性。结果：经PCR、酶切、测序等方法鉴定,hpRNase cDNA正确克隆人pPROEX—HTb表达载体;IPTG可诱导载体表达分子量约20kD的蛋白产物,经Westerm blot验证可与抗hpRNase抗体发生特异性反应;经镍离子交换树脂纯化后的重组蛋白可有效降解RNA。结论：成功构建hpRNase原核表达载体,并获得有RNA降解活性的hpRNase重组蛋白,为进一步构建乳腺癌单链免疫毒素奠定了基础。     

虎杖提取工艺初探

对乙肝康君虎杖进行单方水提、复方水提及７０％醇提工艺比较，结果７０％醇提，总蒽酯提取率为９６．７％，大黄素提取率为９６．１％，但经回收酒精，浓缩，干燥后，总蒽酯保留率为６８．９％，大黄素保留率为６５．６％。     

MicroRNA-375表达对大肠癌细胞生物学特性的影响

目的:研究构建miRNA-375慢病毒表达载体并转染结直肠癌细胞,探讨其对结直肠癌细胞生物学特性的影响.方法:采用qRT-PCR法检测结直肠癌细胞株中miRNA-375表达水平.构建FUA-ZMCS-EF1-EGFP-miR-375/inhibitor慢病毒表达载体,建立稳定过表达miRNA-375及其抑制剂的HCT-116亚细胞系,体外观察细胞生长速度并绘制生长曲线,流式细胞仪检测细胞凋亡率,划痕实验检测miRNA-375对HCT-116细胞迁移能力的影响,Western blot法检测miRNA-375对细胞内ERK磷酸化水平的影响.结果:结直肠癌细胞株中miRNA-375低表达不但能促进细胞生长、抑制细胞凋亡,而且能促进细胞内ERK磷酸化水平、增加细胞迁移力和侵袭力.结论:结直肠癌miRNA-375发挥抑癌基因的作用,为miRNA-375在结直肠癌基因诊断及治疗中的应用提供了实验依据.     

退化细胞ZAP-70在慢性淋巴细胞白血病的表达及预后影响

  目的  探讨退化细胞、ZAP-70在慢性淋巴细胞白血病（CLL）患者外周血中的表达及其对预后的影响。  方法  利用光学显微镜观察退化细胞在92例CLL患者外周血涂片的检出率; 采用流式细胞术检测外周血淋巴细胞ZAP-70的阳性率。分析二者之间的相关性, 并观察这二项指标与疾病进展的关系。  结果  在92例CLL患者中, Binet A期28例（30.5%）, Binet B期44例（47.8%）, Binet C期20例（21.7%）。外周血涂片退化细胞百分比的中位数为19%（3%~48%）。取≥20%为阳性表达, 则退化细胞阳性56例（60.9%）; ZAP-70阳性32例（34.8%）。双因素直线相关分析提示二者呈负相关。退化细胞阴性患者临床预后差, 较阳性患者的8年无进展生存率（PFS）下降（59.4% vs. 86.0%, P < 0.05）, ZAP-70阳性患者较阴性患者的8年PFS也下降（57.8% vs. 79.5%, P < 0.05）; 退化细胞阴性伴ZAP-70阳性患者PFS更低（27.8%, P < 0.05）。  结论  退化细胞阴性和ZAP-70阳性提示CLL预后不良且二者密切相关。      

肌萎缩侧索硬化的临床诊治进展

肌萎缩侧索硬化（amyotrophic lateral sclerosis,ALS）是一种致死性神经系统变性疾病,主要累及锥体束、脑干和脊髓前角运动神经元,临床表现为进行性加重的肌肉萎缩、无力及延髓麻痹,最终因呼吸衰竭死亡。随着研究的深入,ALS除运动症状外,其非运动症状也越来越受到重视。尽管目前该病的诊断主要基于病史、临床表现和电生理,辅助检查仅作为协助排除临床表现相似的其他疾病,遗传学和生物标记物的研究进展为ALS的早期诊断、病理生理机制的揭示、疾病进展及预后的评估提供了客观的参考。虽然目前ALS的治疗药物并不能有效阻止疾病的进展,然而以基因修饰及干细胞移植为代表的新的治疗方法在未来的治疗中显示了巨大的应用前景。     

三味檀香水提液对大鼠离体主动脉环的作用

目的探讨三味檀香水提液(ESWTX)对离体大鼠主动脉环的舒张作用。方法采用离体大鼠主动脉环张力记录法,观察ESWTX对去甲肾上腺素(NE)、KCl引起的血管平滑肌收缩的影响。结果ESWTX能使NE、KCl收缩血管平滑肌的最大反应下降,作用机制与维拉帕米相似;对NE、KCl收缩达峰值的离体大鼠主动脉环有舒张作用;对NE引起的依赖于细胞内钙收缩有明显的抑制作用,而对外钙收缩的抑制作用比较弱。结论ESWTX的作用类似于维拉帕米,具有舒张血管平滑肌的作用,其机制可能与拮抗钙离子有关。     

“LBL、CBL、PBL、心智图”混合教学在中西医结合儿科学教学中的应用

目的　探讨“LBL、CBL、PBL、心智图”混合教学在中西医结合儿科学教学中的应用效果。方法　将175名中西医结合临床专业七年制学生分为实验组与对照组,实验组采用“LBL、CBL、PBL、心智图”混合教学,对照组采用“LBL+CBL”传统教学。比较两组理论知识成绩及教学满意度。采用SPSS 19.0进行t检验。结果　实验组学生对混合教学作出了高度评价,实验组在教学方法满意程度、激发学习兴趣、提升创新思维能力、提高临床诊疗思维能力、增强记忆方面明显优于对照组（P＜0.05）,且实验组学生在期末考试成绩方面显著高于对照组（P＜0.05）。结论　与传统教学相比,“LBL、CBL、PBL、心智图”混合教学模式能提高中西医结合儿科学的教学质量,可以在教学实践中进一步整合完善并运用。     

功能锻炼配合青鹏膏外用治疗轻度肩关节周围炎随机对照研究

目的：观察功能锻炼配合青鹏膏外用治疗轻度肩关节周围炎的疗效。方法：将200例轻度肩周炎患者,随机分为功能锻炼配合青鹏膏外用治疗组和单纯功能锻炼对照组各100例。治疗组在局部外用青鹏膏后,进行双手爬墙、挽背健手拉患手及前屈患手摸对侧耳朵锻炼,2次/d,每次以上3个锻炼动作各作10次,30d为1个疗程。对照组单纯进行锻炼,疗程同治疗组。采用肩关节周围炎疗效评定量表观察治疗前后2组患者的肩关节疼痛评分、肩关节日常活动评分及日常生活能力评分。结果：2组患者肩关节疼痛评分、肩关节活功能评分及日常生活能力评分治疗后均较治疗前提高,差异均有统计学意义（治疗组P〈0.01,对照组P〈0.05）,治疗后组间比较,治疗组较对照组提高更明显,差异亦具有统计学意义（肩关节疼痛评分P〈0.01,肩关节活动功能及日常生活能力评分P〈0.05）。结论：功能锻炼配合青鹏膏外用治疗轻度肩关节周围炎疗效显著。     

川芎嗪注射液对糖尿病视网膜病变眼血流动力学的影响

目的 探讨不同剂量川芎嗪注射液对糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)患眼血流动力学的影响.方法 将69例DR患者随机分成120 mg剂量组(36例)、240 mg剂量组(33例),静脉给药,每日1次,15d为1个疗程,间隔2周,共2个疗程,用药30 d.治疗前后采用彩色多普勒血流显像(color doppler flow imaging,CDFI)检测各组病例的眼视网膜中央动脉(central retinal artery,CRA),睫状后动脉(posterior ciliary artery,PCA)及眼动脉(ophthalmic artery,OA)的收缩期峰值血流速度(peak systolic velocity,PSV),舒张末 期血流速度(end diastolic velocity,EDV)和阻力指数(resistance index,RI),各项指标均测量三次取其平均值.结果 2组治疗后,CRA、PCA及OA的PSV、EDV增加,RI值降低,比较差异有统计学意义(P＜0.01);各指标组间比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).240 mg组中个别病例有不良反应发生.结论 2种剂量的川芎嗪注射液均能明显改善DR患者的眼部循环,并且效果接近,使用120 mg的剂量治疗DR更为安全、经济.     

HPLC测定不同煎法徐长卿中丹皮酚含量

目的：考察高压煎药机煎煮对徐长卿有效成分丹皮酚含量的影响。方法：以药材中标志性成分丹皮酚为定量指标,用HPLC分析两种煎法的含量。结果：高压煎药机煎出的溶液中有效成分未被破坏,且含量明显高于传统“后下”煎法。结论：徐长卿制备汤液时不必“后下”,应与其他药同煎20～30min。