小鼠血管内皮细胞的培养、鉴定及巨噬细胞移动抑制因子对其促增殖作用的研究

目的探讨小鼠血管内皮细胞的培养、鉴定方法及巨噬细胞移动抑制因子(MIF)对其增殖活性的调节作用。方法取小鼠主动脉,去除周围的脂肪和结缔组织,将动脉环剪成0.5 mm大小,放入基质胶处理的12孔培养板内,待细胞长满,用胰酶消化后,取单细胞悬液用抗CD146免疫磁珠纯化,再用CD31抗体鉴定细胞纯度,按104个细胞/孔加入96孔板培养,细胞70%～80%融合时用不同浓度MIF或MIF抑制剂处理细胞,48 h后用甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖程度。结果经CD146磁珠纯化后细胞纯度为95%以上,MTT检测结果显示低剂量MIF能促进血管内皮细胞的增殖,并具有剂量效应关系,而高剂量MIF则与MIF抑制剂一样,抑制血管内皮细胞的增殖。结论成功建立了简单可行的小鼠血管内皮细胞的体外培养方法,并证实一定剂量范围内的MIF能促进血管内皮细胞的增殖,说明MIF在血管内皮细胞的多种病理生理反应中起重要作用。     

年轻成年GFP大鼠嗅鞘细胞的分离培养与形态学特征

目的 建立年轻成年GFP大鼠嗅鞘细胞(OECs)的分离培养方法 ,为OECs移植治疗脊髓损伤奠定基础. 方法 解剖显微镜下、无菌环境取2.5月龄的GFP大鼠嗅球最外层,经酶消化法分散后将细胞接种于含20%胎牛血清的DMEM/F12培养基中.定期进行光电镜观察并摄片.在培养第10天进行S-100和NGFRp75的免疫细胞化学染色鉴定,并计算OECs的纯度. 结果 培养的GFP-OECs在荧光显微镜下呈绿色强荧光,形态以双极、多突起形为主,呈S-100、NGFR p75阳性,纯度在95%以上.电镜下形态与光镜下一致,但细胞结构更为精细. 结论 本文所用方法 简便易行,可分离出高纯度的GFP-OECs,其形态学特征与生物学活性无变异.源自GFP转基因大鼠的OECs可以作为一种有效的工具细胞,广泛应用于OEC在脊髓损伤修复中的研究.     

重庆地区汉族人群CD14基因启动子区-159 T→C多态性及其与LPS反应分析

目的观察重庆地区汉族人群CD14基因启动子区-159单核甘酸多态性(single nuc leotide polymorph ism,SNP)分布特征,及其与CD14表达和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)反应的关系。方法选择298例重庆地区汉族健康个体,采用限制性片段长度多态性法(restrictionfragm ent lengthpoly-morph ism,RFLP)进行基因分型,检测LPS刺激前后外周血单核-巨噬细胞mCD14荧光强度和血浆sCD14浓度。结果重庆地区汉族人群CD14-159 T/T、T/C、C/C基因型频率分别为32.21%、50.67%和17.11%,样本符合Hardy-W e inberg平衡,正常情况下,不同基因型mCD14水平差异不明显,而sCD14浓度有显著性差异(P<0.05),LPS刺激能增强mCD14和sCD14的表达,但各基因型的增强幅度没有明显差异。结论重庆地区汉族人群CD14-159 SNP等位碱基以T为主,T→C变异可抑制sCD14的表达,但对mCD14表达和LPS刺激反应的影响可能不明显。     

TLR4胞外段在大肠杆菌中的可溶性表达、纯化及鉴定

目的：构建谷胱甘肽转硫酶-TLR4融合蛋白表达载体，并研究其编码的蛋白质在大肠杆菌中的表达。方法：利用PCR从含TLR4全长cDNA序列的质粒中扩增其胞外段，约1800bp，然后将其克隆入pMD18-T载体中。测序确证后重组入谷胱甘肽转硫酶融合表达载体pGEX-4T-1中，并用IPTG诱导其在大肠杆菌中表达。结果：PCR扩增的TLR4胞外区基因序列与GenBank数据库中的序列一致。重组质粒经酶切鉴定及测序证实，TLR4基因已正确插入到pGEX-4T-1中。重组表达质粒转化感受态大肠杆菌HBl01后用IPTG诱导，获得Mr92 000的GST-TLR4融合蛋白；37℃，O.2mmol／L IPTG诱导4h，SDS-PAGE电泳后，经薄层凝胶扫描分析该融合蛋白占菌体蛋白总量34．25％，部分以包涵体存在，可溶性蛋白约占27．84％；亲和层析纯化后纯度大于90％。Western-blot证实GST-TLR4融合蛋白能与TLR4单抗特异性结合。结论：成功地构建融合蛋白表达载体pGEX-TLR4，并在大肠杆菌中获得有效表达，获得了纯度大于90％的可溶性GSI-TLR4融合蛋白，为进一步研究其功能及制备TLR4单克隆抗体奠定了基础。     

妊娠期外阴阴道假丝酵母菌病护理体会

目的:探讨妊娠期外阴阴道假丝酵母菌病的常规护理和综合护理对其治疗效果的影响.方法:将研究对象120例随机分为对照组(n=60)和观察组(n=60),对照组应用常规护理方法,观察组应用综合护理方法.结果:通过实验,对照组治疗有效率为88.33％,观察组的治疗有效率为98.33％,观察组的治疗有效率高于对照组(P＜0.05),具有统计学意义.将对照组和观察组患者护理后的满意率进行比较,发现观察组患者护理后的满意率为100％,对照组患者护理后的满意率为88.33％,具有统计学意义.结论:综合护理对妊娠期外阴阴道假丝酵母菌病的治疗有效率高,复发低,患者对综合护理满意度高,值的临床推广.     

表皮神经嵴干细胞移植对大鼠损伤脊髓组织中脑源性神经营养因子表达的影响

为了提高分枝杆菌转化植物甾醇产9α 羟基雄甾 4 烯 3,17 酮(9 OH AD)的转化效率,建立了油水乳化体系。结果表明：机械搅拌提供剪切力和加入吐温80作为分散剂是形成稳定乳化体系的必要因素,且油的比例须随甾醇投料质量浓度的增加而增加。在油水乳化体系中,细胞均匀分散,生物量增加,植物甾醇投料浓度和转化效率均得到提高;植物甾醇投料质量浓度可达20 g/L,9 OH AD摩尔得率达到64.06%,产率为1.28 g/(L·d)。转化终止后通过离心进行相分离,可以去除大部分存在于油相中的副产物,使产物纯度从66%提高到90%。     

临床型医院科研工作存在的问题和对策

非医科院校直属的临床型医院普遍存在着科研意识淡薄,科研水平滞后,科研团队缺如,科研制度缺乏等阻碍科研工作发展的问题。近年来,针对这些问题,山西省人民医院采取开展科研培训,完善科研设施,加强科研梯队建设,制定各项科研奖惩制度等措施,有力地促进了科研工作的开展和进步,使医务人员对科研工作的思想观念从根本上发生了改变,医院在各项科研工作中取得了切实的成绩。     

IL-10的研究进展

IL 10是一种独特的细胞因子 ,它能抑制单核 /巨噬细胞系统活化以及单核因子和炎症细胞因子的合成。本文综述其在生物学作用、与疾病间的关系、基因表达调控、基因多态性等方面的研究进展     

手法联合牵引治疗儿童一过性髋关节滑膜炎疗效观察

髋关节一过性滑膜炎是一种非特异性炎症引起的以短暂性急性疼痛、肿胀和积液为主要表现的病症。中医称此病为髋错缝、掰髋、闪胯、滑胯等[1]。由于儿童肌肉发育尚未成熟,韧带和关节囊松弛,所以髋关节扭伤的机会较多,一过性髋关节滑膜炎是10岁以下儿童髋关节疼痛常见的原因之一[2]。笔者于2004年12月~2005年12月应用手法配合牵引治疗此病30例,并与口服消炎镇痛药、局部药酒外擦的30例进行对照,现报道如下。1资料与方法1·1临床资料60例患者来源于本院直属门诊,均符合《实用骨科手册》中儿童髋关节一过性滑膜炎的诊断标准[3],并经各种理化检查…