创伤小鼠脾细胞核因子-κB的表达及与全身炎症反应综合征发生的关系

目的探讨创伤后不同时相点脾细胞核因子-kappaB(NF-κB)的DNA结合蛋白和NF-κB P65蛋白亚型表达的动态变化.方法采用小鼠双后肢闭合性砸伤+骨折模型,于创伤后1、4、7d处死动物,分离、纯化脾细胞,提取脾细胞核蛋白.用电泳迁移率改变试验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检测NF-κB的DNA结合活性,用免疫蛋白印变法(Western blotting)检测NF-κB P65蛋白亚型表达.结果NF-κB的DNA结合活性在创伤后1、4、7d表达明显增加.NF-κB P65蛋白亚型在创伤后1、4、7d表达明显增高.结论创伤可明显增强脾细胞NF-κB的DNA结合活性和P65蛋白亚型的表达,在创伤后淋巴细胞活化及全身炎症反应综合征(SIRS)发生、发展过程中可能起重要作用.     

创伤后IL-2表达受抑与核转录NFAT和AP-1变化的关系

目的探讨创伤后脾细胞活化T细胞核因子(nuclear factor of activated T cells,NFAT)和激活蛋白-1(activator protein-1,AP-1)的DNA结合活性、部分家族成员c-Fos,c-Jun,JunB蛋白的表达和白细胞介素2(IL-2)表达的动态变化及它们间的关系.方法采用小鼠双后肢闭合性砸伤+骨折模型,于创伤后6、12h,1、4、7、10、14d处死动物,分离脾细胞,经ConA刺激细胞后收集培养上清以测定IL-2活性;提取脾细胞RNA以测定IL-2 mRNA;提取脾细胞核蛋白,用电泳迁移率改变试验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检测NFAT、AP-1的DNA结合活性,用免疫蛋白印迹法(Western blot assay)检测c-Fos,c-Jun,JunB蛋白的表达.结果和正常对照组相比,创伤后IL-2活性均有不同程度的降低,其受抑的程度在创伤后4d更为明显.创伤后脾细胞NFAT和AP-1的DNA结合活性亦逐渐下降,至伤后4d时下降最明显,为正常对照组的41%和49%.这与创伤后脾细胞IL-2的活性和IL-2 mRNA的降低相一致.c-Fos蛋白水平在伤后1、4d明显降低;c-Fos蛋白表达无明显变化;JunB蛋白水平仅在伤后1d明显表达.结论上述结果提示,创伤后脾细胞IL-2表达受抑至少部分是由于核转录因子NFAT和AP-1的DNA结合活性降低所导致;而NFAT和AP-1的DNA结合活性降低可能部分由于创伤影响c-Fos蛋白的生成所致.     

CIK细胞疗法联合TACE治疗原发性肝癌患者临床疗效观察

目的探讨细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）免疫治疗联合肝动脉化疗栓塞（TACE）术治疗原发性肝癌患者的临床疗效。方法选择2012年2月~2014年2月间在本院确诊并行TACE术的67例原发性肝癌患者,按是否联合CIK治疗分为联合治疗组（CIK+TACE）32例和对照组（TACE）35例,比较两组患者外周血T淋巴细胞亚群变化、生活质量（QOL）改善、临床疗效、无进展生存期（PFS）等指标。结果在CIK首次回输后7 d,联合治疗组患者外周血CD3⁺、CD4⁺细胞的比例和CD4⁺/CD8⁺比值分别为（70.32±2.36）%、（32.18±2.27）%和（1.15±0.05）,显著高于CIK细胞治疗前水平[（63.56±2.42）%、（30.34±2.05）%和（0.90±0.05）,P<0.05）];CIK细胞治疗后外周血CD8⁺细胞比例为（29.35±2.95）%,显著低于治疗前水平[（33.28±3.14）%,P<0.05];联合治疗组患者生活质量明显改善,治疗前后Karuafsky评分分别为（74.6.±12.5）和[（83.4±14.7）,P<0.05];联合治疗组部分缓解率为53.1%,与对照组42.9%比,无显著性差异（P>0.05）;联合治疗组中位PFS为16个月,显著高于对照组的9.5个月（P<0.05）;CIK治疗后不良反应轻微,对症处理后均恢复正常。结论CIK细胞免疫疗法联合TACE术较单纯TACE术治疗,可以提高肝癌患者的细胞免疫功能,改善原发性肝癌患者的生存质量,延缓肿瘤进展。     

糖皮质激素受体和热休克蛋白70在大鼠创伤失血性休克肝组织中的变化及其意义

目的从组织细胞受体水平探讨糖皮质激素受体（GR）和热休克蛋白70（HSP70）在创伤失血性休克后肝脏中的变化及其作用。方法采用双侧股骨骨折伴失血性休克致严重创伤模型，动态观察伤后8h大鼠肝组织GR、HSP70、血清肝功能生化指标、肝脏病理等变化。采用蛋白质免疫印迹法（Western blot）测定肝组织GR、HSP70含量，并进行计算机图像分析。结果单纯股骨骨折伤后，肝组织GR含量于伤后1h即开始下降，6h降至最低，8h仍显著低于正常对照组；创伤合并休克后，GR下降更加明显。HSP70在单纯股骨骨折伤后迅速增加，6h达到峰值，8h仍持续在较高水平；创伤合并休克后，HSP70升高更加显著。单纯股骨骨折伤后，血清丙氨酸转氨酶（ALT）、总胆红素（TB）和白蛋白与正常对照组比较，差异均无显著性。但创伤合并休克后4h和2h血清ALT和TB分别开始明显增高（P均d〈0．01），白蛋白则均下降（P均〈0．01）。创伤合并休克后6h肝脏镜下肝窦内即出现较多炎性细胞浸润。结论GR不足在严重创伤失血性休克后肝脏继发性损害过程中起重要作用，HSP70可能参与了肝组织细胞抗损伤机制的启动。     

白藜芦醇抑制HeLa细胞增殖及其作用机制

目的研究白藜芦醇（Res）对宫颈癌HeLa细胞体外生长抑制作用及其机制。方法以17.5、35.0、70.0、140.0μmol/L Res分别处理HeLa细胞24、48与72 h,采用MTT法检测HeLa细胞存活率;应用70μmol/L的Res处理HeLa细胞24 h,采用Western Blot检测HeLa细胞中磷酸化真核细胞翻译起始因子4E（p-eIF4E）、磷酸化4E结合蛋白1（p-4E-BP1）和半胱氨酸蛋白酶蛋白3（caspase-3）的表达。结果不同浓度的Res作用不同时间后HeLa细胞增殖受到明显抑制,且呈时间和剂量依赖性,在相同时间内,随着Res浓度的增加,HeLa细胞的增殖抑制率明显升高（F=93.76~637.22,P〈0.01）;在同一浓度时,随着Res作用时间的延长,HeLa细胞的增殖抑制率也明显升高（F=8.79~29.99,P〈0.01）。70μmol/L的Res作用HeLa细胞24 h后,HeLa细胞中p-eIF4E、p-4E-BP1蛋白表达较对照组减少（t=14.93、4.78,P〈0.01）,caspase-3蛋白表达较对照组增加（t=10.68,P〈0.01）。结论 Res对宫颈癌HeLa细胞体外生长有明显抑制作用,其机制可能与抑制p-eIF4E、p-4E-BP1表达,并诱导caspase-3活化,从而增加HeLa细胞凋亡有关。     

槲皮素活化mTOR信号通路对L929成纤维细胞增殖的影响

目的:探讨槲皮素(Quercetin,QU)对L929成纤维细胞增殖的影响及其分子机制.方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测QU对L929细胞增殖的影响,荧光素酶报告基因法检测QU对蛋白质翻译调控的影响、Western blot法检测QU 对 mTOR介导的蛋白质翻译调控通路关键基因mTOR、P-4E-BP1(翻泽...     

创伤后巨噬细胞抑制T细胞功能的分子机制研究

目的：研究创伤后巨噬细胞掏细胞功能的分子机制。方法：将创伤小鼠的巨噬细胞,加入至正常小鼠Ｔ细胞培养系统中,测定Ｔ细胞功能及细胞内信使分子。结果：创伤后巨噬细胞在体外可明显抑制经ＣｏｎＡ刺激的正常Ｔ淋巴细胞转化、白介素２（ＩＬ－２）的生成、ＩＬ－２受体α（ＩＬ－２α）的表达以及ＩＬ－２ｍＲＮＡ、ＩＬ－２ＲαｍＲＮＡ水平,可升高正常活化Ｔ细胞内ｃＡＭＰ含量,降低ｃＧＭＰ含量、游离钙（〖Ｃａ＾２＋〗ｉ浓     

基于提升医学生自主学习能力与科研素养的微生物学实验教学模式探索

探讨如何指导医学生熟练掌握微生物学的检验方法,提高微生物实验教学质量。以创新性与探索性为导向,结合临床知识,优化实验设计与方案,激发学生的自主学习能力,提高动手能力并掌握无菌操作技术。在提升实验教学效果的同时,提高临床检验操作能力和病原诊断能力,培养学生的科研素养,以提升医学生适应临床岗位的竞争力。     

人eIF4E基因shRNA慢病毒载体的构建及鉴定

目的设计并构建人真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)基因shRNA慢病毒质粒表达载体。方法设计合成人eIF4E基因RNA干扰双链DNA片段,重组到慢病毒质粒PLVTHM上,然后进行PCR鉴定和测序分析。重组质粒与3种包装质粒混合,以LipoD293TMDNA In Vitro包裹后转染293T细胞,收获病毒上清液感染宫颈癌HeLa细胞。结果经过PCR鉴定出的重组载体测序结果与目的序列一致,成功构建人eIF4E基因shRNA慢病毒质粒表达载体及获得相应慢病毒,并成功感染HeLa细胞,可见绿色荧光蛋白表达。结论成功构建人eIF4E基因shRNA慢病毒载体,为进一步研究宫颈癌基因治疗奠定基础。     

热休克蛋白70对严重创伤休克后肝脏的作用

目的 探讨热休克蛋白70（HSP70）对严重创伤休克后肝脏作用.方法 成年Wistar大鼠,采用双侧股骨骨折伴失血性休克致严重创伤模型,动态观察伤后8 h大鼠肝组织HSP70、血清肝功能生化指标、肝脏病理等变化.HSP70表达测定采用免疫印迹法,并进行计算机图像分析.结果 伤后HSP70在肝组织中表达迅速增加,6 h达到峰值,伤后8 h仍维持较高水平;创伤合并休克后,HSP70表达高峰提前至伤后4 h,持续表达至伤后6 h后逐渐下降,死亡前在肝组织中仍有少量表达.创伤休克后血清ALT、TB伤后4 h开始明显增高（P＜0.01）,白蛋白下降（P＜0.01）.肝脏镜下创伤休克后6 h肝窦内出现较多炎性细胞浸润.结论 在创伤休克早期,HSP70可能参与了肝组织细胞抗损伤机制的启动,但随着休克时间的延长,HSP70的过高持续表达,则可能对肝脏造成损害.HSP70在创伤休克后肝保护与肝损害过程中可能发挥双重作用.