APP17肽对链佐星-大鼠海马胰岛素信号转导相关蛋白表达的影响

目的　通过免疫组化的方法 ,研究APP1 7肽对链佐星 (STZ)诱发的糖尿病大鼠海马神经元Akt PKB ,CREB ,GSK 3β以及Bax ,Bcl 2等蛋白表达的影响。方法　用STZ腹腔注射诱发糖尿病模型 ,并皮下注射APP1 7肽对糖尿病组进行治疗。 1 0周后行通道水迷宫测定 ,取脑组织进行Akt PKB ,GSK 3β以及Bax ,CREB ,Bcl 2的免疫组化染色。结果　糖尿病组海马内Akt PKB ,CREB的阳性反应神经元数目减少 ,染色淡。GSK 3β,Bax阳性神经元较对照组明显增多 (P <0 .0 1 )。Bcl 2阳性神经元数目 3组间相比无明显差异。糖尿病APP1 7肽治疗组与对照组相近。结论　糖尿病脑病大鼠海马存在胰岛素信号转导途径相关和凋亡级联反应相关蛋白的表达异常 ;APP1 7肽能改善这些蛋白表达 ,使之接近正常     

APP11肽对糖尿病大鼠神经病变的治疗作用

重组人神经生长因子 (ｒｈＮＧＦ)治疗糖尿病外周神经病变 (ＤＰＮ)在西方国家已进入第三期临床试验 ,初步结果正如人们所期望的那样 ,ｒｈＮＧＦ能特异性地改善小纤维外周神经元的功能〔1〕。我们几年来的研究表明ＳＴＺ糖尿病鼠不仅存在ＤＰＮ ,而且脑和脊髓神经元也存在明显的神经退行性病变。特别在海马神经元尤为明显。但这种神经退行性病变可被皮下注射ＡＰＰ (β ａｍｙｌｏｉｄｐｒｅｃｕｒｓｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ) 17肽(ＡＰＰ6 95中 319～ 335肽段 )而获明显改善〔2 4〕。最近 ,我们在ＡＰＰ分子的Ｎ端发现了一个新的多肽片段 ,定…     

救脑益智胶囊水提物对人神经母细胞瘤株SY5Y信号转导的影响

目的 :通过观察救脑益智胶囊对人神经母细胞瘤株SY5Y信号转导的影响 ,探讨此药促进神经细胞生长的可能机理。方法 :以人神经母细胞瘤株SY5Y为细胞模型 ,分为正常对照组和加药组。收集对照组及加药组细胞裂解物 ,取上清用Lowry法进行蛋白定量 ,将总蛋白量相等的样品进行免疫沉淀Westernblot分析。 结果 :与正常对照组比较 ,加药组SY5Y细胞蛋白激酶B(proteinkinaseB ,Akt/PKB) ,cAMP反应元件结合蛋白 (cAMPresponseelementbindingprotein ,CREB)、磷酸化的CREB (phosphorylatedCREB ,P-CREB)表达增加 ,细胞色素C(cytochromeC ,cytC¹)表达减少。结论 :救脑益智胶囊的生药水提取液能促进SY5Y神经母细胞存活信号通路中Akt/PKB ,P-CREB的表达 ,推测其促进体外培养的SY5Y神经母细胞生长的机理与其促进神经元信号通路中有关蛋白质的表达有关。     

APP17肽对IRS-1在糖尿病小鼠脑内分布的影响

为了观察 APP17肽对糖尿病小鼠胰岛素受体底物 -1( IRS-1)的影响 ,本研究用链脲佐菌素诱发小鼠糖尿病模型 ,并皮下注射 APP17肽 ( β-淀粉样肽前体蛋白 3 19～ 3 3 5 )给予治疗 ,4周后取脑组织进行 IRS-1免疫组化染色。结果显示 ,糖尿病组IRS-1阳性反应细胞广泛分布于皮层、海马、丘脑、下丘脑等部位 ,而正常对照组及 APP17肽治疗组仅在皮层、海马见有阳性反应细胞 ,且着色淡。以上结果表明 :糖尿病小鼠脑内多个区域的神经元存在较多的 IRS-1阳性细胞 ,APP17肽能使 IRS-1阳性反应细胞出现的部位和数量正常化 ,从而改善糖尿病小鼠海马神经元的退行性变     

APP17肽对快速老化小鼠SAMP10学习、记忆功能和海马神经 细胞线粒体氧化应激水平的影响

目的：观察APP17肽(β-Amyloid precursop protein,APP,319-335肽段)对快速老化小鼠SAMP10（senescence accelerated mouse/pr one 10）学习、记忆功能及海马神经细胞线粒体氧化应激的影响。方法:4月龄的SAMP10小鼠随机分为模型组和APP17肽治疗组，正常对照组采用抗快速老化小鼠SAM R1(senescence accelerated mouse/resistance 1)。APP17肽治疗组给予皮下注射APP17肽 ，每只每次0.34 μg，每周3次；模型组和正常对照给予等量的生理盐水；28周后成模。应 用水迷宫试验观察小鼠学习、记忆功能的变化，应用羟胺法和硫代巴比妥酸（TBA）比色法 分析海马神经细胞线粒体氧化应激反应水平。结果:(1)水迷宫结果显示 ，模型组小鼠存在明显的学习和记忆功能障碍，其游完全程的时间和错误反应次数均较正常 对照组增多（P<0.05）;APP17肽治疗组小鼠的行为学障碍明显轻于模型组，其上述 的水迷宫检测结果与正常对照组比较无显著差异。(2)模型组小鼠海马神经细胞线粒体SOD活 性明显低于正常对照组（P<0.01），MDA含量显著高于正常对照组（P<0.01）；A PP17肽治疗组检测结果与正常对照组接近，SOD活性高于模型组（P<0.05），而MDA含 量低于模型组（P<0.01）。结论:快速老化小鼠SAMP10存在学习和 记忆功能障碍；而且其海马神经细胞线粒体氧化应激反应明显加剧。APP17肽具有清除自由 基和抑制氧化应激反应的作用，从而提高脑组织的抗氧化能力，保护学习、记忆功能。     

2型糖尿病KKAy小鼠海马神经元存活信号转导途径的异常及APP17肽对其的改善作用

目的　观察APP17肽对 2型糖尿病KKAy小鼠大脑海马神经元一些信号转导蛋白表达的影响。方法　将KKAy小鼠分为正常对照组 (C组 )、糖尿病组 (DM组 )和APP17肽治疗组 (DM +APP17P组 )。APP17肽皮下注射 ,每周 3次 ,每次 8μg·kg-1。 12wk后将 3组小鼠颈部离断 ,处死 ,冰浴中快速分离海马组织 ,匀浆后 ,用于免疫沉淀并蛋白印迹检测 ,部分快速灌注固定做免疫组化染色和Tunel细胞染色。结果　DM组 pMAPK的表达低于C组和DM +APP17P ;CREB、pCREB、Bax、Bcl 2的表达 3组之间差异无显著性。结论　 2型糖尿病KKAy小鼠存在海马胰岛素信号转导通路的异常 ,主要表现为Ras途径和PI3 K两条途径的异常。这种信号转导途径的异常可通过神经元一定程度上的自我调节而改善 ,不出现凋亡状态 ;App17肽作为神经营养因子能激活海马神经元存活信号转导通路上游成分 ,从而使存活信号转导通路恢复正常     

短肽N328-332对人神经母细胞瘤株SY5Y生长的影响

目的:分析淀粉样β蛋白前体蛋白N端328-332对人神经母细胞瘤株SY5Y生长的影响,在体外寻找具有神经营养作用、促进神经细胞生长的最适浓度,为进一步细胞损伤的保护及药物体内研究提供理论依据。方法:细胞分组:根据实验目的不同,分组处理如下:第一步分为对照组、短肽N328-3322.5,5,10,20,40,80,160μmol/L组。第二步分为对照组、短肽N328-33240μmol/L组。以MTT代谢率测定细胞存活率以筛选肽对神经细胞生长促进的最佳有效浓度。以MTT代谢率测定细胞存活率、细胞计数观察细胞增长情况、乳酸脱氢酶漏出率观察细胞死亡率和WesternBlotting检测P-CREB、Bcl-2表达水平为观察指标,分析短肽N328-332对人神经母细胞瘤株SY5Y生长的影响。结果:①从10μmol/L起,短肽N328-332即对SY5Y细胞生长有促进作用,其最小有效浓度为20μmol/L,40μmol/L促进作用最强,80μmol/L开始作用减弱,故选用40μmol/L浓度作为以下试验浓度。②短肽N328-33240μmol/L加药组代表细胞存话率的A值高于对照组,组间比较差异有显著性意义(0.9741±0.0047,0.6001±0.0019,P<0.01。③短肽N328-33240μmmol/L加药组乳酸脱氢酶漏出率明显低于对照组,组间比较差异有显著性意义(84.9135±31.5759,199.6252±40.7273,P<0.01。④从接种第4天始,短肽N328-332组SY5Y细胞数增加,与对照组相比,差异有显著性意义(P<0.05)。⑤短肽N328-33240μmol/L组P-CREB、Bcl-2蛋白表达高于对照组(37424.08±83.59,34957.24±78.03,19110.24±45.80,2761.36±58.61,P<0.05)。结论:短肽N328-332对SY5Y细胞具有神经营养作用,40μmol/L浓度,效果优于其他浓度。     

金思维对老年性痴呆模型大鼠突触后致密区蛋白的影响

目的 观察Aβ对突触后致密区PSD-95和Shank-1蛋白的改变以及中药金思维对其影响。方法 应用凝聚态Aβ1-42在大鼠海马内注射以建立老年性痴呆（Alzheimer’s disease,AD）动物模型;4周后采用Morris水迷宫测试大鼠学习记忆功能;采用免疫组化法和计算机图像分析技术测定海马CA1区突触后致密区PSD-95和Shank-1蛋白阳性神经元数目及光密度值。结果 Morris水迷宫实验：模型组大鼠在定位航行试验中隐匿平台平均逃避潜伏期较正常组显著延长,空间探索试验中跨越原平台位置次数明显减少（P〈0．01）;金思维组大鼠平均逃避潜伏期较模型组显著缩短,跨越原平台位置次数明显增加（P〈0．01）;但与多奈哌齐组和正常组比较差异无显著性（P〉0．05）。免疫组化实验：模型组和正常组大鼠海马CA1区PSD-95阳性细胞数、Shank-1阳性细胞数比较差异有显著性（P〈0．01）;金思维组海马CA1区PSD-95、Shank-1阳性细胞数与模型组比较差异有显著性（P〈0．05）,但与多奈哌齐组和正常组比较差异无显著性（P〉0．05）。结论 金思维对Alzheimer病模型大鼠的学习记忆功能减退具有改善作用,可能与促进海马神经元PSD-95、Shank-1的表达,恢复突触的结构和功能,增强突触的可塑性有关。     

C－18柱快速滤层脱盐法

Ｃ－１８柱快速滤层脱盐法郭育红，王德心，姬志娟，盛树力（首都医科大学宣武医院，北京１０００５３；中国医学科学院药物研究究所，北京１０００５０）ＲＡＰＩＤＤＥＳＡＩＮＡＴＩＯＮＢＹＣ－１８ＢＡＴＣＨＴＲＥＡＴＭＥＮＴ￥ＧＵＯＹｕ－Ｈｏｎｇ，ＷＡＮＧＤｅ...     

APP17肽对老年性痴呆模型小鼠学习记忆能力及海马神经细胞线粒体自由基水平变化的影响

目的：观察APP17肽（β-Amyloidprecursop protein，APP，319—335肽段）对APP转基因小鼠（APP695V717I）学习、记忆能力及海马神经细胞线粒体自由基水平变化的影响。方法：3月龄的APP695转基因小鼠随机分为模型组和APP17肽治疗组，正常对照组采用月龄和性别相匹配的C57BL／6J小鼠。