汉防己甲素抑制翼状胬肉成纤维细胞增殖的研究

目的:观察汉防己甲素对体外培养的翼状胬肉成纤维细胞增殖抑制作用并探讨其机制,寻找治疗翼状胬肉和预防其复发的有效药物.方法:(1)倒置相差显微镜下观察不同浓度的Tet作用下,体外培养的翼状胬肉成纤维细胞形态的变化,并与丝裂霉素(Mitomycin,MMC)进行比较.(2)MTT比色法测定不同浓度的Tet作用48h对体外培养的翼状胬肉成纤维细胞增殖的抑制作用,并与MMC进行比较.(3)流式细胞仪检测不同浓度的Tet作用48h,体外培养的翼状胬肉成纤维细胞细胞周期的变化.结果:(1) Tet作用下,细胞胞体收缩,变圆,间隙增宽,药物浓度高时,细胞碎裂,浮起.0.1,0.2g/L MMC作用下大量细胞碎裂,溶解.(2)不同浓度的Tet作用48h对体外培养的翼状胬肉成纤维细胞的增殖均有明显的抑制作用(P＜0.01);0.1g/L与0.2g/L MMC、4×10-5 mol/L Tet与0.2g/L MMC对翼状胬肉成纤维细胞活性的影响无显著性差异(P＞0.05).Tet的IC50接近10-5mol/L(为0.848×10-5mol/L).(3)Tet作用下,翼状胬肉成纤维细胞周期中S期细胞增多,浓度越高,作用越明显.结论:汉防己甲素对翼状胬肉成纤维细胞的增殖具有明显的抑制作用,呈剂量依赖性,细胞分裂被阻止在S期(DNA合成期).可望用于对翼状胬肉的治疗.     

1378例角膜移植供体四种监控指标的总结分析

目的初步探讨角膜移植供体的血液监测的安全指标。方法使用ELASA和胶体金法检测1378份角膜供体的血清中HBsAg、抗-HCV、抗-HIV和梅毒抗体。结果在272份阳性血样中,共发现6份HIV初筛阳性、64份抗-HCV阳性、193份HBsAg阳性和39份梅毒抗体阳性;除244份为单一感染外,其它为2～3种病原体混和感染。结论角膜移植供体应进行HIV、HCV、HBV及梅毒检测,以预防这些疾病,特别是艾滋病的传播,保证受体安全,     

四种补益药方对光感受器细胞凋亡大鼠的治疗观察

目的观察临床常用的4种补益方剂对N-甲基-N-亚硝脲（MNU）诱导的光感受器细胞凋亡的影响。方法SD大鼠分为正常组、模型对照组、四物汤组、杞菊地黄汤组、四君子汤组和肾气丸组。TUNEL法检测光感受器细胞的凋亡，常规HE染色测量视网膜外核层的厚度。结果与模型对照组相比，四君子汤和肾气丸组大鼠在细胞凋亡和外核层厚度方面无差异，而四物汤和杞菊地黄汤组大鼠光感受器细胞凋亡百分率有不同程度下降，同时外核层厚度显著增厚。结论四物汤和杞菊地黄汤能抑制MNU诱导的光感受器细胞凋亡，且杞菊地黄汤疗效优于四物汤。     

形觉剥夺性近视豚鼠巩膜形态学观察

目的观察形觉剥夺性近视豚鼠眼后极部巩膜的改变。方法4周龄豚鼠14只,随机分为正常对照组(Ⅰ组),形觉剥夺(FD)组(Ⅱ组)。Ⅱ组豚鼠右眼采用半透明眼罩遮盖的方法建立形觉剥夺近视模型,2周后检测其屈光度、眼轴长,并观察后极部巩膜组织的光镜、电镜改变。结果2周后剥夺眼屈光度相对于对照眼及年龄匹配对照组分别为-3.1 D±1.60 D,-3.2 D±1.72 D(P<0.01)。剥夺眼眼轴相对于对照眼(7.90 mm±0.13 mm、7.87 mm±0.17 mm,P<0.01)和正常眼(7.90 mm±0.13 mm、7.70 mm±0.16 mm,P<0.05)明显延长。剥夺眼后极部巩膜组织变薄,胶原纤维直径变小,纤维间空间增大。结论形觉剥夺刺激豚鼠眼巩膜组织变薄,其改变与人类近视巩膜组织改变相似。     

体外HTLV-I Tax蛋白在Müller细胞中的靶蛋白分析

目的 观察体外人类嗜T淋巴细胞病毒(HTLV-I)Tax蛋白与Moiler细胞蛋白结合及其靶蛋白组成成分.方法 用含Tax蛋白eDNA的原核表达载体PGEX-3X-GST-Tax转化大肠杆菌,诱导表达并提取纯化GST-Tax融合蛋白;细胞外GST-Tax融合蛋白与Müller细胞蛋白结合,GS4B下拉(pull-down)与GST-Tax结合的蛋白;应用二维凝胶电泳、质谱分析(MALDI-Tof-Ms)和免疫印迹分析等方法分析鉴定结合的蛋白.结果 通过与对照组比较,在二维凝胶电泳上观察到多个差异蛋白质斑点,经质谱分析鉴定出10个差异蛋白质为Tax的候选靶蛋白,经免疫印迹,初步证实Tax蛋白能与ENO1相结合.结论 初步分离鉴定出Müller细胞中的ENO1等蛋白质可能为Tax蛋白的靶蛋白分子.     

汉防己甲素对人眼Tenon囊成纤维细胞表达细胞凋亡蛋白和转化生长因子的影响

背景 汉防己甲素(Tet)对体外培养的人眼Tenon囊成纤维细胞(TCFs)有抑制效应,但其作用机制尚不完全明确. 目的 观察Tet对体外培养的人眼TCFs中bax、bcl-2、转化生长因子β2(TGF-β2)蛋白表达的影响,探讨其可能的作用机制. 方法 收集健康供体眼球巩膜组织,用组织块培养法培养、分离TCFs,并进行传代,将第3代细胞以1×105个/ml的密度接种于培养板,采用光学显微镜和免疫组织化学法对培养细胞进行鉴定.培养24 h后,用培养液稀释Tet至浓度为1×10-5 mol/L,并加入培养孔中,对照组用1640培养液,继续培养24 h后冲洗固定,采用TUNEL法检测细胞的凋亡情况;采用免疫组织化学法检测bax、bcl-2、TGF-β2蛋白在TCFs中的表达.结果 培养的细胞形态学呈现成纤维细胞的特征,vimentin染色呈阳性反应.Tet组出现大量的TUNEL阳性细胞,而对照组TCFs未见明显凋亡细胞核出现.免疫组织化学检测表明,Tet组TCFs中bax、bcl-2、TGF-β2蛋白的表达率(A值)分别为0.577±0.009、0.430±0.012、0.341±0.017,对照组分别为0.320±0.015、0.819±0.021、0.624±0.014,Tet组bax的表达明显升高,bcl-2和TGF-β2的表达明显下降,差异均有统计学意义(t=33.277、-35.356、-28.093,P＜0.01).结论 Tet通过上调人眼Tenon囊成纤维细胞中bax的表达,下调bcl-2、TGF-β2的表达,从而抑制TCFs的增生.