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弓形虫GRA1基因变异及真核表达载体的构建 总被引:2,自引:1,他引:1
目的:构建弓形虫致密颗粒抗原1( GRA1)基因真核表达质粒。方法:根据GRA1基因已知序列,设计一对引物。用PCR技术从弓形虫RH株基因组DNA中扩增GRA1基因片段,插入pcDNA3质粒,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,经酶切及PCR鉴定、测序。结果:从弓形虫RH株基因组中扩增出775 bp的GRA1基因,测序显示该基因存在一135 bp的插入序列,使得所得PCR产物分子量大于预期值(628 bp)。该插入序列造成GRA1基因移码突变。结论:首次报道了变异的弓形虫RH株GRA1基因并构建了该变异基因的重组表达质粒。 相似文献
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目的:探讨诱骗受体3(DcR3)对人肺成纤维细胞(HLF)合成Ⅳ型胶原的作用.方法:Over-PCR方法构建DcR3的真核表达载体, 脂质体法转染HLF细胞, Western blot检测HLF细胞合成Ⅳ型胶原的含量.结果:成功构建了pvax1-DcR3真核表达载体并转染HLF细胞;转染组细胞Col Ⅳ表达量明显升高, 从12 h开始持续到72 h, 与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);而转染 抗体组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);转染组不同时间Col Ⅳ表达量有统计学意义(F=34.25, P<0.05).结论:DcR3促进HLF细胞合成Ⅳ型胶原的能力, 可能是加速肺纤维形成的因素之一. 相似文献
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目的:制备抗人DcR3单克隆抗体(mAb),并鉴定其特异性.方法:纯化的His-DcR3融合蛋白免疫小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗人DcR3 mAb并进行纯化,纯化后的抗体经Western blot和ELISA方法鉴定其特异性、Ig亚型和效价.结果:获得5株稳定分泌抗DcR3 mAb的杂交瘤细胞,均属IgG1亚型,其腹水抗体效价为1×10-5 ~1×10-7,Western blot显示5株细胞分泌的mAb均可识别DcR3蛋白,其中1株(1B1)可与SW480细胞成分反应.结论:成功建立稳定分泌抗人DcR3 mAb的杂交瘤细胞株,其分泌的抗体特异性强、效价高,为研究DcR3在组织中的表达、分布及研制ELISA试剂盒奠定基础. 相似文献
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间质性肺疾病(Interstitial lung disease,ILD)是一组主要累及肺间质、肺泡和(或)细支气管的肺弥漫性疾病,肺间质主要包括两种成分:细胞和细胞外间质。在ILD的发病过程中有多种炎症细胞、免疫细胞、肺泡上皮细胞、成纤维细胞及其介质和细胞因子参与。这些成分的适度凋亡可以清除肺泡腔和肺泡壁中异常增殖的实质细胞和炎性细胞,帮助肺组织恢复正常结构。反之,细胞凋亡异常则会加重病情的发展。凋亡不足,尤其是炎性细胞凋亡不足,毒性产物释放增加,延长炎症过程;凋亡过度,尤其是肺组织的构架细胞如肺泡上皮细胞的凋亡过度,又可以导致肺组织结构的破坏,最终产生肺纤维化。动物实验和临床实验均发现,在纤维化肺组织中,炎性细胞内的Fas配体(FasL)mRNA上调,支气管和肺泡上皮细胞表面的Fas抗原也明显上调,并发生过度凋亡。 相似文献
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目的:观察慢性心力衰竭患者心脏再同步化治疗( CRT)治疗前后心功能及血浆非对称性二甲基精氨酸( ADMA)和血浆N-端脑钠肽前体( NT-proBNP)水平的变化。方法21例慢性心力衰竭患者行CRT治疗,测定治疗前及治疗后3个月、6个月NYHA心功能分级、左室射血分数( LVEF)、左室舒张末内径( LVEDD)及血浆ADMA、NT-proBNP变化。结果21例慢性心力衰竭患者心衰症状改善,NYHA心功能分级提高,LVEF、LVEDD、NT-proBNP等心功能指标改善,血浆NT-proBNP和ADMA水平与治疗前比较明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论慢性心衰经CRT治疗后心功能改善,血浆NT-proBNP及ADMA水平降低。 相似文献