小鼠胎肝基质细胞高活性造血刺激因子的纯化及性能研究

对我室克隆的小鼠胎肝基质细胞林(MFLSC株)的无血清培养上清中的造血活性物质进行了初步纯化。通过离子交换层析和凝胶过滤层析两步分离,从中得到一高活性的造血刺激因子,称为基质细胞造血刺激因子-1(SHF-1)。经凝胶过滤及电泳结果估测,此因子是分子量约为70kD的单体蛋白,耐碱,较耐热。在体外它对小鼠骨髓粒系、红系祖细胞、多向祖细胞及多能造血干细胞均有刺激作用。     

水母雪莲细胞培养物调血脂作用的研究

背景:鉴于野生水母雪莲濒临灭绝,军事医学科学院建立了一种人工培养水母雪莲的方法。目的:探讨水母雪莲细胞培养物对高脂大鼠的调血脂作用。设计:完全随机设计,对照实验研究。单位:由解放军总医院心内科和军事医学科学院生物工程研究所合作。材料:实验于2003-03/06在解放军总医院医学实验动物中心完成。实验动物由解放军总医院实验动物中心提供。雄性SD大鼠64只,体质量200～220g,随机分为4组,每组16只:正常对照组、高脂模型组、高剂量组和低剂量组。干预:正常对照组仅喂基础饲料,高脂模型组喂高脂饲料,高剂量组喂高脂饲料的同时饲以水母雪莲细胞培养物500mg/Kg,低剂量组喂高脂饲料的同时饲以水母雪莲细胞培养物50mg/Kg。给药1次/d,3周后采血,测定血脂水平及肝肾功能。主要观察指标:各组间血脂水平差异及肝肾功能变化。结果:高剂量组胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白水平低于高脂模型组犤(2.66±0.51)mmol/L,(3.23±0.57)mmol/L,P=0.030;(1.59±0.77)mmol/L,(2.48±0.83)mmol/L,P=0.023;(1.68±0.31)mmol/L,(2.07±0.43)mmol/L,P=0.032犦。高剂量组高密度脂蛋白水平高于高脂模型组犤(0.98±0.29)mmol/L,(0.66±0.37)mmol/L,P=0.045犦。各组间肝肾功能差异无显著性意义(P>0.05)。结论:水母雪莲细胞培养物对     

白细胞介素9

白细胞介素9(IL-9)是一种由激活的辅助性T细胞分泌的细胞因子。最早由Uytten-hove等从激活的小鼠Th细胞系TUC2.15培养上清中分离出来的。它能在无抗原及IL-2和IL-4情况下刺激TUC 2.15细胞增殖,根据其分于量初步命名为P40。1989年,Yang等表达了P40在人类中的同源因子,统一命名为白细胞介素9。现已发现其在造血调控,免疫应答和肿瘤发生等生理及病理生理过程中起的作用,引起人们的重视。     

荧光探针法测定血浆中硫代寡核苷酸PS20的方法初探

目的为解决快速定量测定血浆中硫代寡核苷酸的问题。方法以一个全程硫代修饰的寡核苷酸,PS20为模型序列,用去离子水溶解PS20标准品,通过核酸蛋白分析仪定量,采用猕猴血浆稀释得到7个浓度梯度的血浆样品,再与稀释200倍的Oli-green荧光素Tris-EDTA缓冲液等体积混合。采用荧光高效液相色谱检测含不同浓度PS20的血浆样品。结果采用20μL体系,所测血浆样品的积分面积和PS20浓度在50~2500μg.L-1范围内呈良好线性关系,线性相关系数均大于0.997。对方法学的确证表明,荧光素法的线性范围、灵敏度、特异性、精密度和准确度均满足生物分析方法的要求,已经采用该方法成功的测定了PS20在猕猴血浆中的浓度,可以准确定量。结论荧光探针法可以快速定量血浆中硫代寡核苷酸的浓度,满足药代动力学研究的要求。     

重组人肝再生增强因子对实验性肝纤维化I、Ⅲ型胶原基因表达的影响

目的了解重组人肝再生增强因子对实验性肝纤维化Ⅰ、Ⅲ型胶原基因表达的影响.方法建立CCl4中毒性及人血白蛋白免疫损伤性2种大鼠肝纤维化模型,在造模的同时给予不同剂量的重组人肝再生增强因子(hALR).在不同的时间点留取大鼠肝组织标本,提取总RNA,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定Ⅰ、Ⅲ型胶原的基因表达水平.结果在两种模型中hALR低剂量组大鼠肝组织Ⅰ型胶原(CCl4模型2、4、6、8周分别为1.71±0.26、3.42±0.67、3.76±0.43、3.33±0.69;人血白蛋白模型尾静脉攻击中、攻击后分别为3.86±0.66、2.98±0.40),Ⅲ型胶原(CCl4模型2、4、6、8周分别为0.97±0.16、2.03±0.32、1.86±0.33、1.66±0.23;人血白蛋白模型尾静脉攻击中、攻击后分别为2.63±0 34、2.02±0.32)的基因表达水平在模型形成的不同阶段均明显低于模型组;高剂量hALR组大鼠肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原的基因表达水平均明显低于低剂量组.结论重组人肝再生增强因子可能有抑制大鼠实验性肝纤维化Ⅰ、Ⅲ型胶原基因表达的作用.     

红色糖多孢菌A226-ΔeryCⅢ突变体的构建及产物分析

目的构建红色糖多孢菌糖基转移酶EryCⅢ失活突变体,为探索红霉素糖基结构修饰和合成新型红霉素衍生物打下基础。方法通过PCR扩增方法将eryCⅢ基因缺失130bp后,克隆至同源重组型质粒pWHM3上,构建pWHM3-ΔeryCⅢ,将其导入红色糖多孢菌A226中。经过两次同源重组,筛选出1株缺失EryCⅢ酶活性的红色糖多孢菌A226-ΔeryCⅢ突变体。使用抑菌实验、薄层层析和质谱对其发酵产物进行分析,并通过回补实验进一步验证。结果与结论对红色糖多孢菌A226-ΔeryCⅢ染色体序列测定表明,eryCⅢ基因相应位点缺失130bp,突变菌株发酵产物对枯草芽孢杆菌无抑制作用,薄层和质谱结果表明突变菌株积累3-L-mycarose红霉内酯B（MEB）,而并没有发现红霉素产物。回补验证发现eryCⅢ基因导入A226-ΔeryCⅢ使得其恢复了红霉素合成能力。所构建的红色糖多孢菌EryCⅢ失活突变体A226-ΔeryCⅢ,为探讨组合合成红霉素衍生物奠定基础。     

重组人proEMAP Ⅱ/p43蛋白N端和C端结构域的构建及活性鉴定

目的构建表达重组人proEMAPⅡ蛋白N端（p43N）及C端（p43C）结构域,并进行活性鉴定。方法分别在大肠杆菌中表达p43N及p43C蛋白,并纯化获得目的蛋白;利用血管内皮细胞管腔形成实验及细胞迁移实验进行活性鉴定,并比较等摩尔浓度下,p43蛋白、p43N、p43C及p43N＋p43C的活性差异。结果 p43N及p43C均具有抑制内皮细胞管腔形成和迁移的活性,在等摩尔浓度条件下,p43蛋白的生物活性高于p43N和p43C,p43N活性最弱,但p43N和p43C共同作用时,抑制活性高于单独作用。结论获得具有生物活性的p43N及p43C蛋白,为进一步确定p43N作用机制及其与p43C相互关系奠定了基础。     

重组人proEMAPⅡ/p43体外抑制新生血管生成活性方法的建立

目的建立proEMAPⅡ/p43蛋白体外检测抑制新生血管生成活性的方法。方法利用内皮细胞增殖实验、细胞周期实验、细胞迁移实验、管腔形成实验、鸡胚绒毛尿囊膜实验等体外检测血管生成的模型,研究p43蛋白抑制血管生成的活性。结果 p43蛋白能明显抑制内皮细胞迁移和管腔形成,但对内皮细胞增殖和细胞周期没有明显的量效关系。结论最终选用细胞迁移实验和管腔形成实验作为主要活性检测方法,细胞迁移实验作为p43蛋白活性的定量检测方法,迁移抑制率作为活性高低的评价标准,管腔形成实验用于p43蛋白活性的定性研究。     

抗人脑神经元特异性烯醇化酶(NSE)单克隆抗体杂交瘤细胞株Ly-1的建立

神经元特异性烯醇化酶,简称NSE,是肺小细胞癌(SCLC)和儿童神经母细胞瘤高特异性的血清学标志物。NSE可用来鉴别SCLC和非小细胞癌(NSCLC),评价治疗反应,预报复发。做为一个十分有用的肿瘤标志,NSE已被用于临床病例分析。我们自人脑分离纯化出高纯度NSE抗原,免疫BA-     

用噬菌体展示六肽库筛选与G—CSF具有结合活性的小分子多肽

目的 筛选人与重组G－CSF分子有结合活性的小分子多肽。方法 将靶分子G－CSF固定在塑料平皿上,对随机噬菌体六肽库进行3轮筛选。经孵育、洗脱、扩大培养和ELISA分析,随机挑取出第3轮得到的4个阳性克隆测序,然后进行同源性比较。结果 找到1个保守性肽段序列模式“SXXRVX”,此模式在人和小鼠的受体中都未见到其同源序列。结论 此小肽可与G－CSF结合,故有一定程度上有可能抑制G－CSF与受体的结合,为临床治疗炎症反应和研究G－CSF与受体相互作用的机制提供了一定的帮助。