PKA参与脊髓背角C-纤维诱发电位LTP的诱导和早期维持

目的: 探讨环一磷酸腺苷依赖的蛋白激酶 (PKA) 在脊髓背角C-纤维诱发电位长时程增强(LTP)的诱导和维持中的作用。方法:细胞外记录技术在脊髓腰膨大部记录背角浅层神经元C-纤维诱发电位。 结果:(1) 8-Br-cAMP诱发脊髓背角C-纤维诱发电位LTP,且8-Br-cAMP-诱导的 LTP 遮蔽强直刺激诱导的LTP。(2) PKA的选择性抑制剂Rp-CPT-cAMPS阻断C-纤维诱发电位LTP的诱导和时间依赖性翻转C-纤维诱发电位LTP。(3)蛋白质合成抑制剂茴香霉素彻底阻断8-Br-cAMP诱发的 LTP。(4)MAPK选择性抑制剂PD98059阻断8-Br-cAMP诱发的LTP。 结论:脊髓背角神经元存在PKA信号途径,并参与脊髓背角C-纤维诱发LTP的诱导和早期维持。     

PKC在成年大鼠脊髓背角C-纤维诱发电位长时程增强的诱导和维持中的作用

目的：探讨蛋白激酶C (PKC) 在大鼠脊髓背角C-纤维诱发电位长时程增强（LTP）的诱导和维持中的作用。方法： 细胞外记录技术在脊髓腰膨大部记录背角浅层神经元C-纤维诱发电位。 结果：(1) PKC的选择性抑制剂chelerythrine（200 μmol/L）或G 6983（100 μmol/L）对脊髓背角C-纤维诱发电位的基础电位没有影响，但可完全阻断脊髓背角LTP的诱导。(2) Chelerythrine或G 6983呈时间依赖性翻转脊髓背角LTP。在LTP 诱导后15 min，脊髓局部给予chelerythrine（200 μmol/L）后，LTP逐渐降低，于给药后70 min降至对照水平；而G 6983（100 μmol/L）产生同chelerythrine相似的效应，在用药后110 min，LTP降至对照水平。但同样浓度的chelerythrine或G 6983在LTP 诱导后3 h，均不能翻转业已建立的LTP。结论： PKC参与脊髓背角C-纤维诱发电位LTP的诱导和早期维持，而不影响晚期LTP的维持。     

人类精液中一氧化氮和尿酸含量检测的关系

目的探讨人精液中一氧化氮(N0)与尿酸含量的关系,对精了质量的影响。方法参照WHO标准方法,进行精液常规分析,按精子密度、活动率不同分为(正常、<20、20~40、>40)4个组。采用镀铜镉还原荧光法检测NO代谢产物硝酸盐(NO3-)。采用尿酸酶一过氧化物酶偶联法检测精液尿酸含量。结果70例不育组精液中尿酸含量和NO含量为(236.4±47.8)μmol/L、(78.7±1.6)μmol/L与正常生育组(398.6±52.3)μmol/L、(41.84±1.6)μmol/L呈显著性差异(P<0.01)。将尿酸含量与NO含量进行相关性分析,两者呈显著性负相关(r=-0.96,P<0.05)。不育各精子密度和活动率组精液尿酸含量随精子密度及活动率增加而上升,N0含量随之下降(P<0.01),结论精液尿酸含量测定可作为评价精子受活性氧损害的重要指标,证明尿酸对活性氧尤其在医学领域极为重视的NO损害精子具有保护性作用。     

纤维蛋白原Bβ链基因-1420G/A、-993C/T和-854G/A多态性与冠状动脉粥样硬化性心脏病的关联研究

目的调查健康人和冠状动脉粥样硬化性心脏病(简称冠心病)患者的纤维蛋白原B(fibrino-genB,FGB)β基因-1420G/A、-993C/T和-854G/A的基因多态性频率分布,以及与血浆Fg水平的关系。方法应用等位基因特异性PCR扩增技术和限制性片段长度多态性技术对186例冠心病患者和149名健康对照者进行分析。比浊法测定血浆Fg浓度。结果等位基因频率-1420A在冠心病组为0.33,在对照组为0.26,冠心病组明显比对照组升高,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。等位基因频率-993T和-854A在两组之间无差别。Logistic回归分析显示β-1420G/A与冠心病相关(OR=1.922,P=0.003)。冠心病组血浆Fg水平(3.87±1.75)g/L较健康人组(3.10±0.77)g/L明显升高,且差异有统计学意义(P<0·05)。结论纤维蛋白原Bβ-1420G/A可能与冠心病发病相关联。     

启动子区5′CpG岛去甲基化对人结肠癌细胞生物学表型的影响

目的：探讨DNA启动子区5′CpG岛甲基化状态与人结肠癌RKO细胞增殖凋亡等生物学特征的关系。方法： 应用特异性DNA甲基转移酶（DNMTs）抑制剂-5-氮-2′-脱氧胞苷（5-Aza-2′-deoxycytidine，5-Aza-CdR）处理肠癌RKO细胞72 h，甲基化特异性PCR（methylation-specific PCR,MSP）及DNA测序法分析p16/CDKN2基因CpG岛甲基化状态；MTT、FCM、荧光染色及透射电镜检测启动子区去甲基化后细胞生长、形态和细胞周期凋亡的影响。 结果： DNMTs抑制剂能较好地逆转启动子区胞嘧啶甲基化状态；CpG岛去甲基化后能明显地抑制肠癌细胞的生长，增加细胞群体倍增时间（P<0.01），诱导肠癌细胞凋亡，影响肠癌细胞周期分布，并具有良好的量效依赖关系。 结论： 通过逆转CpG岛高甲基化能有效地抑制肠癌细胞增殖，为临床治疗大肠癌提供新的作用靶点。     

海生素对K562细胞生长及凋亡基因表达的影响

目的 探讨海生素对白血病K562细胞生长及凋亡基因表达的影响. 方法实验分为对照组、10mg/L海生素组和20rag/L海生素组.采用流式细胞术(FcM)、四唑蓝(MTT)和免疫细胞化学法测定海生素对K562细胞周期、细胞生长及细胞凋亡基因bcl-2和bax表达的影响. 结果海生素浓度为10mg/L和20mg/L时,可阻止K562细胞周期于G1/S期;海生素浓度为20mg/L时对K562细胞有抑制作用,在此浓度下随时间的延长细胞存活率有下降趋势;海生素浓度为20mg/L和40mg,L时,可下调凋亡抑制基因bcl-2的表达,上调凋亡促进基因hax的表达.结论 海生素可明显抑制K562细胞的增殖,使其阻滞于细胞周期的G1/S期;海生素还通过减少bcl-2的表达及增加bax的表达从而促进K562细胞的凋亡.     

用分子克隆技术构建D12S391基因座等位基因分型标准物及群体遗传学研究

目的 解决长期困扰短串联重复序列（short tandem repeat,STR）分型上存在的准确性和标准化问题。方法 先用PCR扩增出D12S391基因座的9个等位基因片段，将其插入pUC重组质粒中，经DNA测序分析证实插入片段的结构及大小，用国际标准将插入的等位基因片段进行命名，最后经转染、扩大培养、扩增及再鉴定后，制备出标准的D12S391等位基因分型标准物。结果 应用此法制备出大量的D12S391基因座等位基因分型标准物，并将其用于调查该基因座在德国Mainz地区、日本Miyazaki地区及中国成都汉族、北京汉族、新疆维吾尔族和甘肃回族6个群体中的基因型分布频率。D12S391基因座在各群体中均有较高的多态性，其非父排除概念及个人识别能力分别为0.609-0.786和0.940-0.952。结论 该法制备的STR基因座等位基因分型标准物在法医科学实践中应用价值极高，D12S391基因座是一个非常适合于群体遗传学研究和法医科学应用的遗传标记。     

基于经验模式分解的心电特征提取算法

本研究应用基于经验模式分解的心电特征提取方法,利用第一本征模函数(intrinsic mode function,IMF)分量对QRS波进行定位,并通过减少分解层数、筛选次数、处理区域等策略实现了快速算法。利用MIT-BIT心律失常数据库的数据进行算法测试,取得较高的检测率,检测速度也有明显提高。实验结果表明,经验模式分解算法在QRS波定位中具有相当的优越性,临床应用中取得了良好的检测效果。     

Comparison of the unlabeled and labeled pre-mRNA splicing assays in vitro

Pre-mRNA splicing is a fundamental process required for the expression of most metazoan genes. It is carried out by the spliceosome that catalyzes the removal of non-coding intron sequences to ligate exons into mature mRNA prior to transport and translation. The purpose of our study is to explore whether the in vitro unlabeled pre-mRNA splicing assay could be performed as an alternative method of splicing reaction other than the radiolabeled one. Two different splicing methods in vitro , P labeled and unlabeled pre-mRNA as the substrates in the reaction, were investigated. The radiolabeled products were visualized by autoradiography while the unlabeled products were observed by Ethidium Bromide (EB) staining. As a result, although there are more unspecific bands in the EB staining assay than 32P labeled one, the RNA products of in vitro splicing could be observed clearly. This suggests that the unlabeled pre-mRNA splicing assay can be an optional substitution for the isotope-labeled assay.     

不同低温保护剂对皮肤组织β1整合素表达影响的比较

目的比较两种不同低温保护剂对皮肤组织β1 integrin低温保存后表达的影响，为寻求皮肤组织低温保护剂的最佳配方提供试验依据。方法获取新鲜成人皮肤组织分为3组．新鲜对照组、海藻糖／二甲基亚砜（T／D）组、二甲基亚砜／丙二醇（D／P）作为低温保护剂保存组，-196℃液氮冻存7d、14d复温，免疫组织化学染色对各组间皮肤进行比较。并在此基础上，进一步采用RT-PCR方法对不同低温保护剂保存后皮肤的β1 integrin基因水平进行了深入的研究。结果通过光镜图象观察和基因水平分析结果说明，0．5M海藻糖／二甲基亚砜能够很好保护皮肤组织，β1 integrin的基因表达量与新鲜皮肤组相似。结论海藻糖与二甲基亚砜联合应用对皮肤组织β1 integrin的保护作用优于传统组。