JAK2V617F点突变在真性红细胞增多症中的诊断价值

目的:探讨JAK2酪氨酸激酶点突变(JAK2V617F点突变)在真性红细胞增多症(PV)中的临床价值.方法:运用实时定量聚合酶链式反应(RQ-PCR)检测25例血红蛋白量(HGB)男185～200 g/L,女165～200 g/L组(A组)及18例血红蛋白量男、女>200 g/L组PV患者(B组)、30例健康体检者(C组)外周血单个核细胞JAK2V617F点突变率;并比较PV患者中JAK2V617F点突变阳性组与阴性组之间的年龄、性别、血红蛋白量(HGB)、红细胞压积(HCT)、白细胞数(WBC)、血小板数(BPC)等临床特征.结果:43例PV患者外周血单个核细胞中JAK2V617F点突变率为88%;25例A组及18例B组PV患者外周血单个核细胞中点突变率分别为88%,89%,两组间无统计学差异,P>0.05,30例C组点突变均为阴性;43例PV患者中,JAK2V617F点突变阳性组与点突变阴性组比较,两组在发病年龄、HGB、HCT均无统计学差异;阳性组白细胞计数、血小板计数分别为(12.8±6.0)×109/L、(486±108)×109/L,均显著高于阴性组的(7.9±1.1)×109/L、(320±97)×109/L,P<0.05.结论:JAK2V617F点突变结合血红蛋白量测定可以作为真性红细胞增多症的辅助诊断依据.JAK2V617F点突变阳性组与阴性组患者临床特征存在一定差异.     

三氧化二砷耐药白血病细胞株K562/AS2的建立及其与多药耐药的关系

目的:建立三氧化二砷(As₂O₃)耐药白血病细胞株,用于研究其耐药机制。初步探讨该细胞系与多药耐药的关系。方法:As₂O₃耐药白血病细胞株的建立通过逐步增加药物浓度方法。细胞毒实验采用MTT法,细胞周期测定采用碘化丙啶荧光染色法,细胞表面P-糖蛋白(P-gp)、细胞内柔红霉素(DNR)浓度、以及细胞免疫表型测定采用流式细胞术测定。结果:As₂O₃耐药白血病细胞株K562/AS2的细胞倍增时间和细胞周期与敏感细胞株K562相似。K562/AS2对As₂O₃、DNR、足叶乙甙(VP16)和阿糖胞苷(Ara-C)的耐药倍数分别为(7.4、2.9、3.8和1.1倍)。多药耐药细胞K562/A02对As₂O₃、DNR、VP16和Ara-C的耐药倍数分别为(0.8、94、2.5和0.9倍)。K562细胞与K562/AS2细胞之间的表面P-gp和细胞内DNR荧光强度无明显差异。结论:建立一株对临床可获得药物浓度(2μmol/L)的As₂O₃产生耐药的白血病细胞K562/AS2。K562/AS2对As₂O₃的耐药倍数是敏感株K562的7.4倍。K562/AS2对DNR和VP16部分耐药,其机制与多药耐药基因1(mdr1)表达产物P-gp作用无关。     

腺病毒载体介导的发夹状RNA抑制三氧化二砷耐药的K562/AS2细胞MRP1基因表达的实验研究

 目的　构建MRP1特异性发夹状RNA（shRNA）重组腺病毒载体,并研究其对耐三氧化二砷（ATO）的白血病K562／AS2细胞MRP1基因表达的抑制作用。方法　构建MRP1特异性shRNA重组腺病毒,并感染K562／AS2细胞;用荧光实时定量PCR法分析MRP1 mRNA的表达水平;流式细胞术检测MRP1蛋白表达;MTT法检测该细胞对ATO及依托泊苷（VP16）的细胞毒作用。结果　pAd-EGFP-U6-MRP1-shRNA重组腺病毒感染前后,K562／AS2细胞中MRP1 mRNA和蛋白表达水平分别为（34.70±0.28）、（4.19±0.03）（P＜0.05） 和 （26.40±0.16）、（10.85±0.37）（P＜0.05）;感染前后K562／AS2细胞对ATO及VP16耐药倍数分别为（11.4078±0.3183）、（1.6126±0.3015）和（5.9141±0.0149）、（1.7664±0.1038）,逆转倍数分别为（7.2409±1.3668）和（3.3555±0.1886）（P＜0.05）。结论　成功构建了pAd-EGFP-U6-MRP1-shRNA重组腺病毒载体,该载体感染K562／AS2细胞后可抑制细胞MRP1基因表达以及逆转该细胞对ATO和VP16的耐药。     

乳腺癌患者外周血树突状细胞亚群及其HLA-DR表达的变化

目的：探讨乳腺癌患者外周血树突状细胞(DC)亚群和其HLA-DR表达变化及血浆中DC相关细胞因子水平的变化。方法:4色荧光流式细胞术分析57例乳腺癌术前、术后1周、术后6个月的患者及正常对照的外周血DC前体细胞pDC₁/pDC₂（CD11c+CD123-/CD11c-CD123+）比值及其HLA-DR的表达；酶联免疫吸附法检测血浆细胞因子白细胞介素-12p40（IL-12p40）、白细胞介素-10（IL-10）、γ-干扰素（IFN-γ）、白细胞介素-4（IL-4）水平。结果:57例乳腺癌患者中, 2例Ⅲ期、4例Ⅳ期外周血pDC缺乏，其余患者Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期外周血pDC₁/pDC₂比值分别为1.62±0.59、1.41±0.63、0.91±0.32、0.81±0.29，均显著低于对照组（1.94±0.44,P<0.05）；Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期患者术后1周pDC₁/pDC₂比值为1.71±0.47、1.52±0.54、1.04±0.36，与术前比较均无显著差异（P>0.05），但显著低于对照组（P<0.05）; 术后6个月pDC₁/pDC₂比值分别为1.92±0.72、1.63±0.65、1.28±0.34，与术前比较，均有显著提高（P<0.05），但与对照组比较，仅Ⅰ期患者恢复正常（P>0.05）,Ⅱ、Ⅲ期患者仍然显著降低（P<0.05）。乳腺癌患者pDC亚群HLA-DR表达以及血浆中IL-12p40、 IL-10、IFN-γ、IL-4水平及IL-12p40/IL-10、IFN-γ/IL-4比值与对照组比较均无显著差异（P>0.05）。结论:Ⅰ-Ⅳ期乳腺癌患者外周血pDC₁/pDC₂比值降低，部分Ⅲ、Ⅳ期患者外周血pDC缺乏。pDC的HLA-DR表达及DC分泌相关细胞因子的能力没有同步变异。术后患者pDC亚群Ⅱ、Ⅲ期明显改善，Ⅰ期恢复正常。     

荧光定量聚合酶链反应检测miR-342-3p及靶基因EVL在多发性骨髓瘤细胞中的表达

目的研究多发性骨髓瘤(MM)患者中miR-342-3p及靶基因EVL的表达情况及意义。方法建立应用颈环式结构引物反转录扩增微小RNA(miRNA)的反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法 ,并采用荧光定量聚合酶链反应(RQ-PCR)对miR-342-3p及靶基因EVL的表达进行定量分析。结果①5例MM患者中miR-342-3p相对表达量为7.6±5.7,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。②MM细胞株U266中miR-342-3p相对表达量为7.0±3.2,较对照组表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。③5例MM患者中EVL基因相对表达量为6.3±3.2,较对照组表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。④MM细胞株U266中EVL基因相对表达量为4.3±1.1,较对照组表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MM存在miR-342-3p及EVL基因表达异常,可能为研究MM发病机制提供思路。     

反相高效液相色谱法测定人血清中维生素A含量

目的建立反相高效液相色谱法测定人血清中维生素A的方法,以评价人体维生素A营养状况。方法移取血清,加入乙腈乙醇混合溶液及正己烷进行萃取,旋涡混合、离心后,移取正己烷层氮气吹干,残渣用甲醇溶解后进样。色谱条件:XTerraTM RP18色谱柱,5μm,3.9 nm×150 mn,柱温:30℃,流动相为甲醇: 水(92:8);流速:1 mL/min;检测波长325nm。结果维生素A在25～800ng/mL浓度范围呈线性,R2=0.9993, 平均回收率为95.2%,RSD<7%,全部操作可在30min内完成。结论改进的检测人血清中维生素A含量的方法, 快速、灵敏、准确,简便易行。     

高效液相色谱法分析甲氨蝶呤及多聚谷氨酸甲氨蝶呤

目的:建立高效液相色谱法测定甲氨蝶呤及多聚谷氨酸甲氨蝶呤的方法.方法:待测样品加入10%三氯醋酸溶液沉淀蛋白,旋涡混合、离心,取上清液进样.XTerraTMRP18(3.9 mm×150 mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇和磷酸盐缓冲液(7.5 mmol·L-1,pH 7.3)梯度洗脱;流速1 mL·min-1;样品温度15℃;柱温30℃;紫外检测器,检测波长309 nm.结果:五聚谷氨酸甲氨蝶呤、四聚谷氨酸甲氨堞呤、三聚谷氨酸甲氨蝶呤、二聚谷氨酸甲氨蝶呤、甲氨蝶呤的保留时间分别为3.194,4.147,5.488,6.738,8.063 mim线性范围1.562 5～400/μmol·L-1,甲氨蝶呤及多聚谷氨酸甲氨蝶呤的回收率为89.01%～105.54%(RSD＜5%);最低检测浓度0.01/μmol·L-1(S/N＞3),9 min内可完成5种组分的分析.结论:该方法灵敏度高,结果准确,分析快速、简便.     

药源性铅中毒病例分析

铅中毒可导致腹痛或贫血,无明确接触史的铅中毒易被误诊。该病例患者因长期服用铅含量超标的治疗乙肝的偏方中药丸导致铅中毒,出现腹痛和贫血症状,又被作为消化道或血液系统疾病考虑而延误了确诊。提示临床医生询问病情时应详细了解患者的服药史,提高对药源性铅中毒的警惕性。同时,患者应尽量在正规医院就诊,不能盲目相信偏方,避免类似遭遇。在驱铅治疗过程中,患者的尿锌、铁排出增多,血清铜、锌、铁含量降低。因此,驱铅治疗时监测患者血清微量元素的变化并给予相应损失元素的补充是必要的。     

从G-CSF动员的外周血细胞悬液培养的成纤维细胞样细胞的特性分析

目的： 研究从G-CSF动员的外周血细胞（PBC）悬液培养的成纤维细胞样（F-L）细胞的特性。 方法： 取PBC中贴壁细胞分4组培养：①RPMI-1640组；②L-DMEM组；③粒细胞集落刺激因子（G-CSF）组；④白细胞介素-3（IL-3）组。流式细胞仪分析各组培养的F-L细胞特性。 结果： 培养2-3周后，4组均能收获到F-L细胞，细胞贴壁生长，但不融合，不能连续传代培养，③④组细胞数量明显多于①②组，4组F-L细胞表型相似：CD33+、CD11c+、CD64+、CD14+、CD45+、HLA-DR+、CD86+、CD34-、CD38-、CD3-、CD19-、CD56-、CD29-、CD44-、CD105-；与单核细胞（PB-M）表型差异仅CD38表达不同而与间质干细胞（MSC）或树突状细胞（DC）表型明显不同。 结论： 从PBC培养的F-L细胞为巨噬细胞，不是MSC或DC；G-CSF、IL-3能提高F-L细胞培养数量，不改变PB-M向巨噬细胞分化的分化方向。