Chinese 1基因型弓形虫棒状体蛋白 ROP16的基因克隆表达及生物信息学分析

目的：构建弓形虫Chinese 1基因型TgCtWh3（以后均简称Wh3）株棒状体蛋白（ rhoptry protein ,ROPs）16的原核和真核重组表达质粒及其3D结构。方法参照ROP16序列分别设计引物,采用PCR从弓形虫Chinese 1基因型Wh3株基因组DNA中扩增出编码ROP16的基因片段,克隆至pMD18-T载体;经PCR及测序分析鉴定;阳性克隆的质粒分别亚克隆至原核表达载体pET-28a和真核表达载体pEGFP-C2,分别转化大肠杆菌BL21和DH5α,PCR和酶切鉴定转化菌落插入的序列;将构建的原核表达菌株经IPTG诱导,SDS-PAGE和免疫印迹分析融合蛋白的表达;将构建的真核重组质粒经脂质体转染293T细胞,观察其在细胞中表达;采用生物信息学方法分析构建了蛋白的3 D结构。结果各组均PCR扩增出约2．1 kb ROP16基因的特异片段,序列检测结果均正确;分别亚克隆到原核表达载体pET-28a和真核表达载体pEGFP-C2中,成功构建了Chinese 1基因型弓形虫棒状体蛋白ROP16的原核表达质粒和真核表达质粒;原核表达质粒在大肠杆菌中表达了ROP16的融合蛋白;真核表达质粒在293T细胞中成功表达,成功构建出ROP16基因的3D结构图。结论以pET-28a和pEGFP-C2为载体,分别成功构建并表达了ROP16的原核和真核重组质粒,并构建出其3D结构图。     

纳洛酮治疗小鼠柯萨奇病毒诱发病毒性心肌炎的实验研究

目的:研究纳洛酮治疗病毒性心肌炎(viral myocarditis,VMC)小鼠的作用机制.方法:120只BALB/c 小鼠以柯萨奇病毒(coxsackievirus B3,CVB_3)诱导制作VMC模型,在隔离实验室饲养.分别在接种病毒后72 h各组给药至21 d,CVB_3组i.p.2500 mg/kg生理盐水(n=60);纳络酮组i.p.2 mg/kg(n=60);另取40只BALB/c,小鼠作为对照组,同法接种100μL不含病毒的Eagle液,72 h后i.p.给予2500 mg/kg生理盐水.在病毒感染第5、7、14、21、28天,各组随机取8只小鼠,处死,留取心肌组织.观察小鼠死亡率与心肌组织病理改变,并采用RT-PCR和Western blot技术检测CVB_3感染后各时间点小鼠心肌组织中K-阿片受体(K-opioid receptor,kOR)mRNA和蛋白质的表达水平.结果:CVB_3感染后第5、7、14、21天,CVB_3组KOR mRNA表达量显著高于对照组(P<0.01);kOR蛋白质的表达量在CVB_3感染后第7、14、21天明显高于对照组(P<0.05).CVB_3感染后第7、14、21天纳洛酮组小鼠死亡率和病理组织改变低于CVB_3组,kCOR mRNA和蛋白质的表达量低于CVB_3组(P<0.05).结论:CVB_3诱导性VMC小鼠心肌细胞的KOR基因和蛋白质水平明显上调,纳洛酮对VMC小鼠保护作用与抑制KOR基因和蛋白质水平有关.     

LC-MS/MS法测定Beagle犬血浆中布洛芬对映体的浓度

目的建立简便、快速、灵敏的LC-MS/MS法测定Beagle犬血浆中手性药物布洛芬浓度的分析方法,进行系统的方法学验证,并用于布洛芬在Beagle犬体内的药代动力学研究。方法以酮洛芬为内标,血浆样品经正己烷(含5%异丙醇)液萃取后,以甲醇:1 mmol·L-1甲酸铵(含0.2%甲酸,10%甲醇)(82∶18,V/V)为流动相,采用Lux 5u Cellulose-3(250 mm·4.6 mm,5μm)柱分离,流速为0.8 m L·min-1。通过电喷雾电离源以多反应监测(MRM)方式进行负离子检测,用于定量分析的离子对分别为m/z 205.2/161.2(布洛芬)和m/z 253.1/209.2(内标,酮洛芬)。方法验证包括基质效应、提取回收率、线性、定量下限、批内与批间精密度、稳定性、稀释效应等。结果犬血浆中左/右旋布洛芬的线性范围为0.2~50 mg·L-1,最低定量限为0.2 mg·L-1,批内、批间精密度(RSD)介于1.01%~13.1%之间。Beagle犬单次口服给予右旋布洛芬后的主要药动学参数Cmax、T1/2、AUC(0-t)分别为:(82.98±14.83)mg·L-1、(3.217±0.7298)h、(362.0±58.67)h·mg·L-1。单次口服给予消旋布洛芬后,其左/右旋布洛芬的主要药动学参数Cmax、T1/2、AUC(0-t)分别为:(70.62±14.81)/(74.48±20.08)mg·L-1、(1.520±0.9286)/(5.432±1.234)h、(177.8±34.18)/(649.6±200.2)h·mg·L-1。结论该方法简便、快速、灵敏度高、重复性好,能够同时测量血浆中左/右旋布洛芬的药物浓度,可用于布洛芬在Beagle犬体内的药代动力学研究。     

MicroRNA在肿瘤发生发展、诊断、耐药性方面的研究进展

microRNA是近几年发现的一段长度约为19²4nt非编码性的内源性小分子RNA,调控细胞的增殖、生长、凋亡等过程,尤其在肿瘤方面,起着类似癌基因和抑癌基因的作用。在肿瘤早期可以测得特异性的microRNA,有望成为新的诊断标准。此外,microRNA影响着肿瘤多药耐药性,可成为肿瘤药物的新靶点。     

实习指导手册在产科临床护理教学中的应用与体会

目的通过应用实习指导手册,规范化指导护生临床实习目标,提高临床教学质量。方法结合产科临床护生实习重点内容与要求,将规范的、统一标准的护理操作、需要掌握的重点知识等内容制成指导手册,对护生的临床学习进行规范统一的指导与管理,使实习护生掌握相关护理重点知识,提高对临床实习中的相关理论知识的掌握与操作技能水平。结果通过应用实习指导手册,护生考核成绩有明显提高(P<0.05),提高护生对临床教学的满意度。结论实习指导手册的应用,提高护生的理论水平,操作技能有明显提高,满足护生的学习需要,临床教学质量有明显提高。     

参松养心胶囊与比索洛尔治疗心律失常的疗效分析

目的分析参松养心胶囊与比索洛尔治疗心律失常的临床治疗效果。方法选取2007年5月至2011年12月期间,采用参松养心胶囊治疗的心律失常患者50例,作为A组;选取采用比索洛尔治疗的心律失常患者50例,作为B组;再选取采用参松养心胶囊联合比索洛尔治疗的心律失常患者50例,作为C组。将三组患者临床症状、心电图动态的变化情况,以及生活质量评分情况进行对比分析,从而总结参松养心胶囊与比索洛尔治疗心律失常的临床治疗效果。结果 A组患者临床症状、心电图动态的变化情况,以及生活质量评分情况均明显好于B组患者,而C组患者临床症状、心电图动态的变化情况,以及生活质量评分情况明显好于A组。结论参松养心胶囊治疗心律失常比比索洛尔更加有效,参松养心胶囊联合比索洛尔治疗心律失常比参松养心胶囊更加有效。     

Mtwo镍钛器械在上颌第一磨牙近颊第二根管的临床应用

目的:比较Mtwo镍钛器械和手用不锈钢K挫的根管预备能力。方法:选取需进行根管治疗的132例患牙,随机分为实验组和对照组,分别采用Mtwo镍钛器械和手用不锈钢K挫,比较根管预备时间、根管预备后疼痛的反应和根管充填质量。结果:Mtwo镍钛器械工作效率高,术后疼痛少,根管充填质量高。结论:Mtwo镍钛器械优于手用不锈钢K挫,值得在临床上推广。     

某院中药注射剂临床应用合理性分析

目的：了解某院,临床使用中药注射剂情况,并评价其使用的合理性,为促进中药注射剂的临床合理使用提供参考。方法：回顾性分析2011年1、4、7、10月4个月某院使用中药注射剂的病历,对中药注射荆使用的合理性进行评价与分析。结果：共收集含中药注射剂医嘱的病历1368份,涉及13个临床科室,共计使用中药注射剂1634例次,不合理使用情况共发生665例次（占40．70％）。结论：药师应加强对中药注射剂医嘱审核,及时与临床沟通,与医生一同建立使用中药注射剂的安全屏障。     

癫痫大鼠颞叶和海马区PX1mRNA与CX36mRNA表达及甘珀酸的干预

目的观察戊四氮点燃大鼠颞叶和海马区PX1mRNA和CX36mRNA的表达及阻断剂甘珀酸的干预作用。方法 K组、CBX、NS组SD大鼠各10只,K组、CBX组用PTZ点燃,再分别用生理盐水CBX干预3d,NS组注射生理盐水。观察3组大鼠的行为变化,采用RT-PCR方法观察颞叶和海马区PX1mRNA和CX36mRNA的表达。结果①K组,CBX组28d左右均达到点燃,NS组大鼠行为学无变化。②PX1mRNA在海马和颞叶的表达均为K组〉CBX组〉NS组（P〈0.05）,各组海马区的表达高于颞叶（P〈0.05）。CX36mRNA在海马和颞叶的表达均为K组〉CBX组〉NS组（P〈0.05）,各组颞叶的表达高于海马区（P〈0.05）。结论 PX1和CX36可能参与癫痫的发生发展,其阻断剂CBX有潜在的抗惊厥作用。     

复方钩藤散的研究进展

钩藤散是一传统中药复方,以钩藤为君药,辅以不同中药配伍成方。近年来,其在高血压、头痛、痴呆及脑梗塞等多种疾病治疗上取得了一定的进展。本文对钩藤散近年来的药理、临床及作用机制研究进行综述,为其进一步的研究提供参考。