中西药结合治疗脑梗塞的对比研究一附398例报告

目的 应用蝮蛇抗酸酶（Svate-3)加中成药芪龙治疗脑栓塞，与单用西药进行对比研究。方法 对临床398例脑梗塞病人分别以加芪龙治疗组与单用西药对照组通过临床体征及血栓有关检测指标改善情况进行对比。结果 加用芪龙后与对照组比较，血管内皮细胞功能指标明显提高，特别是tpAAg,tpAA较对照组明显改善，因此脑梗塞急性期提高了治愈率；在恢复期和后遗症期的治疗组较对照组仍有明显改善。结论 中西药合用治疗脑梗塞优于单用西药治疗，且复发率低。     

新生儿2q37缺失伴4q部分三体全基因组拷贝数变异(CNVs)分析

 目的  应用SNP芯片检测方法,对染色体结果为46,XX,add(2)(q37)的1例新生儿多发畸形患儿进行全基因组拷贝数变异(copy number variants,CNVs)的检测,分析其中罕见CNVs与表型的相关性。方法  对于1例新生儿多发畸形病例,采用Affymetrix SNP芯片筛查全基因组CNVs,经过筛选得到罕见潜在致病性CNVs。将这些CNVs片段结合患儿的表型进行文献比对。结果  本例患儿的主要表型包括:小耳畸形、外耳廓卷曲、小下颌、颈蹼、双手通贯掌、双足内翻、室间隔缺损、动脉导管未闭、卵圆孔未闭、肺动脉高压、二尖瓣狭窄、脊柱后凸畸形。本例患儿共得到潜在致病性CNVs片段4个,大小为4 282.936 kb~17 912.863 kb,集中在2号、4号染色体长臂,邻近合并后得到2个,分别为2q37.1~q37.3缺失和4q32.3~q35.2重复。文献回顾,发现本例患儿耳部、心脏、骨骼畸形等表型与2q37缺失综合征有关;而更多相应表型如耳部、下颌、颈部畸形和通贯掌、足内翻、心脏畸形、脊柱畸形则与4q部分三体综合征有交叉。结论  本研究首次报道了1例罕见的2q37缺失综合征合并4q部分三体综合征的复杂染色体变异。     

法洛四联症患儿组蛋白乙酰化及其酶的表达

目的：观察组蛋白乙酰转移酶（HATs）及组蛋白去乙酰化酶（HDACs）在法洛四联症（TOF）患儿中的表达情况,探讨组蛋白乙酰化及其酶在TOF发病中的作用。方法：TOF组心肌组织标本来源于46例行TOF根治术患儿,对照组心肌组织标本来源于16例意外死亡经尸检未发现心脏畸形的儿童。采用免疫组织化学染色法检测TOF组和对照组中H3K9、H3K18、H3K27 3个组蛋白乙酰化位点的乙酰化水平;采用Real-time PCR技术筛选TOF组与对照组心肌组织中组蛋白乙酰化相关酶HATs和HDACs的mRNA表达水平,并分析其与组蛋白乙酰化水平的相关性。结果：与对照组比较,TOF组H3K9位点的乙酰化水平明显增高（P=0.0165）;而H3K18、H3K27两个位点的乙酰化水平明显降低（均P<0.05）。分别对4个HATs和6个HDACs检测发现,TOF组中EP300和CBP mRNA水平较对照组升高（均P<0.05）;而其他HATs和HDACs mRNA表达水平在两组间差异均无统计学意义（均P>0.05）。相关分析显示,H3K9乙酰化水平与EP300和CBP mRNA表达呈显著正相关（分别r=0.71、0.72,均P<0.01）。结论：H3K9乙酰化水平增高可能与EP300和CBP mRNA表达上调呈正相关,提示EP300和CBP可能是通过调控H3K9乙酰化状态影响心脏发育。     

组织因子途径抑制物-2的时间分辨荧光免疫测定方法的建立及评价

 目的 建立测定血液中组织因子途径抑制物-2（tissue factor pathway-2,TFPI-2）含量的时间分辨荧光免疫测定方法（time-resolved fluorescence immunoassay,TRFIA）。方法 以兔抗人TFPI-2多克隆抗体作为固相抗体,单克隆抗体3C8作为第一抗体,原核表达的人TFPI-2作为标准品,Eu3+标记的羊抗鼠单克隆抗体作为检测抗体,采用双抗体夹心法建立TFPI-2 TRFIA分析系统,并与酶联免疫吸附法（ELISA）进行比较。结果 自制TFPI-2 TRFIA试剂标准曲线的线性范围为0.1~50 ng/mL,灵敏度为0.048 ng/mL,批内和批间变异系数均≤8.39%。应用该方法测定56例冠状动脉粥样硬化性心脏病（coronary atherosclerotic heart disease,CHD）患者及24例正常体检者血浆中的TFPI-2分别为（10.58±7.12）和（8.53±2.32）ng/mL。结论 我们建立的TFPI-2 TRFIA分析方法与 ELISA相比灵敏度更好,定量检测结果能够敏感准确地反映血液内TFPI-2的浓度变化,特异性和稳定性均符合要求。     

新型抗溃疡及促进伤口愈合药--重组人角质细胞生长因子-2

重组人角质细胞生长因子-2(rhKGF-2)能与人体上皮细胞内的成纤维细胞生长因子受体(FGFR)结合而发挥生理作用。研究显示，rhKGF-2可特异性地刺激上皮细胞增殖，促进表皮细胞生长和肉芽组织形成，可用于治疗因上皮细胞损伤引起的溃疡，加速伤口的愈合，耐受性好，值得临床推广。     

缺血性脑中风急性期和恢复期纤溶功能的比较

缺血性脑中风急性期和恢复期纤溶功能的比较山东省交通医院（济南，２５００３１）许延路，马端，宗俊学，刘培强，高辉纤溶酶原（ＰＬｇ）、组织型纤溶酶原激活物（ｔＰＡ）和组织纤溶酶原激活物抑制物（ＰＡＩ）是人体纤溶系统的主要成分。目前许多研究认为纤溶功能的改...     

卵巢上皮性癌DNA异常甲基化模式的建立及其应用

目的 建立卵巢上皮性癌(卵巢癌)的DNA异常甲基化模式,探讨其在寻找新的卵巢癌特异性标志物中的应用价值.方法 用激光显微切割技术从20例卵巢癌组织冰冻切片中获取的肿瘤细胞作为实验对象,用原代培养的5例正常卵巢上皮细胞作为对照,用基于芯片技术的差异甲基化杂交(DMH)方法检测卵巢癌的DNA异常甲基化模式.选择7个DMH结果显示在卵巢癌中低甲基化的基因启动子区胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤二核苷酸岛(CGI),用甲基化实时荧光定量PCR技术检测其在87例卵巢癌和42例卵巢良性病变患者病变组织中的甲基化状态.结果 182个过甲基化位点和64个低甲基化位点(阳性率为25%以上的位点分别有18个和31个)组成了卵巢癌的DNA异常甲基化模式.87例卵巢癌和42例卵巢良性病变患者组织DNA中,基因LSM2、EGFLAM和CDKN2A的甲基化率依次为11%(10/87)和33%(14/42)、8%(7/87)和21%(9/42)、9%(8/87)和31%(13/42),与卵巢良性病变相比,卵巢癌中3个基因甲基化率均有显著下降,分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 建立卵巢癌的DNA异常甲基化模式是卵巢癌研究中非常重要的基础环节.基因EGFLAM、CDKN2A和LSM2启动子区CGI有可能成为新的卵巢癌特异性的低甲基化肿瘤标志物.     

脑源性神经营养因子-绿色荧光蛋白融合基因载体的构建、鉴定及初步应用研究

Objective To construct expression plasmid of the fusion protein of brain-derived neurotrophic factor (BDNF)-green fluorescent protein (GFP), and observe its characteristics. Methods BDNF cDNA segment was inserted into plasmid pcDNA3.1/NT-GFP-TOPO and in the same reading frame with GFP. After verified by sequencing, the BDNF-GFP plasmid was transferred into cultured Schwann cells by electroporation. And the expression of BDNF-GFP fusion protein was observed by immunohistochemistry and Western blotting. The neural-protective function of the fusion protein was evaluated by transferring the plasmid into adult rat retinas with transected optic nerve. Results The sequence of BDNF-GFP plasmid was verified correctly by auto-sequencing. The results of Western blotting showed that the BDNF-GFP fusion protein expressed a brand with the relative molecular mass of 41×103. Seven days after the optic nerve was transected, the number of survival retinal ganglion cells (RGC) in BDNF-GFP group and GFP group was (1201±286) and (482±151) cells/mm2, respectively; and the survival rate was (51.39±12.24)% and (20.62±6.46)%, respectively. Twenty-eight days after the optic nerve was transected, the number of survival RGC in the two groups was (715±71) and (112±24) cells/mm2, respectively; the survival rate was (30.59±3.04)% and (4.79±1.03)% respectively. The differences of the survival rate of RGC between the two groups were significant (t=3. 144, 11.378; P<0.01). Conclusion BDNF-GFP fusion plasmid can express a fusion protein which emit green fluorescence and has the biological activity of BDNF.     

抗重组人组织因子途径抑制物1单抗抑制rhTFPI-1的抗凝作用

目的研制抗重组人组织因子途径抑制物1单克隆抗体(rhTFPI-1 M cAb),了解其对rhTFPI-1抗凝活性的抑制作用。方法将分泌rhTFPI-1 M cAb的杂交瘤细胞注入经降植烷预处理的Balb/C小鼠腹腔中,诱生腹水。腹水先经硫酸铵沉淀处理,再用rprote in A亲和层析柱进一步纯化。对纯化后的单克隆抗体进行SDS-PAGE检测和W estern b lot分析。并用发色底物法测定rhTFPI-1 M cAb对rhTFPI-1的活性抑制。结果纯化后的抗rhTFPI-1 M cAb经SDS-PAGE检测,其纯度为98%;W estern b lot分析显示其能特异识别rhTFPI-1抗原。发色底物法检测结果表明,其能有效阻断rhTFPI-1的抗FVIIa/TF活性,M cAb浓度为8 mg/L时FVIIa/TF剩余活性达到86%;但对rhTFPI-1的抗FXa活性作用不明显,M cAb浓度为80 mg/L时FXa的剩余活性为48.4%。结论rhTFPI-1 M cAb可明显抑制rhT-FPI-1活性,阻碍rhTFPI-1对TF/FVIIa的抑制活性。纯化后的rhTFPI-1 M cAb的各项鉴定指标均较为理想,rprote inA亲和层析柱纯化方法简便易行值得推广。     

11q24-q25缺失2例临床表型及文献复习

目的应用全基因组微阵列芯片平台,对临床发现的多发性畸形患儿进行全基因组拷贝数变异（CNVs）的检测,并寻找基因型与临床表型的关系。方法采用cytogenetic whole genome芯片筛查全基因组CNVs,针对发现的CNVs进行分析,参照国际基因组CNVs多态性数据库除外正常人群多态性CNVs。结合本研究2例与已报道的Jacobsen综合征（JBS）患儿的临床表型进行比较。结果 2例患儿SNP芯片分析为11q24-q25缺失（7.5和5.6Mb）,均为末端的非单纯性缺失,例1存在12号染色体短臂的较大片段重复（11.5Mb）,例2存在11号染色体短臂的大片段重复（32.5Mb）。2例共同缺失的部分均为JBS的关键区段,但临床表型与已报道的JBS患儿有所区别。2例均表现为头面部畸形、心血管系统异常和头颅影像学异常,均未发现血液系统异常。例1还表现为隐睾,例2表现为脾肿大。结论对临床上难以诊断的多发性畸形可采用全基因组CNVs检测,以帮助明确诊断,对于丰富这一区段临床表型信息具有重要意义,尤其针对罕见疾病,更多的相似报道的后续出现,才能使建立表型-基因型关联性成为可能。