条件基因敲除技术及应用现状

条件基因敲除技术是近十多年来发展出来的新技术，它可以通过简单的基因敲除改变活体的遗传信息，可以精确的在动物体内引入点突变。并且对基因敲除进行时空的调控，并成为脊椎动物成体中研究基因功能的重要手段。本文主要介绍该技术在近几年来在医学研究中的应用 情况。     

Usher综合征Ⅱ型家系临床表型特征及USH2A基因突变分析

目的对收集到的一个Usher综合征家系的临床表型特征进行分析,并选取USH2A基因进行突变检测。方法通过填写问卷式调查表对家系进行详细的病史调查,绘制家系遗传图谱;依据详细的全身和专科检查结果对家系进行分型诊断,对家系耳聋患者进行USH2A基因突变分析。结果该家系双耳听力下降出现在3～4岁,非渐进性,30～50岁听力学检测表现为中重度感音神经性耳聋,以高频听力损失为主,前庭功能正常。该家族耳聋患者10～13岁时出现夜盲,随年龄增长逐渐加重,视野逐渐缩窄至管状视野,伴视力下降。USH2A基因突变分析检测到9种单核苷酸多态,其中c.504A〉G（T168T）、c.879T〉G（L293L）、IVS15＋35G〉A、IVS18-8T〉G、c.4457G〉A（R1486K）为已知单核苷酸多态,c.573A〉G（V191V）、c.1276A〉T（N426Y）、IVS19-44G〉A、IVS19-66A〉C为本研究首次报道。结论本文报导的Ⅱ型Usher综合征家系具有独特的临床表型特征,对该家系USH2A基因突变分析未发现最常见的2299delG突变及其他明确与疾病相关的新突变,提示Usher综合征具有高度的遗传异质性。     

大前庭水管综合征的诊治策略研究

目的研究和揭示大前庭水管综合征(LargevestibularaqueductSyndrome,LVAS)的临床诊治策略。方法对2003年5月—2005年12月收集的107例大前庭水管综合征患者进行系统的临床听力学特征分析、影像学分析及SLC26A4致病基因检测分析,以期发现大前庭水管综合征患者的系列特征。临床听力学特征性观察包括纯音听力中低频的气骨导差;听性脑干诱发电位检查时观察特征性的声诱发短潜伏期负反应(acousticallyevokedshortlatencynegativeresponse,ASNR);影像学检查包括对所有患者均行颞骨CT扫描或耳蜗水成像磁共振检查了解前庭水管、内淋巴囊及耳蜗的发育情况;病因学分析包括应用聚合酶链反应(PCR)的方法扩增SLC26A4基因的21个外显子,直接测序,DNAStar及BioEdit序列比对软件分析SLC26A4基因的突变位点。结果70.8%～83.7%LVAS患者在低频500Hz、250Hz存在显著的气骨导差,范围在15～95dBHL。75.7%的LVAS患者在常规ABR测试时发现ASNR,潜伏期为3.26±0.57ms。97.9%的LVAS患者发生了SLC26A4基因的突变,其中双等位基因突变占88.4%,单等位基因和未发现突变的家系分别占9.5%和2.1%。共发现38种突变形式,包括23种国际上尚未报道的突变,15种已报突变(五种仅报道于中国家系)。其中IVS7-2A>G突变是所有突变中最常见的突变,占所有突变者的78.9%,是中国人群中的特征性突变。影像学检查CT及磁共振是诊断LVAS的金标准。结论大前庭水管综合征具有特征性的纯音听力—低频气骨导差;具有特异性的ABR波形—ASNR;CT检查见前庭水管扩大,直径>1.5mm;具有特征性的MRI表现-扩大的内淋巴囊;具有特异和常见的SLC26A4基因突变谱。上述系列特征形成了对大前庭水管综合征的诊断依据。选择积极的治疗方案将有助于患者听力的保护与康复。     

沙鼠耳蜗cDNA文库的构建

为了建立沙鼠耳蜗的cDNA文库 ,先提取沙鼠耳蜗的mRNA并经oligo(dT)引物合成cDNA第一链 ,经LD PCR法扩增合成双链cDNA后 ,克隆到λTriplex2中扩增文库。用耳蜗特异的prestin蛋白基因引物作PCR ,鉴定文库。结果显示 ,文库的库容量为 1.8× 10 6pfu ,重组率为 80 % ,用prestin蛋白基因引物可扩增出 86 3bp的prestin蛋白基因。研究表明 ,构建的文库具有较好的库容量及重组率 ,且插入片段很大 ,为从分子生物学方面研究耳蜗打下了基础     

颞骨巨细胞修复性肉芽肿

Jaffe于1953年首次提出巨细胞修复性肉芽肿(giant cell reparative granuloma,GCRG)的诊断,认为GCRG是一种少见的非肿瘤性病变,是对骨内出血的修复反应,但其具有局部侵袭性.GCRG好发于下颌骨、上颌骨,很少涉及颞骨.该病的诊断困难,常误诊为骨巨细胞瘤(giant cell tumour,GCT).现详细介绍l例颞骨GCRG的诊治经过,并对其病因、诊断、鉴别诊断及治疗进行讨论.     

先天性镫骨畸形手术的远期疗效

为了解镫骨手术治疗先天性中耳畸形远期疗效,并与耳硬化镫骨手术远期疗效比较,我们对解放军总医院耳鼻喉科行先天性中耳畸形镫骨手术5 8例(1984年4月～2 0 0 2年3月)进行随访,对随访半年以上、资料完整的5 1例(70耳)进行回顾性总结、分析。一、资料与方法1 一般情况:5 1例中男31例,女2 0例。年龄4～4 7岁(5岁以下1例) ,平均(2 0 4±10 5 )岁,无耳流脓病史。随访6个月～13年。随访0 5～1年者70耳,1年以上4 6耳,2年以上31耳,5年以上12耳及10年以上1耳。其中1次手术5 9耳,2次及以上11耳。双耳畸形19例,单耳畸形32例;单纯中耳畸形2 4耳,中耳…     

Mondini内耳畸形的诊断与治疗

为总结内耳畸形的诊断与治疗特点，报告５例（６耳）Ｍｏｎｄｉｎｉ内耳畸形。４例（５耳）伴发脑脊液耳、鼻漏（其中３例伴发Ｋｌｉｐｐｅｌ－Ｆｅｉｌ综合症）经手术补漏成功，１例伴发耳硬化症。结合病理诊断及手术处理特点重点讨论：①诊断依据除听力检查外，特别强调ＣＴ为确诊提供的影像学资料；②Ｍｏｎｄｉｎｉ内耳畸形所致外淋巴瘘主要在前庭窗或其附近，镫骨底板及圆窗部位；③自发性脑脊液耳、鼻漏处理可采取耳内切口的鼓     

中耳细菌感染对内耳及机体免疫功能长期影响的？…

目的 探讨中耳细菌感染后内耳热休克反应是否会长期存在,及其对内耳功能的潜在影响。方法 ６０只ＢＡＬＢ－ｃ鼠随机分为肺炎克雷白杆菌、金黄色葡萄球菌（简称金葡菌）、绿脓杆菌、大肠杆菌、变形杆菌和生理盐水对照６个组,每组１０只。中耳注射致病菌１３５ｄ后测试畸变产物耳声发射并取材进行光镜与电镜观察,检测内耳热休克蛋白（ＨＳＰ）７０相关表位分子的表达,行单个核细胞因子κ－Ｂｐ６５和抗肺炎克雷白杆菌抗体、抗膜     

236内耳基因转导的研究进展

基因治疗是指在体细胞中转入具有治疗价值的新的遗传物质,使其在体内稳定表达,在一段时期内持续提供蛋白药物可达到治疗目的.对于一些日常用药物难以奏效的内耳疾病来说无疑是一种有潜力的治疗方法.由于内耳存在血迷路屏障,使得一些如生长因子、细胞因子和酶类等大分子难以通过血迷路屏障并输送到靶部位而发挥生物学作用.另外,由于这些蛋白质分子的半衰期短,因而需要重复多次耳蜗内注射及微泵灌注,技术上的复杂性大大限制了这类分子在内耳中的应用.故基因治疗的关键是建立有效的基因转移方法,以使目的基因得到高效率及长时间的表达.同时还要具备相应的调控手段.     

颈静脉体瘤

颈静脉体瘤发病虽罕见,但治疗较困难,且易复发。本文试就其病因、病理、临床表现、诊断及治疗的有关文献进行综述,以供同道参考。