身痛逐瘀汤加减治疗原发性坐骨神经痛49例

坐骨神经痛是临床比较常见的疾病之一。主要表现为腰椎、下肢持续性钝痛或刺痛、抽痛,多因天气变化、寒冷刺激、劳累等诱因发作或加重。笔者采用身痛逐瘀汤加减治疗原发性坐骨神经痛50例,现报告如下。     

高效液相色谱-质谱联用法鉴定中药藤黄中桥环类化合物

采用液相色谱电喷雾离子阱质谱联用仪(HPLC-ESI/MS)研究新藤黄酸和藤黄酸在正离子检测方式下的一级质谱和多级质谱，归纳其ESI碎裂规律。采用C₁₈反相色谱柱分离并检测了藤黄中的16种化合物；通过二极管阵列检测器与电喷雾质谱联用获得了相应化合物的最大紫外吸收和相对分子质量信息，并利用质谱的源内碰撞诱导解离技术(CID)结合文献报道鉴定了10种化合物的结构。这种研究方法对其他天然产物特别是微量成分结构分析具有参考作用。     

新藤黄酸与细胞外信号调节激酶抑制剂PD98059联合应用对肺腺癌A549细胞生长的影响

目的研究新藤黄酸(Gambogenic acid,GNA)与细胞外信号调节激酶(extracellular signal regulatedkinase,ERK)特异性抑制剂PD98059联合应用对肺腺癌A549细胞生长的影响。方法新藤黄酸与ERK特异性抑制剂PD98059处理肺腺癌A549细胞,倒置显微镜观察细胞形态变化;甲基噻唑基四唑(methyl th-iazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞内活性氧的变化;蛋白印迹法(Westernblot)检测ERK、p-ERK蛋白的表达。结果 MTT法结果表明GNA在2.5μmol/L对肺腺癌A549细胞的增殖有抑制作用;与PD98059合用24h,GNA的抑制作用更加明显。倒置显微镜观察显示GNA作用肺腺癌A549细胞24h后,细胞固缩变圆,体积变小,部分细胞呈半贴壁状态;GNA和抑制剂PD98059合用后,多数细胞固缩变圆,脱落,并悬浮于培养液中;少数细胞体积增大、肿胀、破裂呈坏死状。流式细胞仪检测结果表明,20μmol/L PD98059+2.5μmol/L GNA共同作用于A549细胞24h后,与GNA 2.5μmol/L组比较细胞内活性氧生成增加。Western blot法检测表明,PD98059和GNA联合作用A549细胞24h后,p-ERK蛋白表达与GNA组比较显著降低。结论 GNA能诱导肺腺癌A549细胞凋亡,联合应用ERK抑制剂PD98059后可减少ERK蛋白的活化,增加肺腺癌A549细胞的凋亡;结果初步表明GNA诱导肺腺癌A549细胞的凋亡可能与调节ERK信号通路有关。     

HPLC法测定藤黄中藤黄酸和新藤黄酸的含量

目的建立藤黄中藤黄酸和新藤黄酸的含量测定方法。方法采用反相高效液相色谱法，色谱柱为Hypersil ODS C18（4．6mm×250mm，5μm）；流动相：甲醇-0．1％冰醋酸水溶液（93：7），流速1.0mL／min；检测波长为360nm，外标法定量。结果藤黄酸线性范围为2．45～49μg，回归方程Y=11334．8＋232781X（r=0．9999，n=5），平均回收率99．3％，RSD=1．02％（n=6）；新藤黄酸线性范围为2．55～51μg，回归方程Y=75197．5＋226301X（r=0．9997，n=5），平均回收率100．5％，RSD=1．48％（n=6）。结论本法精密度高，重复性好，简便、可靠，可作为藤黄的质量控制方法.     

华蟾素口服液对胃癌裸鼠原位移植瘤生长的抑制作用及机制研究

目的 研究华蟾素口服液对人胃癌细胞 SGC-7901裸鼠原位移植瘤生长的抑制作用及其作用机制。方法 取雄性Balb/c 裸鼠,应用人胃癌SGC-7901细胞建立裸鼠皮下移植瘤,利用皮下移植瘤建立原位移植瘤模型,随机分为模型组,5-氟尿嘧啶组(阳性组),华蟾素口服液高、低(24、12 mL·kg^-1)组,每组6只。阳性组隔日腹腔注射给药2周,华蟾素口服液组连续灌胃给药3周,末次给药后取出瘤体,测量瘤体体积、瘤重及抑瘤率,HE染色观察瘤体组织病理改变,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP 缺口末端标记测定法[terminal dexynucleotidyl transferase(TdT)-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL]测定瘤体细胞凋亡,免疫组化及Western blot法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达,Western blot法检测Bax、Bcl-2、磷酸化磷脂酰肌醇-3-羟激酶/磷脂酰肌醇-3-羟激酶(p-PI3K/PI3K),p-Akt/Akt蛋白表达。结果 与模型组比较,华蟾素高、低剂量组可明显降低瘤体体积及重量;促进肿瘤细胞肿胀、变性及坏死,减少肿瘤间质内血管生成;促进肿瘤细胞凋亡;明显增加裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)、Bax蛋白表达,降低Bcl-2、p-PI3K和p-Akt蛋白表达水平。结论 华蟾素口服液对人胃癌裸鼠原位移植瘤有明显的抑制生长作用,其作用机制可能与其抑制PI3K/Akt信号通路从而促进肿瘤细胞凋亡有关。     

新藤黄酸诱导卵巢癌A2780细胞凋亡的作用研究

目的 研究新藤黄酸对卵巢癌细胞增殖的抑制作用及其可能的机制。方法 采用MTT检测新藤黄酸对卵巢癌A2780细胞存活率的影响,采用fluo-3AM染色荧光显微镜观察新藤黄酸对A2780细胞钙离子水平的影响,采用Hoechst 33342染色荧光显微镜观察细胞的凋亡率,采用PI染色流式细胞仪检测新藤黄酸对细胞周期的影响,采用Annexin Ⅴ-FITC/PI染色流式细胞仪检测新藤黄酸对细胞凋亡率的影响,采用Western blot检测凋亡相关蛋白表达的影响。结果 MTT检测结果表明,新藤黄酸对卵巢癌细胞A2780的增殖具有抑制作用,且抑制作用具有明显的剂量依赖性;fluo-3AM染色荧光显微镜下观察,可见各浓度新藤黄酸均能升高A2780细胞内钙离子水平,且呈现浓度依赖关系;PI染色流式细胞仪检测结果表明,新藤黄酸能阻滞A2780细胞于G0/G1期;Hoechst 33342染色和Annexin Ⅴ-FITC/PI染色流式细胞仪检测结果表明,随着新藤黄酸浓度的增加,A2780细胞凋亡率呈现增高的趋势;Western blot检测结果表明,新藤黄酸可以促进凋亡相关蛋白p53、细胞色素C以及Caspase-9表达水平升高。结论 新藤黄酸具有抑制卵巢癌A2780细胞增殖和诱导肿瘤细胞发生线粒体凋亡的作用。     

新藤黄酸对人乳腺癌耐药细胞体外作用的研究

目的 观察新藤黄酸（gambogenic acid,GNA）对人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADR的作用.方法 采用MTT法观察GNA、阿霉素（adriamycin,ADR）及两者联用对MCF-7/ADR细胞增殖的抑制作用,采用流式细胞仪观察MCF-7/ADR细胞内ADR浓度.结果 GNA能剂量依赖地抑制MCF-7/ADR细胞的生长,作用48 h时,GNA对MCF-7/ADR细胞的IC50为12.88 μmol/L;4 μmol/L GNA可增加MCF-7/ADR细胞对ADR的敏感性,使ADR对MCF-7/ADR细胞的IC50由80.22 μmol/L降至12.54 μmol/L;GNA显著增强MCF-7/ADR细胞内ADR的积累,呈剂量依赖关系.结论 低剂量GNA能显著增加MCF-7/ADR细胞对ADR的敏感性.     

加工前、后的亳州牡丹皮水提物对2型糖尿病小鼠血糖、血脂等的作用研究

目的:研究加工前、后的亳州牡丹皮水提物对2型糖尿病（T2DM）小鼠的血糖（GLU）、总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）和游离脂肪酸（NEFA）的作用比较。方法:采用高脂饲料喂养雄性昆明小鼠1个月,再采用链脲佐菌素（STZ）120 mg·kg^-1进行腹腔注射,复制T2DM小鼠模型,然后,随机分配已建立成功的小鼠模型至模型对照组、阳性对照组、未加工丹皮给药组和已加工丹皮给药组,并以正常小鼠作为正常对照组。对造模成功的小鼠以各丹皮水提物进行28 d的持续灌胃,再解剖取血,测定T2DM小鼠血清中的各项生化指标。结果:已加工牡丹皮和未加工牡丹皮水提物均能显著的降低T2DM小鼠体内的GLU（P<0.01）、TC（P<0.01）、MDA（P<0.05）,并能使T2DM小鼠体内的SOD显著升高（P<0.01）。结论:加工前、后的牡丹皮水提物均能显著降低T2DM小鼠的血糖值,两者差异无统计学意义,并对血脂的代谢和抗氧化的能力在一定程度上有调节作用。已加工的牡丹皮外观上虽然更加美观,但是在药效上并未增强。     

新藤黄酸诱导细胞凋亡抑制A549细胞裸鼠移植瘤增长的研究

目的:通过体内移植瘤模型探讨新藤黄酸干预人非小细胞肺癌的发生发展的可能机制.方法:采用肺腺癌A549裸鼠移植瘤实验,评价新藤黄酸对人肺腺癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用;透射电镜观察细胞超微结构的变化;TUNEL法检测凋亡指数;免疫组织化学方法检测瘤体组织COX-2和VEGF蛋白的表达.结果:新藤黄酸8,16 mg·kg-1给药后裸鼠的移植瘤较模型组生长缓慢,瘤重及瘤体积明显低于模型组(P<0.01);透射电镜观察发现新藤黄酸各组肿瘤细胞出现典型的凋亡特征;模型组中癌细胞质无明显空泡化,核膜内侧异染色质区域表现正常,其他染色质正常分散分布;TUNEL结果表明,给药组瘤体组织的凋亡指数明显高于模型组;免疫组织化学分析结果显示新藤黄酸作用后能够降低肿瘤组织的COX-2和VEGF的表达(P<0.01).结论:新藤黄酸可能通过诱导肺腺癌A549细胞凋亡而干预人非小细胞肺癌的发生发展,并调控肿瘤组织VEGF和COX-2蛋白的表达.     

20例镇静催眠药中毒救治体会

本院自2002年3月至2004年3月共收治巴比妥(鲁米那)及安定中毒患者20例，都获得了较好治疗效果，现分析如下。