海洋真菌烟曲霉H1-04发酵液中的硫代二酮哌嗪类产物及其抗肿瘤活性

目的 研究海洋来源真菌烟曲霉H1-04(Aspergillus fumigatus H1-04)发酵液中的抗肿瘤活性产物.方法 采用液液萃取、硅胶柱色谱、制备HPLC等技术,从烟曲霉H1-04的发酵产物中分离纯化活性产物.活性产物的结构经IR、MS、1H-NMR确证.采用SRB法和MTT法测试评价抗肿瘤活性.结果与结论 从烟曲霉H1-04发酵物中分离鉴定了4个硫代二酮哌嗪类化合物,分别是胶霉毒素(gliotoxin,1)、bisdethiobis(methylthio)gliotoxin(2)、bis-N-norgliovictin(3)、didehydrobisdethiobis(methylthio)gliotoxin(4).化合物1在浓度为0.1μmol·L-1时几乎能完全抑制小鼠白血病P388细胞和人肺癌A549细胞的增殖,抑制率分别为100%和99.1%;对小鼠乳腺癌tsFT210细胞也呈现很强的细胞凋亡诱导、细胞周期抑制、坏死性细胞毒等活性.化合物2～4对tsFT210细胞显示出不同程度的抗肿瘤活性.化合物2～4为首次从烟曲霉发酵物中分离得到,并首次报道2～4的抗肿瘤活性.     

人参叶微量新成分的研究

<正> 从人参(Panax ginseng C.A.Meyer)叶中分离出十七个单体化合物。用IR,FD-MS,~1H-NMR,~(13)C-NMR及化学方法等鉴定了两种微量成分:20(R)—PPD(Ⅰ)和3β6α、12β—三羟基—20(22)、24—达玛二烯—6—O—α—L—鼠李吡喃糖基—(1→2)—β—D—葡萄吡喃糖甙(Ⅱ),前者是从人参叶中得到的已知成分,后者则是一个新化合物,命名为人参皂甙—Rg_4(Ginsenoside-Rg4)。化合物(Ⅰ)为白色针晶,熔点:243～245℃,Liebermann-Burchard反应阳性。~(13)C-NMR谱示有三十个碳,表明为三萜类化合物。经与已知化合物的~(13)C-NMR谱比较,鉴定该     

放线菌野生株代谢功能的核糖体工程改造与新产抗肿瘤活性产物研究

目的利用核糖体工程技术,改造放线菌次级代谢功能,筛选获得抗肿瘤活性突变株,并对突变株新产活性产物进行研究。方法以海洋来源无活性放线菌野生株HLF-9和HLF-43为出发菌,通过单菌落挑选与平板划线培养,分离纯化链霉素抗性突变株,通过摇床液态发酵和发酵提取物乙酸乙酯萃取样品的抗肿瘤活性筛选,获得抗肿瘤活性突变株;采用活性跟踪与微量预试先导．放大实验制备组合的实验模式,与原始菌样品对照比较,在快速确定差异活性斑点基础上,组合各种色谱技术,分离纯化突变株新产抗肿瘤活性产物;根据理化性质和波谱数据鉴定化合物结构;采用MTF法测评抗肿瘤活性。结果链霉素对HLF-9和HLF-43的最低抑菌浓度分别为3和10mg·L^-1。经抗性筛选,得到对链霉素产生抗性的HLF-39突变株28株、HLF-43突变株204株。在所得突变株中,3株HLF．39突变株和14株HLF-43突变株有抗肿瘤活性,100mg·L^-1样品对K562细胞的抑制率大于20％;其中,4株分别对11、100、200和300mg·L^-1链霉素产生抗性的HLF43突变株CHS-21101、CHS-210010、CHS-220002和CHS-230001活性显著,100mg·L^-1样品对K562细胞的抑制率分别达59．5％、50．0％、44．1％和59．6％。从CHS-21101发酵物中分离得到2个该突变株新产抗肿瘤活性产物,并分别鉴定为环（4-羟脯-亮）二肽（1）和phencomycin（2）。化合物1和2对K562细胞呈抑制活性,100mg·L-1抑制率分别为33．9％和21．4％。结论利用核糖体工程抗性筛选技术,从2株无活性放线菌野生菌株成功筛选得到17株具有抗肿瘤活性的链霉素抗性突变株,从其中1株发酵物中分离鉴定了2个该突变株新产抗肿瘤活性产物。用核糖体工程技术改造无活性放线菌野生株的次级代谢功能,可筛选获得活性突变株并提供深入研究新产活性产物,从中筛选新药及其先导结构,从?     

海洋来源微生物的分离培养与抗肿瘤活性筛选

目的 从海洋环境样品中分离纯化微生物,经发酵培养与活性筛选,获取抗肿瘤活性菌株以供筛选药源活性产物,获无活性菌株以供核糖体工程转化研究。方法 通过单菌落挑选与划线培养分离纯化微生物菌株,经摇床发酵和提取操作制备活性测试样品。采用MTT法结合显微镜下细胞形态学检测的方法,测试样品的抗肿瘤活性。结果 从渤海湾驴驹河潮间带海泥样品中分离得到了微生物127株,其中真菌80株、放线菌47株。在127株中100 mg·L^-1样品浓度下对K562细胞的抑制率大于40%的活性菌株为8株,占菌株总数的6.3%(其中放线菌4株,占放线菌数的8.5%,真菌4株,占真菌数的5%),抑制率在20%～40%的放线菌6株,占放线菌数的12.7%。结论 从渤海湾海泥样品中分离得到真菌80株、放线菌47株,从中获得抗肿瘤活性真菌4株、放线菌10株,从放线菌中获得抗肿瘤活性菌株的频率远远高于真菌。活性菌株为寻找药源活性产物提供了菌株,无活性菌株则为核糖体工程拓展药源菌株来源研究提供了资源。     

国产盐肤木属植物的研究进展

盐肤木属（Rhtts）为漆树科（Anacardiaceae）植物,国产共有6种、3个变种,在境内分布广泛、资源丰富,且多药用或有经济价值。本文按植物种类与分布、药用及其它应用、化学成分、药理及生物活性等内容,以化学成分和活性为重点,归纳综述了国产本属植物的研究概况。     

双奇颗粒对小鼠抗辐射作用的初步研究

目的阐明双奇颗粒的抗辐射作用。方法分别采用雌雄小鼠,设置正常对照组、辐射对照组和给药（高、中、低剂量）组。预防给药一周后经60Coγ射线单次辐射7.5 Gy观测血液学指标,8.5 Gy观测死亡率,再对存活鼠连续给药30 d。测定辐射对雌鼠白细胞、脾和胸腺指数的影响以及对雄鼠30 d平均存活率的影响。结果雌鼠经一周预防给药后,可显著提高其白细胞、脾和胸腺指数。雄鼠经一周预防给药后照射并对存活鼠连续给药,有提高其30 d存活率趋势。结论双奇颗粒对雌雄小鼠的60Coγ射线单次辐射具有一定的保护作用。     

用磁性纳米粒辅助微波诱变新方法改造无活性放线菌代谢功能的研究

目的 探索用Fe3O4磁性纳米粒辅助微波诱变来改造无活性放线菌代谢功能的新方法并筛选获得抗肿瘤活性突变株.方法 以海洋来源无活性放线菌野生株HLF-43(1000μg/ml样品对K562细胞的抑制率为3.9%)为原始菌,对其孢子悬液在Fe3O4磁性纳米粒子存在下进行微波辐照诱变,再经抗性筛选获得新霉素抗性突变株,并经对原始菌及其突变株的发酵培养与抗肿瘤活性筛选获得活性突变株.采用MTT法用K562细胞测试抗肿瘤活性.结果 初步建立了改造放线菌代谢功能的Fe3O4磁性纳米粒辅助微波诱变新方法,并利用该方法由无活性原始株HLF-43筛选获得了新霉素抗性突变株共80株,其中28株发酵样品对K562细胞有抑制活性,100μg/ml浓度下的抑制率大于20%.活性突变株获取率达35%(28/80),所获活性突变株的遗传性状也较稳定.结论 与不加Fe3O4磁性纳米粒子的微波辐照结合新霉素抗性筛选实验相比,该方法更有利于筛选获得高浓度新霉素抗性突变株,同时活性突变株获得率也有大幅度提高,活性突变株的遗传性状也获改进.     

拓展微生物药源活性新菌株资源的新方法探索

在药源微生物活性产物研究中,分离得到的绝大多数菌株往往因无活性而被大量闲置或被选择销毁,造成前期投入的极大浪费和菌株资源开发利用效率严重低下。因此,如何将大量无活性菌株有效转化成活性菌株从而拓展药源微生物资源已成为重要研究课题。本课题组近几年一直在探索开展海洋来源无活性野生菌株的活性化转化与新产活性产物研究,并在无活性放线菌和真菌相关研究中取得了较好进展。本文简要归纳介绍包括尚未详细报道的新近进展在内的部分研究结果。     

蔓荆子活性成分vitexicarpin诱导K562细胞凋亡的机制

目的探讨vitexicarpin对人癌细胞增殖的抑制活性及其抗癌机制。方法以SRB法进行细胞毒测定，观察细胞的形态学变化并用流式细胞术分析癌细胞的凋亡率，DNA琼脂糖凝胶电泳检测凋亡细胞的DNA梯带，以Western blotting法进行蛋白质检测。结果Vitexicarpin对K562等4种人癌细胞表现了较强的增殖抑制活性。处理后的K562细胞表现出典型的凋亡形态特征、出现了剂量依赖性增加的亚二倍体峰并呈现出典型的DNA梯形条带；PARP和caspase-3被剪切、胞浆中细胞色素c增高、Bcl-2表达减少、Bax表达未见明显变化。结论Vitexicarpin通过激活线粒体调控的凋亡通路诱导K562细胞凋亡。     

洋紫荆中化学成分的分离与鉴定

目的研究洋紫荆中的化学成分.方法采用硅胶、聚酰胺、Sephedex LH-20柱色谱分离纯化,理化常数和谱学方法鉴定结构.结果 分离得到7个化合物和1个混合物,鉴定为friedelin(1)、24(R)-9,19-cyclolanost-3-one-24,25-diol(2)和24(S)-9,19-cyclolanost-3-one-24,25-diol(3)的混合物、豆甾烷-3-酮(4)、豆甾烷-4-烯-3-酮(5)、豆甾烷-3β-醇-6-酮(6)、豆甾烷-5-烯-3β-醇-7-酮(7)、β-谷甾醇(8)、大黄素甲醚(9).结论 化合物2和3的混合物、5、7、9为首次从该属植物中分离得到.