山东省恙虫病立克次体的首次分离和初步鉴定

作者等继1986年首次证实山东省恙虫病流行之后,于1987年9～11月间,在流行区进行了病原分离.用小鼠分别自小盾纤恙螨(Leptotrombidium(L) scutellarae)、黑线姬鼠(Apodemus agrarius)以及恙虫病患者血液分离出8株恙虫病立克次体,分离阳性率分别为10、25和50%.所有分离物感染小鼠的肝脾均有3～5倍的扩大,其中3株仅血清抗体阳性而小鼠不发病;5株可使小鼠有规律地发病,并可以从病鼠组织中查见立克次体颗粒,但毒力有区别,其中3株症状不典型、发病晚,有2株感染小鼠接种后5～12天发病,症状典型,7～15天部分小鼠死亡(25～75%).用酶标染色法进行血清学鉴定,结果表明.分离株与普氏立克次体(E株)、Q热立克次体(06株)和斑点热立克次体(246株)无任何交叉反应,而与恙虫病立克次体(Gilliam株)呈阳性反应.初步认为,自山东分离的恙虫病立克次体可能是与Gilliam同一血清型.但山东恙虫病为秋冬型.     

重组人尿型纤溶酶原激活剂规模生产中纯化过程的质量控制

尿型纤溶酶原激活剂(u-PA)是一种高效、出血副作用和再阻率低的溶栓制剂,由于在溶液中不稳定,在纤溶酶、激肽释放酶、胰酶及理化因素影响下,容易从158Lye-159Ile处断裂成双链,故u-PA有包括单链和双链两种形态.u-PA的国外临床用量最大剂量可达80 mg,因此对产品的质量提出更高的要求.为了保证产品的最终质量,必须在生产过程中加以严格控制,以确保产品的安全有效.我们对u-PA中试生产中纯化阶段的质量控制进行了研究,包括:蛋白含量、活性测定、活性回收率及比活计算、单双链比例测定、纯度分析几项指标的控制,以保证产品的质量.     

四株斑点热群立克次体DNA同源性的初步研究

用缺口翻译法将斑点热群立克次体西伯利亚 246 株 DNA 和康氏 Simko株DNA标记~(32)P。分别与中国分离株黑龙江 054株和新疆精河株 DNA进行斑点杂交,以对国内两分离株基因组与北亚、康氏基因组同源性进行初步研究。结果显示,新疆精河株 DNA与西伯利亚246株DNA高度同源。与血清分类实验结果相吻合。黑龙江 054株DNA 与西伯利亚 246株 DNA和康氏 Simko 株 DNA的杂交阳性最低稀释度均低于阳性对照100倍以上。提示054株基因组与西伯利亚立克次体、康氏立克次体 Simko 株基因组存在较明显之差别。     

立克次体斑点法酶标染色法的研究

改进后的微量立克次体酶标染色法,每张玻载片由原来的44个抗原点增至704或更多个抗原点,可同时比较鉴定或检验较大量的立克次体毒种或临床血清标本,省时省工省料,其敏感性和特异性比微量免疫荧光染色法低。本方法用粗制抗原即可得满意结果,而不需特殊设备,如荧光显微镜等,易在基层实验室推广。     

非糖基化尿激酶原的研究

目的：构建一种非糖基化、抗凝血酶激活的尿激酶原突变体，并观察其表达及活性情况。方法：使用PCR扩增的方法，将302位天冬酰胺（Asn302）突变为丙氨酸（Ala302），去掉糖基化位点；将156位精氨酸（Arg156）突变为赖氨酸（Lys156），去掉凝血酶作用位点。将突变体基因转染到哺乳动物细胞中。收取无血清培养上清．并用纤维蛋白板溶解圈法鉴定活性。结果：PCR产物经琼脂糖电泳鉴定分子质量略大于1200bp，与理论分子质量1296bp基本符合。转染成功的细胞株用于扩大培养。纤维蛋白板溶解圈法测定上清活性为295．58IU／mL。结论：非糖基化、抗凝血酶的尿激酶原突变体构建成功。转染后细胞生长良好，表达水平较高。     

中国北方斑点热群立克次体病原学和分子流行病学研究

斑点热是由斑点热群立克次体引起的一系列疾病的总称,包括:落矶山斑点热、钮扣热、北亚热、昆士兰热、立克次体痘和日本红斑热。该病是自然疫源性疾病,人群易感性高且难于消灭。随着资源开发、人们社会实践活动的增加及旅游事业的发展,斑点热在西方和欧洲发病率逐年增高。据报道,美国落矶山斑点热的年发病率为5％,欧洲钮     

国产基因重组人尿激酶型原(Pro-urokinase/u-PA)I期临床安全性、耐受性研究

目的对国内研制的注射用基因重组人尿激酶型纤溶酶原激活剂(pro-urokinase,u-PA)进行I期临床试验,以评价其用于中国健康成人受试者的安全性和耐受性.方法试验日期;健康受试者2 3例(男11例,女12例),随机分为5,20,35mg和50mg四个剂量组.静脉给药其中1/4剂量在1min内静脉推注,其余3/4剂量在60min内静脉滴注完毕.给药前和给药后2,24h取外周血测定血液生化指标、凝血和纤溶指标,并随时观察受试者的全身状态和可能出现的药物不良反应.结果全部受试者用药前后的血压,心率/律、呼吸等重要生命体征未见异常变化;血、尿常规、肝肾功能,电解质、空腹血糖等亦未见明显变化.与溶栓有关的血液学指标(活化的部分凝血活酶时间,凝血酶原时间,凝血酶原活动度,纤维蛋白原,α2-抗纤溶酶和纤维蛋白降解产物),在部分受试者有改变,但变化均在正常范围内、且与剂量无明显相关,无明确临床意义.全部受试者注射药物的局部皮肤,无刺激性炎症和皮下淤血、出血等变化.结论中国健康成人受试者对于上述剂量的基因重组人尿型纤溶酶原激活剂的安全性及耐受性良好.     

不同立克次体DNA的G+Cmol%含量分析

本文以普氏斑疹伤寒立克次体和斑点热立克次体为参照,对我国斑点热立克次体分离株的代表株 DNA 的 G+C mol%含量进行了分析比较,结果指出,斑疹伤寒群与斑点热群立克次体的 G+C mol%含量不同,分别为29.1和32.05;国内分离的精河株和内-01株分别为32.7和32.4,与参照的斑点热立克次体 Barbash 株(32.5)基本一致,054株的 G+C mol%是30.6,低于斑点热群的 G+C mol%数值,高于斑疹伤寒群的含量,揭示了该株 DNA 的 G+C 含量的特殊性,这是否意味着054株的特殊分类地位或是否是新种有待深入研究。     

StreamlineSP扩张柱层析在重组人尿型纤溶酶原激活剂中试生产中的应用

尿型纤溶酶原激活剂 (ｕｒｉｎａｒｙｔｙｐｅｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎａｃｔｉｖａｔｏｒ,ｕ ＰＡ)包括单链型和双链型两种形态 ,以单链形态为主的ｕ ＰＡ具有很好的选择性溶血栓作用。1985年 ,Ｈｏｍｅｓ等在大肠杆菌中获得了ｕ ＰＡ的表达并纯化[1] 。近几年 ,用哺乳动物细胞表达糖基化ｕ ＰＡ取得了很大进展[2 ,3] 。本实验室成功地建立了工艺简便、效率高的重组人ｕ ＰＡ的中试生产纯化工艺。工程细胞表达的ｕ ＰＡ ,经阳离子交换层析、亲和层析和凝胶过滤层析 ,纯度大于 95% ,年生产量大于 50ｇ ,收率大于 6 0 %。目前 ,还未见到优于此…