脑源性神经营养因子-绿色荧光蛋白融合基因载体的构建、鉴定及初步应用研究

目的 构建脑源性神经营养因子(BDNF)绿色荧光蛋白(GFP)融合表达质粒,观察其融合蛋白的特性.方法 将BDNF cDNA片段插入pcDNA3.1/NT-GFP-TOPO真核表达质粒,使其与GFP同处一个阅读框架中,测序鉴定后,转染培养的雪旺细胞,用免疫组织化学和蛋白质印迹(Western botting)观察外源性目的 蛋白的表达情况,并用该质粒活体转染视神经切断的大鼠模型,观察所表达外源性蛋白的神经保护作用.结果 测序证实质粒构建成功.Western botting结果 显示.BDNF-GFP融合蛋白表达一相对分子质量为41×103大小条带.荧光显微镜下可见BDNF-GFP转染的细胞发出绿色荧光,免疫组织化学染色后,可见绿色荧光与红色荧光完全重合.转染BDNF-GFP质粒和GFP质粒的大鼠视神经切断术后7d存活视网膜神经节细胞(RGC)分别为(1201±286)、(482±151)个/mm2,存活百分比分别为(51.39±12.24)%和(20.62±6.46)%;28 d时存活的RGC分别为(715±71)、(112±24)个/mm2,存活百分比分别为(30.59±3.04)%和(4.79±1.03)%.两组存活百分比比较,差异有统计学意义(t=3.144,11.378;P<0.01).结论 BDNF-GFP融合表达载体可以转录翻译为一融合蛋白,该蛋白可自发绿色荧光,并具有BDNF的生物学活性.     

川芎嗪对肺心病急性加重期患者血浆血小板聚集率、血栓素B_2、6-酮-前列腺素F_(1α)、血管性假血友病因子及血气的影响

目的 :研究大剂量川芎嗪对肺心病急性加重期患者血小板功能和血管内皮细胞功能及血气的影响。方法 :将 5 6例肺心病急性加重期患者分为川芎嗪治疗组 ( 30例 )和对照组 ( 2 6例 ) ,分别于治疗前后采用比浊法、酶标法等测定血小板聚集率 (PAR)、血栓素B2 (TXB2 )、6 酮 前列腺素F1α( 6 keto PGF1α)、血管性假血友病因子 (vWF)、动脉血氧分压 (PaO2 )和二氧化碳分压 (PaCO2 )、氧饱和度 (SaO2 )水平。结果 :川芎嗪治疗组PAR、vWF、TXB2 、TXB2 / 6 keto PGF1α和PaCO2 明显下降 (P <0 0 5 ,P <0 0 1) ,6 keto PGF1α,PaO2 和SaO2 明显上升 (P <0 0 1,P <0 0 5 ) ,对照组仅PaCO2 下降 (P <0 0 5 )。结论 :大剂量川芎嗪具有抗血小板、保护血管内皮细胞的作用 ,使PaO2 、SaO2 升高 ,PaCO2 下降 ,且每日使用 80 0mg安全无副作用。     

脑梗塞后遗症患者凝血、抗凝血和血小板功能的变化及Svate-3对其的治疗作用

本文拟从凝血、抗凝血和血小板功能等3个方面对脑梗塞后遗症患者进行研究,并同时观察抗栓酶-3(Svate-3)对其血液学的影响。 1 材料与方法 1.1 研究对象 48例正常对照组均经询问病史、体检及必要的辅助检查以排除心脑血管病及其他慢性疾病,其中男性28例,女性20例,平均年龄58岁。患者组58例,发病均在1年以上且有不同程度的后遗症,系1993年2月～1994年4月在我血栓中心住院病人,并均经CT证实。其中男性32例,女性26例,平均年龄61岁。诊断参照1986年中华医学第     

p53对胃癌细胞BGC823中Survivin基因表达的影响

目的 探讨p53基因对胃癌细胞株BGC823中Survivin基因表达的影响及其作用机制。方法 应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot技术检测胃癌细胞株BGC823中Survivin和p53基因表达情况；利用质粒pcDNA3．0-rpS3转染该细胞株。应用实时聚合酶链反应（PCR）和Western blot检测细胞在培养后不同时间点Survivin mRNA和蛋白表达水平。结果 确认了胃癌细胞株BGC823中Survivin和突变型p53基因的表达。受野生型p53质粒转染的胃癌细胞在培养16和24h后，Survivin mRNA和蛋白质水平呈明显下降趋势。结论 野生型p53在转染胃癌细胞株BGC823后可显著抑制后者Survivin基因的转录和表达。     

罕见病并不罕见

罕见病（rare diseases）又称孤儿疾病（orphan diseases）,是指发病率低、比较少见的疾病。2011年2月28日,上海医学会罕见病专科分会正式成立,这是中国第一个以罕见病防治为己任的专科学会,     

中国罕见病防治的机遇与挑战

1罕见病定义 罕见病的定义在不同国家是有差别的。美国定义为每年患病人数少于20万人（或发病人口比例〈1/5000）的疾病;欧洲定义为发病人口比例〈5/10000的疾病;日本定义为患病人数少于5万（或发病人口比例〈1/2500）的疾病;澳大利亚定义为患病人数少于2000例的疾病。     

基因重组葡激酶和重组链激酶溶栓作用的实验研究

目的:比较基因重组葡激酶和重组链激酶对脑血栓的溶化效果及对出凝血系统的影响。方法:制成猪血栓性脑栓塞模型,4h后分组自颈内动脉灌注基因重组葡激酶(rSak,0.2mg/kg)或重组链激酶(rSK,30000IU/kg),脑血管造影观察血栓是否溶化,测定凝血系统指标。结果:两实验组在用药后1.5h血管再通均高于对照组,rSak组在0.5h、1.0h的再通率高于rSK组。rSak组对纤维蛋白原、纤溶酶原影响小,凝血酶元时间、凝血酶时间延长的幅度小于rSK组。结论:基因重组葡激酶及链激酶能溶化脑血栓,但前者溶栓效果较好,对凝血功能影响较小。     

hTFPI-2的基因克隆表达及生物学性质研究

目的克隆人组织因子途径抑制物-2（human tissue factor pathway inhibitor-2，hTFPI-2）的编码基因，并在大肠杆菌中表达，获得有活性的目的蛋白。方法应用RT—PCR法从人胎盘总RNA中获得人组织因子途径抑制物也的编码基因，将该基因片段克隆至原核表达载体pETl9b中，转化表达宿主BL21，用异丙基-B—D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导目的蛋白的表达。获得的包涵体经离子交换法进行纯化，并使其在体外进行复性。采用发色底物法测定hTFPI-2对纤溶酶、胰蛋白酶的抑制作用；明胶酶谱法测定对基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）的抑制作用；采用人工基底膜法观察hTFPI-2对纤维肉瘤细胞侵袭能力的影响。结果成功获得了序列完全正确hTFPI-2的编码基因，hTFPI-2在大肠杆菌中以包涵体的形式获得高效表达，占细菌总蛋白的20％～30％。经纯化、复性后可得到纯度大于90％的目的蛋白。复性后的hTFPI-2具有抑制胰蛋白酶、纤溶酶、MMP-2和MMP-9的活性，同时亦具有抑制纤维肉瘤细胞HT-1080侵袭转移的能力。结论采用原核表达系统高效地获得了具有活性的hTFPI-2。     

缺血性脑中风急性期和恢复期纤溶功能的比较

缺血性脑中风急性期和恢复期纤溶功能的比较山东省交通医院（济南，２５００３１）许延路，马端，宗俊学，刘培强，高辉纤溶酶原（ＰＬｇ）、组织型纤溶酶原激活物（ｔＰＡ）和组织纤溶酶原激活物抑制物（ＰＡＩ）是人体纤溶系统的主要成分。目前许多研究认为纤溶功能的改...