棉团铁线莲黄酮类成分研究

目的研究棉团铁线莲Clematis hexapetalaPall.的干燥根及根茎的化学成分。方法利用溶剂提取,硅胶柱色谱和高效液相色谱等手段进行分离、纯化,根据理化性质和波谱数据进行结构鉴定。结果分离鉴定了12个黄酮类化合物,分别为3,5,6,7,8,3′,4′-七甲氧基黄酮(1),nobiletin(2),liquiritigenin(3),橙皮素(4),柚皮素(5),7,4′-二羟基-二氢黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷(6),5,7,4′-三羟基-3′-甲氧基黄酮醇-7-O-α-L-鼠李糖(1→6)-β-D-葡萄糖苷(7),6-hydroxybiochainA(8),芒柄花素(9),大豆素(10),染料木素(11),鸢尾苷(12)。结论以上化合物均为首次从该植物中分离得到。     

腊梅葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PDH1)基因的克隆及表达分析

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶是磷酸戊糖途径中的关键限速酶。研究根据已经报道的G6PDH基因的保守序列引物扩增腊梅花中G6PDH基因的核心序列,利用RACE技术从腊梅中首次克隆得到一个G6PDH基因cDNA全长,命名为G6PDH1,并对G6PDH1蛋白质进行细胞定位预测、跨膜结构分析、三维结构模拟及聚类分析,预测G6PDH1的生物学信息;利用实时荧光定量PCR检测G6PDH1在腊梅不同组织中和冷处理条件下的表达差异分析。该研究中克隆获得的G6PDH1基因的全长为2011 bp,开放阅读框1551 bp,编码516个氨基酸。组织表达分析的结果显示,G6PDH1基因主要在花和根中表达,在叶和茎中表达量较低。通过冷处理,该基因在12 h时达到最高表达水平。研究通过对腊梅花中G6PDH1基因全长cDNA克隆和表达特异性分析,为以后深入研究腊梅的抗寒机制奠定了基础。     

多酶催化级联反应在天然产物酶法合成中的应用研究进展

酶作为一种生物催化剂,具有催化效率高、反应选择性强、目标产物专一、反应条件温和、环境友好等优点,是合成复杂有机分子的重要工具。且随着基因测序技术、分子生物学、遗传操作等技术的不断发展,酶的多样性稳步增加,可催化的反应类型也逐步多元化。在酶催化合成过程中,大多数简单反应通过单酶催化即可完成,而很多复杂反应的发生往往需要2个或以上的酶参与催化。因此,将多个酶组合到一起,构建多酶催化级联反应已逐渐成为生物化学领域的一个研究热点。如今,越来越多结构复杂的天然产物的生物合成途径得到解析,具有新颖催化活性的次级代谢酶不断被鉴定、发现并组合应用于结构多样性天然/非天然小分子的酶法合成中。该文总结了一系列多酶催化级联反应的例子,着重介绍了级联催化方法在糖类、核苷类、黄酮类、萜类、生物碱类以及手性分子等化合物合成中的应用,并对多酶催化级联方法目前存在的问题、解决对策及未来发展方向进行了讨论与展望。     

管花肉苁蓉花中查耳酮合酶的基因克隆、功能鉴定与表达分析

目的 研究管花肉苁蓉Cistanche tubulosa花中查耳酮合酶（chalcone synthase）Ct CHS蛋白的功能和Ct CHS基因在白、红、紫3种颜色花中的表达模式。方法 利用RT-PCR克隆Ct CHS基因并进行生物信息学分析。将p ET-28a-CtCHS质粒转入大肠杆菌通过IPTG诱导蛋白表达。将Ct CHS重组蛋白与底物4-香豆酰辅酶A、丙二酰辅酶A孵育并利用HPLC和MS检测产物。将p CAMBIA1300-35S-GFP-CtCHS质粒转入拟南芥原生质体观察CtCHS蛋白亚细胞定位。利用q RT-PCR检测Ct CHS基因在3种颜色管花肉苁蓉花中的表达模式。结果 克隆出1条Ct CHS基因,开放阅读框（open reading frame,ORF）长度为1173 bp,编码390个氨基酸,蛋白相对分子质量为42 800,具有查耳酮合酶保守的催化残基Cys164、His303、Asn336。利用大肠杆菌外源表达Ct CHS蛋白并纯化获得重组蛋白。Ct CHS蛋白能够催化4-香豆酰辅酶A与丙二酰辅酶A生成柚皮素查耳酮。Ct CHS蛋白主要定位于细胞质。Ct C...     

白木香查尔酮异构酶基因的克隆鉴定与表达分析

查尔酮异构酶(chalcone isomerase,CHI)是黄酮类成分生物合成途径中的关键酶之一,在植物防御反应中发挥重要作用.本研究根据白木香转录组测序结果并结合RT-PCR技术首次从白木香愈伤组织中克隆得到1个CHI基因,命名为AsCHI1.白木香AsCHI1基因的开放阅读框(ORF)长654 bp,编码蛋白含2...     

河南产丹参高效液相色谱指纹图谱的研究

目的采用高效液相色谱法建立丹参药材的指纹图谱。方法Sh im-pack VP-ODS(150mm×4.6mm)为色谱柱,甲醇和0.5%冰醋酸水采用梯度洗脱,流速0.8mL/m in,检测波长281nm。结果精密度、重现性和稳定性试验中各共有峰相对保留时间的RSD均小于5%,符合有关规定。结论本方法可以作为控制丹参内在质量的方法之一。     

卷柏中一个新木脂素苷的分离与鉴定

目的研究卷柏的化学成分。方法利用大孔吸附树脂、Sephadex LH-20、硅胶柱色谱进行分离纯化，根据化合物的理化性质和光谱数据鉴定结构。结果从卷柏中分离得到4个化合物，分别鉴定为(7S,8r)-7,8-二氢-7-(4-羟基-3,5-二甲氧基苯基)-8-羟甲基-［1′-(7′-羟基)乙基-5′-甲氧基］苯骈呋喃-4-O-β-D-葡糖苷(命名为卷柏苷C，化合物I)、D-甘露醇(化合物II)、酪氨酸(化合物III)、莽草酸(化合物IV)。结论化合物I为新化合物，化合物II和III为首次从卷柏属植物中分离得到,IV为首次从卷柏中分离得到。     

苦参不同组织中生物碱类成分的LC-MS分析

目的 通过对苦参Sophora flavescens不同组织样品中生物碱类成分的LC-MS分析,探讨苦参中生物碱类成分的质谱裂解规律及其在不同样品中的异同。方法 首先利用UPLC-Q-Exactive-OrbitrapMS对5年生苦参根中的生物碱类成分进行全面的鉴定分析。再利用UPLC-QQQ-MS/MS技术,对苦参无菌幼苗不同组织部位（根、茎、叶）、苦参愈伤组织中的生物碱类成分进行定量分析,比较各样品中生物碱类成分的异同。结果 从5年生苦参根中共鉴定出47个生物碱类成分;利用UPLC-QQQ-MS/MS对其中17个主要的生物碱类成分进行了定量分析,发现不同苦参样品中生物碱类成分差异明显,其中苦参无菌幼苗各组织部位中生物碱的含量相对较高。结论 建立了一种苦参生物碱类成分快速定性定量分析方法,从5年生苦参根中快速鉴定出47种生物碱;通过对苦参不同组织样品中17个生物碱类成分的定量分析,为后续利用比较转录组测序技术,挖掘并鉴定苦参中生物碱类成分生物合成关键酶的研究奠定基础。     

亲水作用色谱-质谱联用法同时测定参附注射液中的14种有机酸

有机酸广泛分布在植物及相关产品中,其参与多种代谢途径(如三羧酸循环),并表现出多种药理活性。参附注射液作为广泛使用的中药注射剂,不良反应时有报道。因而,应深入阐明参附注射液的化学组成,并制定严格的质量标准,进而保障其临床使用安全有效。参附注射液由红参及黑顺片经现代工艺提取制备而成,有机酸为其主要成分类别之一。该研究通过建立HILIC-LC-MS,同时测定参附注射液中肉桂酸、阿魏酸、4-羟基苯甲酸、乳酸、己二酸、延胡索酸、咖啡酸、琥珀酸、马来酸、丙二酸、苹果酸、莽草酸、酒石酸和金鸡纳酸等14种有机酸成分的含量。14种有机酸类成分在HILIC色谱柱上均获得较好的保留和分离。除肉桂酸(231μg·L~(-1))、乳酸(113μg·L~(-1))和丙二酸(32.5μg·L~(-1))外,其余11个化合物的定量限均小于10μg·L~(-1)。定量结果表明,苹果酸、丙二酸、奎尼酸、乳酸和肉桂酸在参附注射液中含量较高(1.89 mg·L~(-1)),而10批样品中均未检测到咖啡酸和己二酸。该方法适用于参附等中药注射液中多种有机酸含量的同时测定。     

白木香细胞色素P450还原酶基因的克隆、表达与功能鉴定

细胞色素P450还原酶(cytochrome P450 reductase, CPR)是细胞色素P450酶电子传递链的组成部分,在生物体内起着重要的电子传递作用。本研究从白木香(Aquilaria sinensis)愈伤组织细胞中克隆得到1个CPR基因(Ascpr1), Ascpr1含有一个2 124 bp的开放阅读框,编码707个氨基酸残基,其蛋白分子质量为78.82 kD。系统进化分析显示, AsCPR1为Ⅱ型CPR蛋白,与来源于可可树(Theobroma cacao)的CPR蛋白亲缘关系较近。跨膜预测结果显示该蛋白的第52～71位氨基酸为跨膜区,在大肠杆菌Transetta (DE3)中成功表达了N-端缺失67个氨基酸残基的融合蛋白,经亲和色谱纯化后获得对细胞色素C具有还原能力的融合蛋白AsCPR1。本研究结果为进一步研究P450酶参与的白木香防御物质合成及CPR在白木香防御反应中的作用奠定基础。