西昌市虫媒病毒核酸检测及其序列分析

目的了解四川省西昌市蚊虫样本中虫媒病毒的流行情况, 丰富四川省西南部地区虫媒病毒的活动规律和病毒遗传特征的研究数据。方法 2018年6月对采集自西昌市3个村不同猪圈环境中的三带喙库蚊提取核酸, 使用云南环状病毒属、版纳病毒属、西藏环状病毒属(S7、S10)、黄病毒属、甲病毒属的特异性引物进行PCR检测, 对阳性产物克隆测序并进行序列分析。结果共采集到蚊虫9 012只, 其中三带喙库蚊为优势蚊种, 对采集到的三带喙库蚊分88批次进行扩增, 分别检测出2株乙型脑炎病毒(JEV)、7株版纳病毒(BAV)、7株西藏环状病毒(TIBOV)和1株云南环状病毒(YOUV), 序列分析结果显示, 17株新检测病毒株均与云南分离株遗传关系接近, 2株JEV位于GⅠ-b进化支;7株BAV为A2进化分支;7株TIBOV中, 6株位于同一进化支;1株TOUV与云南分离株在同一进化支。结论西昌市的三带喙库蚊中存在携带JEV、BAV、YOUV及TIBOV等病毒的可能, 其中JEV为GⅠ-b型病毒, BAV为A2型, 为西昌市虫媒病毒的检测及分析提供了数据支持。     

自噬调节策略在炎症性肠病临床前研究中的进展

炎症性肠病(inflammatory bowel disease, IBD)是一种难治性肠道炎症性疾病,包括溃疡性结肠炎和克罗恩病,具有进行性且不可预测的病程特点。肠道炎症和免疫反应异常与IBD发病机制密切相关。自噬是细胞中重要的分解代谢过程,已被证明与包括IBD在内的多种炎症性疾病存在联系。本文从自噬功能障碍与IBD的关系出发,重点阐述了炎症小体抑制剂、肠道微生物群调节剂及其他信号调节剂等作用于肠上皮细胞和巨噬细胞的自噬调节剂在IBD中的研究进展。     

从滇西北地区首次分离到版纳病毒

目的 对滇西北地区分离的版纳病毒进行系统鉴定,明确与云南其他地区分离株的差异.方法 对2005、2006年从滇西北地区分离的3株版纳病毒进行形态学、基因组带型和分子生物学鉴定,测定第12片段核苷酸序列,进行序列的同源性和系统进化分析.结果 从2005、2006年滇西北蚊虫标本中分离到的3株版纳病毒为直径约70 nm、无包膜、有双层衣壳的球形颗粒,基因组带型为6-6分布.3株版纳病毒问第12片段核苷酸序列同源性为99%,与云南其他地区和印度尼西亚版纳病毒毒株的最大同源性分别为98%和90%;系统进化分析显示滇西北分离株和云南其他地区分离株共同形成一个分枝;第12片段编码的氨基酸序列比较发现我国版纳分离株和印度尼西亚毒株间存在共同的氨基酸残基差异.结论 首次从滇西北地区蚊虫中分离到3株版纳病毒,基因序列分析显示滇两北分离株和云南其他地区分离株同源性较高.     

从滇西北地区首次分离到版纳病毒

目的 对滇西北地区分离的版纳病毒进行系统鉴定,明确与云南其他地区分离株的差异.方法 对2005、2006年从滇西北地区分离的3株版纳病毒进行形态学、基因组带型和分子生物学鉴定,测定第12片段核苷酸序列,进行序列的同源性和系统进化分析.结果 从2005、2006年滇西北蚊虫标本中分离到的3株版纳病毒为直径约70 nm、无包膜、有双层衣壳的球形颗粒,基因组带型为6-6分布.3株版纳病毒问第12片段核苷酸序列同源性为99%,与云南其他地区和印度尼西亚版纳病毒毒株的最大同源性分别为98%和90%;系统进化分析显示滇西北分离株和云南其他地区分离株共同形成一个分枝;第12片段编码的氨基酸序列比较发现我国版纳分离株和印度尼西亚毒株间存在共同的氨基酸残基差异.结论 首次从滇西北地区蚊虫中分离到3株版纳病毒,基因序列分析显示滇两北分离株和云南其他地区分离株同源性较高.     

云南省文山中越边境地区虫媒病毒调查

目的 对云南省文山县、河口县等中越边境地区开展虫媒病毒调查,以期了解当地蚊虫携带虫媒病毒情况.方法 2007年9月在当地5个采集点共采集蚊虫8326只,包括库蚊6091只,中华按蚊1334只,刺扰伊蚊848只,阿蚊53只,并保存于液氮.经消毒、研磨、离心等处理后进行组织培养细胞接种,分离病毒和对病毒分离物进行血清学和分子生物学鉴定,以软件进行病毒的核苷酸序列比对和系统发生分析.结果 从库蚊分离到4株对C6/36细胞致病变的病毒分离物,其他蚊种没有分离到病毒分离物.鉴定结果表明,标本WS0704-2与版纳病毒抗体反应,PCR鉴定为版纳病毒,该病毒基因组第12片段的进化关系同中国其他版纳病毒有明显差异,位于一条独立的进化枝中,在进化上相对独立.标本WS0704-1、WS0708-1、WS0708-2为浓核病毒.结论 云南省文山中越边境地区存在多种蚊虫媒介并携带版纳病毒等虫媒病毒.     

云南省大理地区HIV感染者丙型肝炎病毒基因分型研究

目的对大理地区HIV感染合并丙型肝炎患者进行丙型肝炎病毒(HCV)基因分型研究。方法采集患者血液,提取RNA,采用HCV特异性引物进行巢式RT-PCR扩增,PCR产物直接测序,采用生物信息学软件进行序列分析。结果在大理州人民医院共采集疑似丙型肝炎病人血清13份,HCV核酸检测4份(24~27号)阳性。序列分析显示4株病毒之间核苷酸同源性在80.4%~95.8%之间;24号与1b型HCV核苷酸同源性在98.6%以上,而其他基因型病毒核苷酸同源性在90.2%以下;25、27号与3b型HCV核苷酸同源性在92.1%~98.6%之间,而与其他基因型核苷酸同源性均在87.4%以下;26号与3a型HCV核苷酸同源性在94.4%~94.9%之间,而与其他基因型病毒核苷酸同源性在84.6%以下。遗传进化分析显示25、27号病例为3bHCV感染,26号病例为3aHCV感染,24号为1bHCV感染。结论大理地区HIV感染人群中存在HCV基因1和基因3两个基因型,3a、3b和1b3个基因亚型HCV感染。     

云南蝙蝠血液乙型脑炎病毒分离物的研究

目的 :进一步探索蝙蝠在乙脑病毒贮存宿主方面的作用。方法 :病毒分离、微量血凝抑制试验 (HI)、间接免疫荧光试验 (IFAT)、电镜和病理检查。结果 :从蝙蝠血中分离到两株乙脑病毒。结论 :蝙蝠在乙脑病毒在自然界中的贮存和扩散方面具有重要的流行病学意义。     

HPLC-MS/MS法用于达沙替尼血药浓度监测

目的 建立一种稳定性好、灵敏度高、通用性强测定人血浆中达沙替尼血药浓度的高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)检测方法。方法 血浆样本经甲醇除蛋白后,流动相为含0.1%甲酸的甲酸铵缓冲液(A相)和0.1%甲酸的乙腈溶液(B相),采用梯度洗脱方式,Luna^? C₁₈色谱柱(2.0 mm×20 mm, 3μm)进行分离,流速为0.6 mL·min^-1,柱温35℃。电喷雾离子源(ESI),正离子模式,多反应监测,类似物伊马替尼-D₈作为内标。用于定量分析的离子对为m/z 488.2→m/z 401.1 (达沙替尼)和m/z 502.3→m/z 394.1(伊马替尼-D₈)。结果 达沙替尼的线性范围为1～1000 ng·mL^-1,定量下限为1 ng·mL^-1;日内及日间相对标准偏差(RSD)均小于10%,达沙替尼低、中、高浓度的提取回收率分别为97.8%,98.6%,94.1%。临床样本检测结果表明中国慢性髓系白血病患者达沙替尼血药浓...     

1株2019年云南省西双版纳流行登革热1型病毒全基因组序列分析

目的了解2019年西双版纳暴发登革热主要流行血清型登革热1型病毒(Dengue virus-1,DENV-1)分子特征,为当地登革热流行的预防控制提供依据。方法在C6/36细胞上对1株从2019年西双版纳发热患者血液中分离到的DENV-1病毒(JHS45)进行复壮,采用二代测序的方法对该株病毒进行测序,采用CLC Genomics workbench 8.0生物信息学软件对测序数据组装,使用Lasergene软件、MEGA6.1等进行序列比对、系统进化树构建及氨基酸位点分析。结果JHS45株病毒在C6/36细胞上6 d出现细胞病变。测序组装后获得JHS45株病毒1条10687个核苷酸(nt)长序列(GeneBank登录号:OR593353)。遗传进化分析结果JHS45株病毒与我国2019年西双版纳、广州、河南、浙江流行的以及2013年泰国流行的DENV-1基因型Ⅰ病毒形成一个进化分枝,核苷酸同源性为97.6%~99.9%,氨基酸同源性为99.1%~100%;分析发现与2019年云南西双版纳(MW386863)和广州(MW261839)流行的DENV-1基因型Ⅰ病毒位于同一个较小的进化分枝,它们之间同源性最高,核苷酸同源性均为99.9%,氨基酸同源性均为100%;JHS45株病毒与2015年以来西双版纳流行的DENV-1进行氨基酸差异位点分析,在JHS45株病毒编码区共存在40个氨基酸差异位点,主要集中在非结构蛋白的NS3区域和NS5区域。结论全基因序列分析结果显示JHS45株病毒为DENV-1基因型1病毒,该次西双版纳登革热疫情与西双版纳、广州、河南、浙江流行的病毒株遗传进化关系比较密切,为云南省乃至我国的登革热疫情监测、病毒进化研究以及防控策略制定提供科学依据。     

香菇多糖构效关系、抗肿瘤作用机制及药代动力学研究进展

香菇多糖(lentinan, LNT)是从香菇子实体中提取纯化的最主要生物活性成分,主要为C6分支的β-(1→3)-D-吡喃葡聚糖主链结构。LNT具有显著的免疫调节及抑制肿瘤生长作用,广泛用于临床抗肿瘤辅助治疗,能有效改善肿瘤患者的生活质量。然而,由于其提取纯化工艺繁琐,构象信息和构效关系缺乏,直接抗肿瘤作用机制尚无定论,体内代谢过程不明确,极大限制了LNT的临床应用。该文主要对香菇多糖的提取方法、构效关系、抗肿瘤作用机制及药动学进行综述,以期为香菇多糖的临床合理应用提供参考。