吲哚胺-2,3双加氧酶:支气管哮喘免疫治疗的新靶点

支气管哮喘(简称哮喘)是多基因参与的具有遗传易感性的慢性气道炎症性疾病,其发病涉及多种炎症细胞、炎性介质和复杂的细胞因子网络,以血清IgE增高,肺组织嗜酸粒细胞浸润和气道高反应性为显著的临床特征[1].现认为,哮喘是树突状细胞(DC)介导的以Ⅱ型辅助性T细胞(Th2)优势免疫为特点的气道变应性疾病[2].吲哚胺-2,3双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)是色氨酸沿犬尿酸途径分解代谢的限速酶[3].     

7株不同原核质粒表达丙型肝炎核心蛋白的差异研究

目的通过比较不同原核质粒表达丙型肝炎核心蛋白(CORE)的差异,筛选出能高效表达CORE的原核质粒。方法用PCR扩增并获得CORE基因,扩增产物分别构建到7种不同原核表达质粒中,重组质粒用IPTG诱导表达,聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)初步鉴定表达产物,并经Western blot验证。结果 PCR及双酶切验证表明CORE基因成功构建到7种原核质粒中,SDS-PAGE验证各融合质粒表达目的蛋白存在差异,其中pTrc-CKS-CORE及Pmbp-C-CORE可见相应的融合蛋白表达,以pTrc-CKS-CORE表达量高,表达产物经Western blot验证表达成功。结论成功构建7株不同CORE原核表达质粒,各融合质粒表达CORE存在较大差异,筛选出高表达CORE质粒,为下一步研究奠定基础。     

Toll样受体3单核苷酸多态性与中国东南方汉族人群哮喘关系的研究

目的:探讨tlr3 单核苷酸多态性(snps)与中国东南方汉族人群哮喘发病危险性和哮喘相关表型的关系?方法:挑选位于tlr3第4外显子区的非同义snps rs3775291?连续性招募哮喘患者318人,正常对照352人?采用多重pcr结合标签阵列单碱基延伸技术进行基因分型?通过病例-对照研究分析该位点与哮喘及哮喘表型的关系?结果:rs3775291在整体上与哮喘发病危险度无相关性,但是与过敏性哮喘独立相关,ga+aa基因型降低过敏性哮喘发病危险性31%(校正or=0.69,95%ci=0.49－0.97)?携带ga或aa基因型的哮喘患者比gg基因型者发生夜间哮喘的机会少,但与哮喘患者的外周血嗜酸性粒细胞?血浆总ige?哮喘严重度分级无相关性?结论:tlr3 snps与哮喘密切相关,这对筛选哮喘高危人群和哮喘的预防有重要意义?     

新IκBα突变体基因转染对人外周血来源的树突状细胞的作用

哮喘是T细胞介导的嗜酸细胞性气道变应性炎症。作为功能最强的抗原递呈细胞，树突状细胞（DC）在T细胞免疫偏移中起关键作用。核因子κB（NF-κB）系p50／p65异源二聚体，IκBα为NF-κB抑制剂（IκB）家族中最重要的成员，两者结合以三聚体形式位于静止的细胞质中。IκBαN端丝氨酸（Ser）32／36位点发生磷酸化和降解作用，是NF-κB激活的共同途径。研究表明，NF-κB过度激活是哮喘慢性气道炎症持续和扩大的重要基础。最近，     

葛根素抑制支气管哮喘小鼠气道炎症和TSLP介导的Th2免疫作用的研究

目的：研究葛根素对慢性哮喘小鼠模型气道炎症和Th2免疫的影响及其机制。方法：将BALB/c小鼠32只随机均分为正常组、哮喘组、葛根素组和布地奈德组,每组8只。除正常组外,其余各组采用卵白蛋白(ovabumin,OVA)致敏和激发,连续12周,建立慢性哮喘小鼠模型。末次激发24 h后,使用小鼠肺功能仪进行气道反应性测定,苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织炎性细胞浸润情况,过碘酸雪夫(PAS)染色观察杯状细胞增生情况,用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测4组小鼠血清总 IgE和支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中Th2细胞因子(白介素-4、白介素-13)水平。Western blot观察肺组织胸腺基质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)的蛋白表达。结果：与正常组比较,葛根素组、布地奈德组、 哮喘组气道阻力、气道炎症,血清总IgE,BALF中白介素-4、白介素-13以及肺组织TSLP蛋白表达明显增高(P ＜ 0.05)。与哮喘组比较,葛根素组、布地奈德组各项观测指标均明显降低(P ＜ 0.05)。葛根素组和布地奈德组气道PAS阳性上皮细胞数/支气管较哮喘组下降(P ＜ 0.05)。结论：葛根素抑制慢性哮喘小鼠气道炎症、气道高反应性和Th2免疫,这可能与抑制TSLP的表达有关。     

芹菜素对哮喘小鼠转录激活蛋白3及Th_2型细胞因子抑制作用的实验研究

目的研究芹菜素对哮喘小鼠2型辅助性T细胞(Th2)优势应答的抑制作用及其机制。方法选择32只6周龄SPF级BALB/c小鼠,随机分为4组,每组8只:正常组(A组)、哮喘组(B组)、芹菜素高剂量治疗组〔C组,20 mg/(kg.d)〕、芹菜素低剂量治疗组〔D组,2 mg/(kg.d)〕。卵白蛋白(OVA)致敏和激发制作哮喘模型。药物治疗组以芹菜素溶于1%二甲基亚砜(DMSO)腹腔注射。小鼠末次雾化吸入24 h后,用小鼠肺功能仪检测气道对乙酰胆碱(Ach)阻力;苏木精-伊红(HE)染色观察气道炎症浸润情况;支气管肺泡灌洗液(BALF)瑞氏染色计数嗜酸性粒细胞百分比;酶联免疫吸附(ELISA)法测定血清总IgE、BALF液中Th2型细胞因子〔白细胞介素(IL)4、IL-13〕;免疫印迹(Western blot)测定肺组织中信号转导和转录激活蛋白3(GATA-3)表达水平。结果与正常组比较,哮喘组Ach气道阻力、气道炎症、BALF细胞计数和嗜酸性粒细胞分类计数、血清总IgE、BALF中IL-4、IL-13以及肺组织GATA-3蛋白表达明显增高(P0.05)。与哮喘组比较,芹菜素治疗组各项指标均明显降低(P0.05),而且高、低剂量组之间差异有统计学意义(P0.05)。结论芹菜素通过降低肺组织GATA-3和Th2细胞因子的表达而降低哮喘小鼠气道炎症和气道高反应性,具有潜在的临床应用前景。     

三氧化二砷对哮喘小鼠肺内树突状细胞作用的研究

目的:研究哮喘小鼠肺内树突状细胞(DC)分布、募集的特点及三氧化二砷(As_2O_3)对其的影响。方法:将 BALB/c 小鼠30只随机分为3组,即对照组、模型组和 As_2O_3组。采用免疫组织化学染色技术检测小鼠肺、气道 DC;计算机图像分析技术对 DC 进行定量检测。结果:对照组小鼠整个肺组织包括气管、支气管、肺泡和脏层胸膜构成了一个非淋巴样树突状细胞(NLDC)-145~+DC 网络,NLDC-145~+DC 密度从大气道到小气道分别为(500±50)个/mm~2到(60±10)个/mm~2上皮面积(P<0.05);模型组小鼠肺内 NLDC-145~+DC 分布与对照组相似,但密度较对照组显著增加(P<0.01);As_2O_3组小鼠肺内 NLDC-145~+DC 分布与模型组相似,但密度显著下降(P<0.01)。结论:树突状细胞在整个肺组织构成了一个完整的 NLDC-145~+DC网络;下调肺内 DC 密度,而不影响其肺内分布,可能是 As_2O_3治疗哮喘的一个重要机制。     

粉防己碱抑制支气管哮喘小鼠肺组织核因子-κB和诱导型一氧化氮合酶的研究

目的：探讨粉防己碱对支气管哮喘(简称哮喘)小鼠肺组织核因子-κB(NF-κB)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达、气道炎症和气道高反应性的影响。方法将32只 SPF 级 BALB/c 小鼠随机分为正常组、哮喘组、地塞米松组(激素组)和粉防己碱组(Tet 组)。卵白蛋白(OVA)致敏和激发建立哮喘小鼠模型。末次激发24 h 后,肺功能仪测定小鼠气道阻力;HE 染色观察气道炎症细胞浸润;ELISA 检测血清总 IgE、OVA 特异性 IgE(OVA-sIgE)及 BALF 中 Th2细胞因子 IL-4和 IL-13水平;显微镜下计BALF 中细胞总数,瑞氏染色计嗜酸粒细胞分类计数;Western blot 检测肺组织 NF-κB 和 iNOS 蛋白表达水平。结果与正常组比较,哮喘组气道阻力、气道炎症浸润、BALF 炎症细胞总数和嗜酸粒细胞分类计数、血清总 IgE 和 OVA-sIgE、BALF 中 IL-4和 IL-13以及 NF-κB 和 iNOS 蛋白表达水平均显著增高(P <0.05);与哮喘组比较,激素和 Tet 干预组上述各项指标均显著降低(P <0.05)。结论粉防己碱可下调哮喘小鼠肺组织 NF-κB 和 iNOS 表达并抑制气道炎症和气道高反应性。