酶标记免疫分析法及其在体液中药物测定的应用

1959年Berson及Yalow建立了放射免疫分析法(RIA),其灵敏度可达到微微克(10~(-12)g,pg)水平,目前已应用于测定许多抗原性蛋白质、酶和多肽激素,也用于测定半抗原性化合物如甾体激素类药物。RIA法存在一定缺点,如试剂的半衰期短、费用高,需要有同位     

条纹斑竹鲨鱼脂肪酸结合蛋白(FABPs)cDNA的克隆与序列分析

脂肪酸结合蛋白(fatty acid binding protein,FABP)在调节脂肪酸代谢、信号传导以及细胞的增殖与分化过程中起着重要的作用。为揭示FABP在肝脏再生过程中的作用,研究了从前期构建的条纹斑竹鲨鱼肝cDNA文库中克隆到编码FABP的cDNA全序列,并对其表达产物的理化性质、结构和空间分布特点以及在肝脏再生过程中的表达进行了分析,结果表明:条纹斑竹鲨鱼FABP的cDNA全长为1194bp,编码一个由115个氨基酸残基组成的无跨膜区的胞外蛋白,该蛋白的理论Mr为13065.1,理论等电点(pI)为8.81。生物信息学分析结果显示:该蛋白与来自铰口鲨、鸡、短尾负鼠和人的FABP在氨基酸水平上分别具有74%、56%、55%和52%的同源性,其进化地位与同属于海洋软骨鱼类的铰口鲨接近。进一步的分析发现该蛋白和其它物种来源的脂肪酸结合蛋白的结构域相似,它们均含有3个蛋白激酶C(PKC)磷酸化位点、1个N-酰基化位点和2个酪蛋白激酶II磷酸化位点。同源模建分析结果表明该蛋白与人肌肉FABP的A链一样具有一个高度保守的活性区,该活性区由第1～111氨基酸残基组成。本研究进一步考察了FABP编码基因在鲨鱼肝...     

木榄甘油醛-3-磷酸脱氢酶全长cDNA的克隆及其序列分析

甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)是糖酵解过程和卡尔文循环中的关键酶,在糖代谢和能量代谢过程中起着重要的作用。为揭示GAPDH在植物耐盐过程中的作用,研究了从前期构建的盐胁迫下木榄幼叶cDNA文库中克隆到编码GAPDH的cDNA全序列,并对其编码蛋白的理化性质、结构特点和空间分布特点进行了分析。序列分析结果表明:木榄GAPDH的cDNA全长为1482bp,编码区为1218bp,编码一个由405个氨基酸残基组成蛋白质,理论Mr为43.4k,理论等电点(pI)为8.65。基于该蛋白的氨基酸序列分析基础上的系统发育分析表明木榄的进化地位与毛果杨较为接近。结构分析和预测结果显示:木榄的GAPDH为无信号肽和跨膜区的亲水性蛋白,含有GAPDH的保守结构域NADB-Rossmann(71-222aa)和Gp_dh_C(227-383aa)。同源模建分析结果表明:该蛋白与菠菜相比具有1个高度保守的活性区,该活性区由第70～405氨基酸残基组成。     

鹿角脱盘多肽的分离纯化及其降糖活性的研究

以鹿角脱盘为原材料,经稀醋酸提取,再利用Resource S、Superdex 75、反相HPLC进一步纯化和质谱检测确定其Mr为7 127.6的多肽,命名为鹿角脱盘多肽,对其进行了理化分析。通过对KK-ay小鼠单次给药观察粗品的降糖效果,并采用高胰岛素诱发HepG2细胞建立胰岛素抵抗模型,初步研究了鹿角脱盘多肽对胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖消耗的影响。结果表明鹿角脱盘多肽具有明显的降糖活性,不仅能够降低KK-ay小鼠的血糖水平,并且200、100μg/mL粗品和100μg/mL鹿角脱盘多肽均能显著促进胰岛素抵抗HepG2细胞模型的葡萄糖消耗。     

银杏内酯对NaCN及缺糖引起的PC12细胞凋亡的保护作用

利用ＭａＣＮ及缺糖引起的ＰＣ１２细胞的损伤模型,研究了银杏内酯（ｇｉｎｋｇｏｌｉｄｅｓ）对神经细胞损伤的保护作用。结果表明,该药物对ＰＣ１２细胞损伤有显著的改善作用并能显著降低凋亡细胞比率。提示银杏提取物（ＥＧｂ）中银杏内酯在对神经系统的保护机制中起重要作用。     

谈药学理科基地的实验教学

国家设立理科基地,目的是为了更好地培养高层次的理科实用人才,以适应21世纪对人才的需求。对于药学类专业的学生,他们将是生物、医药、仪器、化工等方面理论和技术的复合型专业人员,应具备基础扎实、     

鲨肝活性肽对对乙酰氨基酚致小鼠急性肝损伤的保护作用

目的探讨鲨肝活性肽(sHSS)对对乙酰氨基酚(AAP)致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法用AAP(200 mg·kg^-1,ip)诱导小鼠急性肝损伤,用改良赖氏法测血清ALT和AST,通过光镜和电镜观察肝细胞显微和亚显微结构的变化,用流式细胞仪分析肝细胞凋亡,同时用RT-PCR方法分析Fas mRNA表达水平。结果sHSS 3.0和1.5 mg·kg^-1可显著降低肝损伤小鼠血清ALT和AST的水平;改善模型鼠肝组织细胞坏死及炎症反应;高剂量sHSS(3 mg·kg^-1)对肝线粒体具有保护作用,下调Fas mRNA的表达水平,并具有抗凋亡作用。结论sHSS对AAP诱导的肝损伤具有明显的保护作用,其机制可能与保护肝线粒体、抑制Fas基因表达及肝细胞凋亡有关。     

卡介菌多糖和卡介苗素的免疫调节作用的比较研究

目的比较卡介菌多糖 (BCG PSA)与卡介苗素 (BCG PSN)的免疫调节作用。方法运用碳粒廓清、溶血素测定、二硝基氟苯所致迟发型变态反应等实验方法测定BCG PSA及BCG PSN对小鼠的免疫调节功能。结果BCG PSA能有效地提高正常小鼠和免疫低下小鼠巨噬细胞的吞噬功能 ,提高非特异性免疫功能 (P <0 .0 5 ) ;能提高免疫小鼠血清中溶血素的含量 ,增强动物的特异性体液免疫功能 (P <0 .0 5 ) ;能减轻迟发型变态反应所致水肿 (P<0 .0 5 ) ;能提高免疫小鼠巨噬细胞数、血清溶菌酶活力、巨噬细胞的吞噬百分率及吞噬指数 ,具有显著的巨噬细胞激活功能 ,与BCG PSN作用相似 ;结论BCG PSA不但是BCG PSN的主要组成成分 ,而且也是其发挥免疫调节功能的重要有效成分     

聚乙二醇修饰干扰素α2b的稳定性研究

目的研究聚乙二醇修饰干扰素α 2b的稳定性。方法以抗病毒活性为指标 ,考察单修饰干扰素α 2b、多修饰干扰素α 2b和干扰素α 2b的稳定性 (4℃、2 5℃、37℃ )、抗胰蛋白酶水解能力和 37℃人血清稳定性。结果在4℃、2 5℃和 37℃条件下 ,稳定性依次为多修饰干扰素α 2b >单修饰干扰素α 2b >干扰素α 2b。抗胰蛋白酶水解试验表明 :干扰素α 2b在 30min时抗病毒活性迅速降到原来的 7.1% ,单修饰干扰素α 2b剩余 5 0 % ,多修饰干扰素α 2b仍保留 71%。体外稳定性试验表明 ,在 37℃人血清放置 10h ,干扰素α 2b只保留 35 % ,单修饰干扰素α 2b保留 71% ,而多修饰干扰素α 2b仍保留 95 %的抗病毒活性。结论聚乙二醇修饰可以增加干扰素α 2b的稳定性 ,抗胰蛋白酶水解能力和 37℃人血清稳定性。除了抗胰蛋白酶水解能力 ,修饰度的增加能够明显增强这种作用