microRNA-224在结肠癌细胞中的表达及意义

目的：探讨microRNA-224（miR-224）对结肠癌细胞中的表达及意义。 方法：用real-time PCR检测4种结肠癌细胞株（Caco-2、HCT116、HT-29、LoVo）和正常结肠黏膜组织中miR-224的表达水平;将HCT116细胞分别转染miR-224模拟物和阴性对照组序列,以未处理的HCT116细胞作为空白对照,用real-time PCR法检测各组细胞miR-224的表达水平,用MTT法和平板克隆实验法检测各组细胞的增殖情况,用流式细胞仪检测各组细胞周期情况。 结果：4种结肠癌细胞株miR-224的表达均明显高于正常结肠黏膜组织（均P<0.05）;与空白对照组HCT116细胞比较,miR-224模拟物转染组HCT116细胞miR-224的表达水平明显升高,增殖活力明显增强,细胞克隆数量明显增高（均P<0.05）;细胞周期G1到S期转换的趋势增强（P=0.074）;阴性对照组序列转染组HCT116细胞的各项指标差异均无统计学意义（均P>0.05）。 结论：miR-224在结肠癌细胞中表达上调,miR-224可能通过促进细胞增殖与细胞周期的演进,而在结肠癌发生发展的过程中发挥促癌基因的作用。     

大肠癌患者血浆miR-106a的表达及意义

目的研究血浆miR-106a在大肠癌患者中的表达及其与临床病理特征的关系,分析其诊断价值。方法选取3例大肠癌组
织及配对正常粘膜组织进行miRNA芯片检测,筛选出大肠癌组织中异常表达的miRNA;收集50例首治的大肠癌患者的血浆标
本和47例健康志愿者的血浆作为对照,提取血浆中总RNA,运用荧光定量PCR方法检测miR-106a在大肠癌和正常人血浆中的
表达情况。同时收集患者术后7 d血浆标本40例,分析术前、术后miR-106a的表达变化。分析术前血浆miR-106a表达与临床
病理特征间的关系,并对受试者行ROC分析。结果miRNA芯片检测大肠癌组织中miR-106a的表达较正常粘膜明显增加;与
健康对照组相比,miR-106a在大肠癌患者血浆中表达量显著上调（P=0.012）,术后患者血浆miR-106a的表达较术前明显降低
（P<0.01）。术前血浆miR-106a的表达与大肠癌患者淋巴结转移、TNM分期及分化程度均无关（P>0.05)。miR-106a 所得ROC
曲线下面积为0.661(95% CI∶0.55~0.772),区别大肠癌和正常人的敏感性为62.3%,特异性为68.2%。结论血浆miR-106a在大
肠癌患者中表达上调,可能对大肠癌的诊断具有一定临床价值。
     

结直肠癌中miR-31的表达及预测靶基因的生物信息学分析

目的 检测microRNA-31（miR-31）在结直肠癌中的表达及功能,预测其靶基因并进行生物信息学分析,为研究其作用和调控机制奠定基础。方法 采用实时荧光定量反转录聚合酶链反应（qRT-PCR）检测8种结肠癌细胞株、40例结直肠癌（colorectal cancer, CRC）患者癌组织及匹配的正常黏膜组织及33例结直肠腺瘤组织中miR-31的表达情况,并分析癌组织中miR-31表达与患者临床特征的关系。MTS法观察转染miR-31模拟物（mimics）组、抑制剂（inhibitor）组和对照组（miRControl）及空白细胞组细胞生长的差异,Western blot检测空白细胞组、miR-31 mimics和inhibitor三组细胞PCNA蛋白的表达。TargetScan、DIANA-microT、miRanda等软件预测miR-31的靶基因,并进行KEGG功能和信号通路富集分析。结果 miR-31在8种结肠癌细胞株中高表达,同时CRC患者癌组织中的表达高于腺瘤及正常黏膜组织（P<0.05）。其中癌组织和匹配的正常黏膜相比,miR-31表达明显上调（P=0.035）,但腺瘤和正常黏膜相比,差异无统计学意义（t=0.122, P=0.904）。miR-31的表达与临床病理特征间未见明显关系（P均＞0.05）。转染miR-31 mimics后,miR-31的表达明显上调且和miR-Control组及空白细胞组相比,miR-31 mimics组细胞生长加快;而转染miR-31 inhibitor组miR-31表达显著降低,细胞生长活力明显受抑制。同时转染miR-31 inhibitor组PCNA蛋白表达较miR-31 mimics组和空白细胞组显著降低。生物信息学分析miR-31靶基因功能集中于转录后及翻译水平的调节、细胞连接、迁移及细胞运动等生物学过程。信号通路主要富集于内吞作用、轴突导向、T细胞受体信号通路、Wnt及MAPK信号通路。结论 miR-31在结直肠癌中高表达,且miR-31可以促进细胞生长和增殖,其靶基因可能通过调节多种生物学过程发挥作用。     

荷叶碱防治小鼠高脂血症作用及其机制*

目的研究荷叶碱对饮食诱导的高脂血症小鼠的影响并了解其降脂机制。方法将小鼠根据饲料分为3组:正常对照组(n＝10)、模型对照组(n＝10)、干预组(n＝10)。正常对照组采取普通饮食(ANI-76A饲料:12.4%脂肪,68.8%碳水化合物,18.8%蛋白质);模型对照组采用高脂饮食诱导(高脂饲料:37.1%脂肪,42.4%碳水化合物,20.5%蛋白质);干预组在高脂饲料基础上添加了0.5%荷叶碱。小鼠自由食用,共10周。比较3组小鼠体质量、血脂、脂代谢关键酶、肝脏氧化应激的变化并研究脂质代谢通路。结果高脂饮食成功诱导出高脂血症模型小鼠:肥胖、血脂增高(P＜0.05)。干预组与模型对照组比较:小鼠体质量降低[(33.97±3.46) g比(27.62±2.87) g],血脂降低[(2.73±0.26) g比(1.91±0.21)g],均P＜0.05,但不能改善其高甘油三酯血症(P＞0.05);肝脂酶活性[(4.15±1.26) U·mL-1比(9.01±1.34) U·mL-1]及脂蛋白脂酶活性提高[(8.12±3.07) U·mL-1比(13.48±3.75) U·mL-1],且降低了肝脏氧化应激(P＜0.05)。高脂饮食诱导脂质合成基因SREBP-1c、FAS、SCD-1及PPARγ mRNA显著上调(P＜0.05),而使脂质氧化代谢基因PPARα、CPT-1a mRNA下调(P＜0.05),干预组则逆转了这些变化(P＜0.05)。结论荷叶碱能改善小鼠高脂血症,且可能与增加脂酶活性、减少氧化应激及调控脂质合成与氧化代谢相关。