荧光定量 PCR与半定量PCR检测HBV DNA的对比分析

目的：对照分析荧光定量PCR与半定量PCR检测血清HBV DNA的载量，为临床基因检测实验室提供方法学选择依据。 方法： 取164份临床检测标本各用荧光定量PCR与半定量PCR检测，结果作统计学分析。 结果: 两种检测方法的灵敏度和特异度没有显著差异（χ2 =1.75，P>0.05）。 结论: 临床基因检测实验室可用半定量PCR法替代荧光定量 PCR法检测血清HBV DNA的载量。     

葛根素抑制支气管哮喘小鼠气道炎症和TSLP介导的Th2免疫作用的研究

目的：研究葛根素对慢性哮喘小鼠模型气道炎症和Th2免疫的影响及其机制。方法：将BALB/c小鼠32只随机均分为正常组、哮喘组、葛根素组和布地奈德组,每组8只。除正常组外,其余各组采用卵白蛋白(ovabumin,OVA)致敏和激发,连续12周,建立慢性哮喘小鼠模型。末次激发24 h后,使用小鼠肺功能仪进行气道反应性测定,苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织炎性细胞浸润情况,过碘酸雪夫(PAS)染色观察杯状细胞增生情况,用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测4组小鼠血清总 IgE和支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中Th2细胞因子(白介素-4、白介素-13)水平。Western blot观察肺组织胸腺基质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)的蛋白表达。结果：与正常组比较,葛根素组、布地奈德组、 哮喘组气道阻力、气道炎症,血清总IgE,BALF中白介素-4、白介素-13以及肺组织TSLP蛋白表达明显增高(P ＜ 0.05)。与哮喘组比较,葛根素组、布地奈德组各项观测指标均明显降低(P ＜ 0.05)。葛根素组和布地奈德组气道PAS阳性上皮细胞数/支气管较哮喘组下降(P ＜ 0.05)。结论：葛根素抑制慢性哮喘小鼠气道炎症、气道高反应性和Th2免疫,这可能与抑制TSLP的表达有关。     

柯萨奇病毒A组16型病毒株VP1基因序列测定及进化分析研究

目的　通过检测分析2015年杭州市柯萨奇病毒A组16型（CA16）病毒株VP1区核苷酸序列,掌握杭州市CA16的流行情况及种系进化关系,为手足口病的预防和治疗提供支持,同时为CA16疫苗株的选择提供依据。方法　收集2015年杭州市儿童医院256例临床资料齐全且临床诊断为手足口病患儿的粪便或咽拭子,利用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）扩增CA16病毒株VP1区核苷酸序列（约1 020 bp）,测序后利用DNASTAR和Primer Premier 5.0进行序列比对分析,并用Mega 3.1软件建立检测样本VP1区序列与GenBank上CA16参考毒株VP1核苷酸序列的系统发育树。结果　共分离到80株CA16阳性病毒。序列比对分析结果显示,CA16分离株的核苷酸同源性为90.8%～100.0%,氨基酸同源性为99.5%～100.0%。系统发育树分析结果显示,17株CA16全部属于B1基因亚型,并且同时存在B1a和B1b两个进化分支,其中4株属于B1a亚型,13株属于B1b亚型。结论　2015年杭州市CA16病毒株属于B1基因亚型,与国内外某些地区手足口病病原学及分子进化研究结果一致,有望成为疫苗候选株作进一步研究。     

全自动核酸提纯及实时荧光PCR系统的性能验证与评价

目的 评估全自动核酸提取纯化及实时荧光PCR分析系统检测新型冠状病毒核酸的性能。方法 根据新型冠状病毒感染防控方案,研究购自上海生工的全自动核酸提取纯化及实时荧光PCR分析系统、2019-nCoV试剂盒、不同浓度的新型冠状病毒核酸检测标准品,对样品的阴阳性符合率、精密性、变异系数、最低检出限、重复性、检测时长等指标进行检测,并根据检测结果验证、评估自动核酸提取纯化及实时荧光PCR分析系统性能。结果 样本的阴、阳性符合率均为100.00%,精密性阳性符合率均为100.00%,变异系数(coefficient of variation,CV)为≤5.00%,最低检出限循环阈值(cycle threshold, Ct)<43.00,阳性检出率为100.00%,重复性阴、阳性符合率均为100.00%,设备检测时长2h以内。结论 根据本研究结果,该系统特异性强、重复性好,同时最低检出限和精密性均符合现场使用要求,可有效降低操作风险,且检测时长较传统PCR短,可大规模适用于口岸一线。     

芹菜素对哮喘小鼠转录激活蛋白3及Th_2型细胞因子抑制作用的实验研究

目的研究芹菜素对哮喘小鼠2型辅助性T细胞(Th2)优势应答的抑制作用及其机制。方法选择32只6周龄SPF级BALB/c小鼠,随机分为4组,每组8只:正常组(A组)、哮喘组(B组)、芹菜素高剂量治疗组〔C组,20 mg/(kg.d)〕、芹菜素低剂量治疗组〔D组,2 mg/(kg.d)〕。卵白蛋白(OVA)致敏和激发制作哮喘模型。药物治疗组以芹菜素溶于1%二甲基亚砜(DMSO)腹腔注射。小鼠末次雾化吸入24 h后,用小鼠肺功能仪检测气道对乙酰胆碱(Ach)阻力;苏木精-伊红(HE)染色观察气道炎症浸润情况;支气管肺泡灌洗液(BALF)瑞氏染色计数嗜酸性粒细胞百分比;酶联免疫吸附(ELISA)法测定血清总IgE、BALF液中Th2型细胞因子〔白细胞介素(IL)4、IL-13〕;免疫印迹(Western blot)测定肺组织中信号转导和转录激活蛋白3(GATA-3)表达水平。结果与正常组比较,哮喘组Ach气道阻力、气道炎症、BALF细胞计数和嗜酸性粒细胞分类计数、血清总IgE、BALF中IL-4、IL-13以及肺组织GATA-3蛋白表达明显增高(P0.05)。与哮喘组比较,芹菜素治疗组各项指标均明显降低(P0.05),而且高、低剂量组之间差异有统计学意义(P0.05)。结论芹菜素通过降低肺组织GATA-3和Th2细胞因子的表达而降低哮喘小鼠气道炎症和气道高反应性,具有潜在的临床应用前景。     

转化生长因子β1单核苷酸多态性与支气管哮喘的关系及与CD_(14)的作用

转化生长因子β1(TGFβ1)由于其独有的促炎和抗炎双重作用以及促纤维化作用,在支气管哮喘(以下简称哮喘)气道重塑中具有中心地位~[1].本研究观察哮喘患者TGFβ1单核苷酸多态性与哮喘相关表型的关系,探索TGFβ1与CD14间的交互作用.     

六字诀治疗慢性阻塞性肺疾病的价值及其应用

慢性阻塞性肺疾病（COPD）是一种异质性慢性疾病,发病率和死亡率呈逐年上升趋势。药物治疗COPD虽然有一定作用,但不能有效逆转肺功能下降或疾病进展。肺康复是COPD患者的治疗手段之一,六字诀兼具预防和治疗双重作用,可有效改善COPD患者的临床症状、运动能力和生活质量。     

三氧化二砷对哮喘豚鼠肺内核因子-κB表达的影响

目的：研究Ａｓ２Ｏ３对哮喘豚鼠肺内核因子－κＢ（ｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒ－ｋａｐｐａＢ，ＮＦ－κＢ）表达的影响及其作用机制。方法：豚鼠３０只随机分为３组，即对照组、哮喘组和Ａｓ２Ｏ３（２ｍｇ／ｋｇ）治疗组。采用免疫组织化学染色技术，即小鼠抗大鼠ｐ６５单克隆抗体（Ｆ－６）、生物素化马抗小鼠ＩｇＧ、二氨基联苯胺（ＤＡＢ）显色检测豚鼠气道壁ＮＦ－κＢ；计算机图像分析技术对气道壁ＮＦ－κＢ表达进行定量检测。结果：对照组豚鼠整个肺组织包括气管、支气管、肺泡和脏层胸膜构成了一个ＮＦ－κＢ阳性（ＮＦ－κＢ＋）细胞网络，其中支气管壁胞核ＮＦ－κＢ＋细胞密度为（２２０±７２）／ｍｍ２上皮面积；与对照组相比，哮喘组豚鼠气道壁胞核ＮＦ－κＢ＋细胞密度显著增加（Ｐ＜０．０１）；哮喘豚鼠经Ａｓ２Ｏ３处理后，气道壁胞核ＮＦ－κＢ＋细胞密度显著下降（Ｐ＜０．０１），但与对照组相比仍较高（Ｐ０．０１８）。结论：ＮＦ－κＢ激活增加是支气管哮喘重要的发病机制之一；下调肺内ＮＦ－κＢ激活细胞数量可能是Ａｓ２Ｏ３治疗哮喘的一个重要机制。     

乙型肝炎病毒血清标志物的再认识

临床上,抗原抗体的检测一直是病毒性肝炎病原学诊断的常用方法,但也存在着许多难以解释的临床现象.随着分子生物学的飞速发展,特别是PCR技术的广泛应用,对这种临床现象的认识逐步清晰起来.