七年制医学生生理学机能实验改革体会

本简要阐述了生理学自行实验设计的可行性，教学实施方法和效果评估，为生理学机能实验改革和素质教育提供一些经验和线索。     

胚胎干细胞诱导分化为神经细胞治疗帕金森病的前瞻与现状

帕金森病(Parkinson'sdisease,PD)为常见的中枢神经系统退行性疾病之一,其主要病理改变为中脑黑质多巴胺能神经元变性、缺失。胚胎干细胞(embryonicstemcells,ESc)是一种从早期胚胎分离、能在体外经抑制分化后无限增殖,高度未分化的全能干细胞。在全反式维A酸和无血清培养等诱导下,ES细胞可分化为神经元及神经胶质细胞等,为中枢神经退行性疾病的细胞移植治疗提供了丰富的种子细胞来源。将ESc分化为神经元移植治疗PD,在动物实验中已取得初步成效。     

肝脏X受体参与阿尔茨海默病胆固醇代谢异常机制的研究进展

阿尔茨海默病(AD)是一种以记忆减退、认知、语言障碍及人格改变为主要症状的神经系统退行性疾病,多发于65岁以上老年人,病理改变以细胞外β淀粉样蛋白(β-amyloid pep-tide,Aβ)、老年斑或神经炎斑、神经元细胞质内出现神经纤维     

Noggin参与海人酸损伤后成年大鼠海马颗粒下区颗粒细胞增殖

目的 探讨侧脑室注射海人酸(KA)致大鼠海马损伤后Noggin的表达变化及其与颗粒细胞增殖的关系.方法 健康雄性SD大鼠32只采用随机数字表法分为实验组(16只)及对照组(16只).对照组又分为生理盐水对照组和空白对照组,各8只.实验组大鼠侧脑室注射KA,生理盐水对照组注射等剂量生理盐水.空白对照组不作处理.侧脑室注射KA 1周内,尼氏染色检测海马神经元的丢失.免疫荧光染色与原位杂交的方法检测海马齿状回BrdU标记细胞与Noggin mRNA阳性细胞的变化.结果 在侧脑室注射KA致海马损伤后1周,海马CA3、CA4区神经元丢失明显.与生理盐水对照组比较,实验组海马齿状回BrdU阳性细胞升高,差异有统计学意义(P=0.006),其中注射侧较对侧更为明显.海马Noggin mRNA阳性细胞在第3天时升高,第7天时下降.结论 侧脑室注射KA致海马损伤后.成年大鼠海马齿状回颗粒细胞异常增殖可能与Noggin表达波动有关.     

慢病毒介导的Notch1基因沉默抑制软骨肉瘤SW1353细胞的增殖和侵袭

目的:探讨慢病毒介导的Notch1基因沉默对软骨肉瘤SW1353细胞增殖和侵袭的抑制作用及其机制。方法:将SW1353细胞分为对照组（未感染）、空载体组（LV-NC-shRNA慢病毒感染）和沉默组（LV-Notch1-shRNA慢病毒感染），RT-PCR和Western blot检测慢病毒的感染效果，MTT法和克隆形成实验检测各组细胞的增殖活力，Transwell小室实验检测细胞的侵袭能力，Western blot检测PCNA、MMP-2和p-AKT蛋白的表达。结果:LV-Notch1-shRNA慢病毒感染使SW1353细胞中Notch1 mRNA和Notch1、PCNA、MMP-2、p-AKT蛋白的表达均明显降低（P<0.05），显著抑制了SW1353细胞的增殖和侵袭能力（P<0.05）。结论:Notch1基因沉默可抑制软骨肉瘤SW1353细胞增殖和侵袭，其作用机制可能与下调PCNA、MMP-2和p-AKT蛋白表达有关。     

纤维连接蛋白在小鼠胚胎干细胞诱导为神经前体细胞中的作用

目的 观察采用ITSF和N2无血清培养基诱导小鼠胚胎干细胞为神经前体细胞的作用及纤维连接蛋白对神经诱导的影响。方法 小鼠胚胎干细胞的培养和无血清诱导为神经有体细胞，NBT／BCIP染色，Nestin免疫组化染色。结果 细菌培养皿法或悬滴法培养胚体，ITSF或N2无血清培养基均能将小鼠胚胎干细胞诱导为神经前体细胞。纤维连接蛋白预处理培养皿法表面，对胚体的贴壁情况影响不大，但能使无血清培养后存活的细胞增多。结论 小鼠胚胎干细胞在ITSF和N2培养基均能分化为神经前体细胞，在N2培养基中加入纤维连接有使存活的神经前体细胞数量增多。     

海马脑片LTP中钙变化的激光共聚焦扫描技术测定方法

目的 探讨采用激光共聚焦扫描技术来测定海马脑片LTP诱出过程中锥体细胞内游离钙的变化。方法 海马脑片的常规孵育及LTP的诱出，通过间隙灌流法负载荧光剂Fluo-3AM的海马脑片内游离钙的激光共聚焦测定。结果 直接用Fluo-3AM孵育脑片，可得到轮廓清晰的神经元共聚焦图像，条件刺激诱出LTP这后，海马锥体细胞胞内游离钙显著增高。结论 所述方法对实时测定LTP诱出过程中海马锥体细胞内游离钙的动态变化具有较好的效果。钙离子参与了LTP过程中的信号传递。     

慢性低剂量梭曼染毒对大鼠学习记忆及脑组织胆碱酯酶活力的影响

目的研究慢性低剂量梭曼 (soman)染毒对大鼠学习记忆及脑组织胆碱酯酶 (AChE)活力的影响。方法以皮下注射梭曼 (2 40 μg·kg 1,s .c ,sig× 14d)为染毒模型 ,采用Morris水迷宫试验进行行为检测 ,比色法测海马和前额叶皮层胆碱酯酶活力。结果Morris水迷宫试验中 ,10 μg/kg组和 40 μg/kg梭曼给药组大鼠逃避潜伏期明显延长 ,撤除平台后跨越原平台位置次数 (7.2± 1.48,6.0± 0 .0 0 )减少 ,在原平台象限游泳时间百分率 (4 7.82 % ,45 .83 % )明显下降 ;梭曼给药组大鼠海马和前额叶皮层胆碱酯酶活力均明显低于生理盐水对照组 ,且呈剂量依赖性。结论慢性低剂量梭曼染毒致学习记忆障碍 ,可能与乙酰胆碱过度堆积引起中枢毒蕈碱样胆碱能受体 (M受体 )下调有关     

几种培养方法对ES/GFP小鼠胚胎干细胞系增殖和分化能力作用比较

目的　观察采用不同的饲养层和培养基对永久表达绿色荧光蛋白的小鼠胚胎干细胞系ES/GFP的增殖、分化和绿色荧光蛋白表达的影响。方法　分别采用小鼠胚胎成纤维细胞和人胚胎成纤维细胞为饲养层 ,采用含重组人白血病抑制因子的DMEM/FCS培养基和Buffalo条件培养基培养ES/GFP细胞系。N2 无血清培养基诱导ES/GFP小鼠胚胎干细胞为神经前体细胞 ,Nestin免疫组化染色。结果　小鼠胚胎成纤维细胞和人胚胎成纤维细胞为饲养层 ,常规LIF培养液和Buffalo条件培养基均能较好维持ES/GFP细胞的高增殖能力和全能分化能力 ,对绿色荧光蛋白的表达和胚体形成、神经前体细胞的分化无明显差异。结论　人胚胎成纤维细胞可替代小鼠胚胎成纤维细胞作为ES/GFP饲养层 ,减少饲养层制备的工作量和污染的机会。Buffalo条件培养基可完全替代LIF培养基 ,降低细胞培养的成本。     

全脑缺血大鼠海马自体神经干细胞动员与5-HT1A受体表达关系的初步研究

目的探讨西酞普兰对血管性痴呆大鼠海马自体神经干细胞动员的作用及与5-HT1A受体表达的关系。方法实验动物随机分为正常对照组(NC)、假手术对照组(SC)、血管性痴呆组(4VO)和西酞普兰干预的血管性痴呆组(4VO C)共4个组;采用改良的Pulsinelli′s四血管阻断(4-vessle occlusion,4VO)方法制作血管性痴呆动物模型;BrdU免疫荧光和激光共聚焦方法观察海马齿状回神经干细胞增殖状况;RT-PCR法测定大鼠海马5-HT1A受体mRNA相对表达丰度。结果(1)海马BrdU阳性细胞主要表达在DG,多成对或成团排列于颗粒细胞层与海马门区。4VO组及4VO C组造模后1d,BrdU阳性细胞数显著下降(P=0.002),此后逐渐增加,到术后14d达峰值(4VO C组约为4VO组2倍),且4VO C组海马神经干细胞活跃增生的情况一直延续到术后21d(与4VO组比较P=0.000 17)。(2)术后1d,4VO组和4VO C组大鼠海马5-HT1A受体mRNA相对表达丰度均显著下降(P<0.01);两组从术后3~14d表达持续回升,4VO组于14d表达至高峰,而4VO C组于术后7d表达至峰值;术后21d两组受体表达均有所回落且显著高于正常水平(P<0.01)。和4VO组比较,4VO C组除术后1d组外其余各组大鼠海马5-HT1A受体mRNA表达到丰度均显著升高(P<0.01)。(3)大鼠海马DG神经干细胞增殖趋势与海马5-HT1A受体mRNA表达有明显的相关性(r=0.849 8)。结论在大鼠四血管阻断血管性痴呆模型中,全脑缺血可刺激海马DG神经干细胞增殖,且给予外源性SSRI类抗抑郁药物西酞普兰可显著增强海马神经发生,同时该作用可能与刺激海马5-HT1A受体表达有关。