抗纤维化短肽对血清诱导的心脏成纤维细胞增殖和胶原合成与I、III型胶原表达抑制作用的实验研究

①目的探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对不同浓度血清(FBS)诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖和胶原合成的调节作用。②方法选用新生大鼠心脏成纤维细胞;采用3H-TdR掺入法检测心脏成纤维细胞的增殖;采用3H-脯氨酸掺入法检测心脏成纤维细胞胶原的合成,采用westernblot法检测心脏成纤维细胞I型与III型胶原的表达。③结果在0.4%、2%和10%几种血清浓度的条件下,随着血清浓度的增加,反映心脏成纤维细胞增殖3H-TdR掺入量和胶原合成的3H-脯氨酸掺入量增加。表明一定浓度的血清能诱导心脏成纤维细胞增殖和胶原合成。与0.4%血清的基础培养条件相比较,10%高浓度血清能刺激心脏成纤维细胞I、III型胶原蛋白的表达。在10-10~10-8mol/L浓度范围内,AcSDKP对10%诱导的心脏成纤维细胞增殖和胶原合成有抑制作用,并且在10-9mol/L时,AcSDKP对心脏成纤维细胞增殖、胶原合成抑制作用最强。同时10-9mol/L的AcSDKP对心脏成纤维细胞I、III型胶原蛋白的表达也有明显的抑制作用。④结论AcSDKP对血清介导的心脏成纤维细胞增殖、胶原合成以及I、III型胶原蛋...     

脑缺血预处理对大鼠海马CA1区肌细胞促进因子2C磷酸化水平的影响

目的　观察大鼠全脑缺血预处理后不同时间点海马CA1区肌细胞促进因子（Myocyte　enhancer　factor，MEF）2C磷酸化（激活）的变化规律。方法　建立Sprague—Dawley大鼠四动脉结扎全脑缺血模型，大鼠随机分成二组，对照组（sham组）和实验组（脑缺血预处理组）。采用免疫印迹法和免疫组织化学方法检测实验组MEF2C磷酸化水平。结果　全脑缺血预处理（3min）48h后再次严重缺血6rain，复灌6h、1d、3d、5d海马CA1区MEF2C激活均高于对照组，3d迭到最高峰。免疫组织化学结果显示，预处理后的1d磷酸化的MEF2C主要分布在细胞核。结论　海马CA1区MEF2C磷酸化水平的升高可能参与了脑缺血耐受保护机制的形成。     

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸对人肺泡Ⅱ型上皮细胞向肌成纤维细胞转化的调节作用

目的:探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(Ac-SDKP)是否通过对转化生长因子-β1(TGF-β1)介导的ROCK/SRF/α-SMA信号转导通路活化的调节,阻抑肺泡Ⅱ型上皮细胞向间质细胞转化,即上皮-间质转化(EMT),进而发挥其抗(矽)肺纤维化的作用.方法:培养人A549肺泡Ⅱ型上皮细胞株,免疫细胞化学显色检测角蛋白、波形蛋白及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;免疫印迹检测E-钙黏蛋白(E-cad)、波形蛋白及Rho相关卷曲蛋白激酶(ROCK)、血清反应因子(SRF)、α-SMA及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达;Real-Time PCR检测ROCK、SRF、α-SMA的表达情况.结果:在TGF-β1的诱导下,上皮细胞向肌成纤维细胞的形态改变,伴随着上皮标志物角蛋白、E-cad降低,而间质细胞标志物波形蛋白增高,α-SMA表达并增多.与对照组相比,TGF-β1诱导刺激组ROCK、SRF、α-SMA蛋白和基因表达水平上调,Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达上调.给予ROCK阻滞剂Y-27632、Ac-SDKP干预后,ROCK、SRF、α-SMA及Ⅰ型、Ⅲ型胶原表达显著降低.结论:Ac-SDKP通过阻断TGF-β1介导的ROCK/SRF/α-SMA信号转导通路,阻抑肺泡Ⅱ型上皮细胞向肌成纤维细胞的转化及胶原的合成,进而发挥其抗(矽)肺纤维化的作用.     

联合应用甘露醇、单唾液酸神经节苷脂对脑出血致脑水肿的效果观察

目的:分析观察联合应用甘露醇、单唾液酸神经节苷脂对脑出血致脑水肿的效果。方法:选取2017年2月-2018年2月在我院接受治疗的88例脑出血致脑水肿的患者作为本次的研究对象,把患者随机分为实验组与对照组,每组各44人,对照组采用甘露醇治疗,实验组采用甘露醇与单唾液酸神经节苷脂联合治疗,就比较分析两组患者的治疗效果。结果:治疗前两组患者的NIHSS(神经功能缺损)评分与ADL(生活质量评分)比较无差异,P0.05,治疗后实验组患者的NIHSS评分以及ADL评分明显优于对照组,P0.05;治疗后实验组患者水肿以及血肿量明显比对照组要小,P0.05。结论:对脑出血致脑水肿患者实行甘露醇与单唾液酸神经节苷脂联合治疗,能够提高患者的神经功能与生活质量,减轻水肿、血肿的现象,值得推广。     

P38/caspase-3介导的MEF2C信号通路参与大鼠脑缺血再灌注损伤

目的观察大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区肌细胞促进因子(MEF)2C磷酸化(激活)和蛋白水平的变化规律,并探讨其可能的分子机制。方法采用SD大鼠四动脉结扎模型,用免疫印迹法检测蛋白表达,给药组大鼠在缺血前20min脑室给药。结果脑缺血再灌注可诱导MEF2C激活,6h达高峰;其蛋白表达在再灌后期(3～5d)明显下降。Caspase-3蛋白和激活的caspase-3(17ku)水平在再灌后期均显著增加;Caspase-3特异性抑制剂Ac-DEVD-CHO可明显阻止再灌3d的MEF2C蛋白表达降低。P38激酶抑制剂SB202190不但抑制再灌注6h的MEF2C激活,而且也降低了再灌注3d的caspase-3激活;但胞外信号调节激酶(ERK)5的反义寡核苷酸未显著影响MEF2C的磷酸化水平。结论P38/caspase-3依赖的MEF2C信号通路可能参与了大鼠脑缺血再灌注诱发的神经元凋亡过程。     

间接免疫荧光法检验抗ds-DNA抗体方法

ＡＮＡ泛指抗各种核成分抗体 ,无器官和种属特异性 ,血清滴度≥ 1∶80可作为诊断ＳＬＥ标准之一。而ＡＮＡ中的抗ｄｓ-ＤＮＡ抗体具有特征性 ,是诊断ＳＬＥ、监测其活动和判断预后的重要指标。本文报告我室的检测方法如下。1　实验材料① 0 .0 1ｍｏｌ/ＬｐＨ 7.2～ 7.4磷酸盐缓冲液 (ＰＢＳ) ;②0 .1ｍｏｌ/Ｌ磷酸盐缓冲甘油 ;③小白鼠 (昆明种ＫＭ ) ;④ 0 .1Ｎ盐酸 ;⑤ＧＡＨ -ＩｇＧ -ＦＩＴＣ应用液用ＰＢＳ 1∶5 0 0稀释 ;⑥荧光显微镜。2　抗原片制备①取小白鼠直接断颈放血杀死 ,取出肝脏 ,去胆囊。用ＰＢＳ冲去肝表面的血等杂物 ,…     

经肛门局部切除术治疗Ⅰ期低位直肠癌

目的 探讨Ⅰ期低位直肠癌局部切除术临床应用的合理性.方法 回顾性分析93例Ⅰ期(T1-2N0M0)低位直肠癌患者的资料.按手术方式不同分为:局部切除术组(45例)和根治术组(48例).局部切除术组均行经肛门局部切除术,术后T1期(24例)行辅助放疗,T2期(21例)行辅助放、化疗.根治术组(T1期18例,T2期30例)均行根治术(行腹会阴联合切除术42例,低位前切除术6例),术后未行放、化疗.所有患者均随访5年以上.对两组患者的生存率、复发率、并发症发生率进行比较分析.结果 (1)局部切除术组和根治术组5年生存率T1期均为100%(24/24,18/18),T2期分别为86%(18/21)和93%(28/30),两组比较差异无统计学意义(P＞0.05).(2)局部切除术组和根治术组5年复发率T1期分别为4%(1/24)和0(0/18),T2期分别为19%(4/21)和7%(2/30),两组比较差异无统计学意义(P＞0.05).(3)局部切除术组并发症发生率为2%(1/45),根治术组为15%(7/48),前者显著低于后者(P＜0.05).结论 对于Ⅰ期低位直肠癌,经肛门局部切除术联合术后放、化疗可获得与根治术相近的5年生存率,是一种合理的治疗方式.     

Ac-SDKP对ROCK通路介导矽肺大鼠肌成纤维细胞分化抑制作用

目的 探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(Ac-SDKP)对Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)通路介导的肌成纤维细胞分化的抑制作用.方法 无特定病原体级建康成年雄性Wistar大鼠120只随机分为对照组(支气管灌注1 ml灭菌生理氯化钠溶液)、矽肺模型组[支气管灌注质量浓度为50 g/L二氧化硅(SiO2)1 ml]、Ac-SDKP前处理组(支气管灌注质量浓度为50 g/L SiO2 1 ml,灌注前给予Ac-SDKP),分别于染尘后1、2、4、8周处死(每亚组10只).采用免疫组织化学法检测肺组织内α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的分布与表达,免疫印迹法检测肺组织内转化生长因子-β1 (TGF-β1)、ROCK、血清反应因子(SRF)、α-SMA以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的表达.结果 与对照组比较,矽肺模型组大鼠肺组织内TGF-β1、ROCK、SRF、α-SMA以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达均增加(P＜0.05),并具有一定时间依赖性.与矽肺模型组比较,Ac-SDKP前处理4、8周组,大鼠肺组织内TGF-β1、ROCK、SRF、α-SMA以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达均降低(P＜0.05).结论 Ac-SDKP能够通过对TGF-β1介导的ROCK信号转导通路的调控,阻抑矽肺大鼠肌成纤维细胞的分化.     

低剂量木黄酮降低缺血后神经元损伤并改善学习记忆功能

目的探讨染料木黄酮(GEN)对全脑缺血(GCI)大鼠海马CA1区神经元的神经保护作用及其可能的机制。方法建立大鼠4动脉结扎全脑缺血模型,实验动物随机分为假手术组(sham)、缺血再灌注组(I/R)、GEN处理组、ICI 182,780组和溶剂对照组。采用Fluoro-Jade B和神经元特异性核蛋白(NeuN)染色观察海马CA1区神经元存活情况,TUNEL技术观察海马CA1区神经元的凋亡。Morris水迷宫观察大鼠的空间学习和记忆功能。结果 GEN发挥神经保护作用的最佳剂量为1.0 mg/kg;与sham组相比,I/R组和溶剂对照组海马CA1区TUNEL阳性神经元数量显著增多(P0.01),而1.0 mg/kg GEN可显著降低缺血后TUNEL阳性神经元数量(P0.01);与I/R组相比,GEN能明显改善缺血后大鼠的空间学习和记忆能力。缺血前侧脑室给予ICI 182,780可显著降低GEN的神经保护作用(P0.01)。结论低剂量(1.0mg/kg)GEN可显著降低缺血后大鼠海马CA1区神经元损伤,改善认知功能,其分子机制可能与雌激素受体活性密切相关。